血清7 種自身抗體檢測對肺癌的診斷價值

王耀娟， 高 菲， 于 亮， 馬 剛， 韓育寧， 張 錦， 張淑香

（1.寧夏醫科大學，銀川 750004； 2.寧夏醫科大學總醫院胸外科，銀川 750004； 3.寧夏醫科大學總醫院呼吸與危重癥醫學科，銀川 750004）

肺癌是威脅人類健康的重大疾病，2018 年全世界約有210 萬肺癌新發病例和180 萬死亡病例[1]，肺癌病死率高的主要原因為約60%的患者被確診時已經處于中晚期，其5 年生存率僅為5%～20%[2]，因此，早期肺癌診斷變得至關重要。目前國際上推薦使用低劑量計算機斷層掃描（low-dose computed tomography，LDCT）對高危患者進行篩查。LDCT 診斷肺癌的敏感度為93.8%，可使肺癌病死率下降20.3%，但LDCT 的特異性較差，假陽性率高達94.5%，這就導致部分良性病變患者遭受了不必要的胸部手術，喪失部分肺功能[3]。另外，肺結節在隨診過程中，重復CT 掃描增加了患者射線暴露及心理、經濟負擔。因此，迫切需要找到能輔助LDCT 鑒別肺部良、惡性腫瘤的方法。有研究[4]發現，在CT 發現肺癌前5 年就能在患者血液中檢測到腫瘤相關自身抗體（tumor associated autoantibodies，TAABs）。Ren 等[5]篩選出了中國人群的7 種自身抗體（P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE），根據其研究結果，中國食品藥品監督管理局批準7 種自身抗體檢測試劑盒上市，但其輔助肺癌診斷效能需要進一步探究，且本地區也缺乏此類相關報道。因此，本文探討7 種自身抗體對肺癌的診斷價值，以期為肺癌的鑒別診斷提供一定參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集 2019 年 10 月至 2020 年 10 月寧夏醫科大學總醫院收治的肺癌患者77 例（肺癌組），均經病理學確診；同期收治肺部良性病變患者33 例（對照組）。肺癌組男性46 例，女性31 例，年齡 31～82 歲，平均年齡（59.57±10.78）歲；其中腺癌49 例，鱗癌18 例，小細胞癌10 例；根據2017年第8 版肺癌分期標準對肺癌組患者進行TNM分期，Ⅰ/Ⅱ期 39 例，Ⅲ/Ⅳ期 38 例；所有肺癌患者均為初診患者，診斷前未接受任何抗癌治療或手術治療。對照組男性17 例，女性16 例，年齡 36～75 歲，平均年齡（55.30±9.37）歲；其中 17例炎性假瘤，6 例結核瘤，2 例機化性肺炎，7 例錯構瘤，1 例硬化性肺泡細胞瘤。本研究經寧夏醫科大學總醫院倫理委員會批準，所有研究對象均知情同意。排除標準：（1）心、肝、腎重要器官的感染、內分泌及有關的代謝疾病者；（2）自身免疫性疾病者；（3）其他系統腫瘤病史和家族史者。

1.2 樣本收集與保存

所有研究對象均在接受治療前空腹采集靜脈血4 mL，放入4 ℃恒溫離心機，以3000 r·min-1的轉速離心10 min 后，取血清并將其分裝到1.5 mL EP 管中，儲存在-80 ℃條件下備用。

1.3 檢測方法

本研究選購由杭州凱保羅生物科技有限公司生產的7 種自身抗體檢測試劑盒（P53、GAGE7、PGP9.5、CAGE、MAGEA1、SOX2、GBU4-5），通過酶聯免疫吸附（enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA）法，使用美國賽默飛世爾科技公司生產的Varioskan Flash 多功能酶標儀，讀取酶標儀450 nm 的吸光度值，根據劑量-反應曲線計算納入對象血清樣本中7 種自身抗體濃度，嚴格依照試劑盒說明書要求進行操作。

1.4 檢測結果判讀

7 種自身抗體的參考截斷值是經過大樣本、多中心臨床試驗[5]得到的，見表1。單個自身抗體檢測的濃度值如高于其參考截斷值，則判定為陽性。聯合檢測時，如7 種自身抗體任意1 種檢測為陽性，則判定7 種自身抗體聯合檢測為陽性。

表1 7 種自身抗體的參考截斷值（U·mL-1）

1.5 統計學方法

運用 SPSS 24.0 統計學軟件對數據進行分析，計數資料以頻數和百分比表示，組間比較采用卡方檢驗；若計量資料服從正態分布，用均數±標準差（）表示，組間比較采用獨立樣本t 檢驗。7 種自身抗體濃度不服從正態分布，但多個指標間存在相關性，組間差異比較采用多變量方差檢驗。根據7 種自身抗體濃度值繪制ROC 曲線。P≤0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同臨床特征肺癌患者自身抗體聯合檢測陽性表達情況

不同年齡、性別、吸煙史、病理類型、臨床TNM 分期、病灶大小的肺癌組患者自身抗體聯合檢測陽性率差異均無統計學意義（P 均>0.05），見表2。

表2 不同臨床特征肺癌患者的自身抗體聯合檢測陽性表達情況［例（%）］

2.2 兩組患者7 種自身抗體水平比較

肺癌組患者的 P53、GAGE7 和 MAGEA1 自身抗體水平均高于對照組患者（P 均<0.05），兩組患者 PGP9.5、SOX2、GBU4-5 和 CAGE 自身抗體水平差異均無統計學意義（P 均>0.05），見表3。

表3 肺癌組與對照組患者7 種自身抗體水平的比較（U·mL-1）

2.3 兩組患者7 種自身抗體聯合檢測陽性率比較

肺癌組患者7 種自身抗體聯合檢測的陽性率高于對照組（χ2=9.351，P=0.002），見表 4。

表4 兩組患者7 種自身抗體聯合檢測陽性率比較

2.4 7 種自身抗體單獨及聯合檢測對肺癌的診斷效能

根據7 種自身抗體濃度進一步繪制ROC 曲線，單個自身抗體及7 種自身抗體聯合檢測ROC曲線下面積（AUC）均大于0.5，7 種自身抗體聯合檢測AUC 為0.795。單個自身抗體的靈敏度均較低，低于7 種自身抗體聯合診斷的靈敏度（49.35%）。單個自身抗體的特異度均高于85.00%，PGP9.5、GAGE7、MAGEA1 和 CAGE 的特異度可達100.00%，7 種自身抗體聯合診斷的特異度為81.82%，見圖 1、表 5。

表5 7 種自身抗體對肺癌的診斷效能

圖1 7 種自身抗體單獨及聯合診斷肺癌的ROC 曲線

3 討論

多項研究[6-7]發現，肺癌患者血清中存在TAABs，并且與其在健康人群中的水平存在差異。2012 年英國國家醫療服務體系（NH）使用Early－CDT?-Lung（P53、NYESO-1、GAGE、GBU4-5、SOX2、HuD 和 MAGEA4）在高危人群中初步得到血清7 種自身抗體的靈敏度達81%，特異度達91%[8]。

人類蛋白組學的研究[9-10]發現，多種自身抗體聯合檢測能夠使診斷準確性進一步提高，且可以有效輔助CT 診斷肺癌。英國一項研究[11]發現，肺癌患者血清中 P53、c-myc、HER2、NYESO-1、GAGE、MUG1 和 GBU4-5 單個自身抗體的靈敏度為5%～36%，特異度為96%～100%；7種自身抗體聯合診斷的靈敏度達76%，特異度達92%。由于人類肺癌基因的異質性，國外研究中使用的自身抗體組合在中國人群中的篩查結果并不理想。Ren 等[5]對中國人群進行了另外7 種自身抗體（P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE）的研究，發現肺癌患者7 種自身抗體濃度高于肺部良性疾病及健康人群，靈敏度為61%，特異度為90%。

本文使用了與Ren、周彩存等[5]研究相同的7 種自身抗體，結果表明，P53、GAGE7 和 MAGEA1抗體濃度水平在肺癌患者中均高于肺部良性病變患者，其余抗體無差異。采用相同的7 種自身抗體，Zhang 等[9]的研究發現，P53、SOX2、GAGE7和MAGEA1 抗體濃度水平在肺癌患者中均高于肺部良性病變的患者，其余抗體無差異。Ren 等[5]的研究中僅發現肺癌組患者GAGE7 抗體水平與對照組無差異，其余6 種抗體水平均高于對照組。研究結果存在較大差異的主要原因可能與納入樣本量及研究人群的異質性有關，也可能與研究對象的免疫狀態相關，免疫狀態低下的人群，其抗體水平達不到較高水平。

本研究中，單個自身抗體診斷肺癌的靈敏度均較低，可能原因為：肺癌的發病是由多個基因、多種機制同時作用的結果，不同靶抗原參與針對不同腫瘤的免疫反應，因此僅使用單個自身抗體診斷肺癌，存在局限性。7 種自身抗體聯合診斷肺癌的靈敏度為49.35%。Du 等[12]研究發現，7 種自身抗體聯合診斷肺癌的靈敏度為56.53%。Wang 等[13]的研究中，7 種自身抗體聯合診斷的靈敏度為36.7%。上述研究結果表明，7 種自身抗體單獨或聯合診斷肺癌的靈敏度均偏低。

本研究結果顯示，7 種自身抗體檢測肺癌的特異度和陽性預測值均較高，PGP9.5、GAGE7、MAGEA1 和CAGE 的特異度可達100.00%。當CT 發現肺部異常結節時，如果抗體檢測呈陽性結果，則高度懷疑肺癌，從而可及時地進行臨床干預。7 種自身抗體陽性率與肺癌患者的臨床分期、病理學類型和病灶大小無關，這與Huo 等[14]的研究結果一致，可能原因為7 種自身抗體在肺癌發生早期就有升高，且穩定存在于肺癌發展的整個過程中。

綜上所述，7 種自身抗體聯合診斷肺癌的靈敏度較低，特異性度較高，可作為CT 診斷肺癌的輔助手段。本研究中樣本量較少，因此需要大樣本量、多中心的研究進一步確定7 種自身抗體對肺癌的診斷價值。