牛結核桿菌病的研究進展

郭志文，武帥

（1.呂梁市動物疫病預防控制中心 山西呂梁 033000；2.呂梁市飼料獸藥工作站 山西呂梁 033000）

1 病原

該病的病原為結核分支桿菌，該病原隸屬于分枝桿菌科分枝桿菌屬，為革蘭氏陽性小桿菌，抗酸染色試驗結果呈陽性。結核分支桿菌可在患病牛的組織和糞便中檢查到，常成團存在，不易被分離出來。其菌落形態呈無色透明的半球形，隨著培養時間的延長，可見菌落顏色變暗，呈現出乳頭樣外觀。結核分支桿菌對外界環境的刺激具有很強的抵抗性，正常條件下結核分支桿菌可在環境中存活1年左右，對結核分支桿菌最佳的培養溫度為38～40℃，63℃中可存活0.5h，結核分支桿菌對3%的甲醛消毒液敏感。

2 流行病學

盡管牛分枝桿菌可在環境中生存數月，但其主要通過感染牛產生的氣溶膠傳播。已有研究證實牛通過氣溶膠感染只需要不超過10個病原體，而經口途徑感染則需要1,000萬個病原體。奶牛感染牛分枝桿菌的風險較高。這是因為在擠奶及冬季圈養時奶牛有較多相互密切接觸的機會。犢牛可以通過攝入被污染的牛奶發生感染，而攝入感染可能是該病傳播給豬和貓的途徑。牛分枝桿菌野生動物儲存宿主是一些國家的放牧牛發生感染的主要來源。這些野生宿主主要包括歐洲的獾、新西蘭的刷尾負鼠、非洲的岬水牛和其他反芻動物。野生或飼養的鹿都特別易感，并可能作為感染牛的儲存宿主。野生動物作為儲存宿主導致感染發生的相對重要性取決于若干因素，包括該動物是否是這個病原的維持宿主或偶爾感染的宿主、這種動物感染后的排菌量，以及與牛群的接觸程度等。澳大利亞野豬就是牛分枝桿菌的一個偶爾感染的宿主。如果它們不與感染的牛接觸，那么它們就不能維持這個細菌的感染。野豬經口途徑感染，出現含有很少牛結核桿菌的小病灶，因而被視為牛群低風險的感染源。相比之下，獾則是牛分枝桿菌的維持宿主，病變主要發生在獾的肺部，并導致感染性氣溶膠的產生。此外，在獾患病晚期其與牛群的接觸有所增加，因為此時的獾在白天會表現出接近放牧牛群的異常行為。

3 致病機理

牛分枝桿菌的毒力涉及它在宿主巨噬細胞的生存和復制的能力。該菌特異性的毒素尚未發現，其毒力是許多致病因素協同作用的結果。這該種分枝桿菌通過呼吸道進入宿主體內后，被巨噬細胞和樹突細胞吞噬。分枝桿菌被樹突細胞吞噬后被帶到附近的淋巴結。宿主對這種細菌感染的初始分反應是非特異性的，是由分枝桿菌細胞壁中的蠟質和脂質引發的。該菌干擾吞噬體-溶酶體融合作用，使其在巨噬細胞的吞噬體中存活下來，這可能是通過延緩吞噬體成熟，以及使溶酶體消化失敗實現的。死亡的巨噬細胞釋放出的細菌被周圍活的吞噬細胞所吞噬。吞噬了分枝桿菌的巨噬細胞的遷移可以引起這種感染在體內的擴散。

4 臨床癥狀

感染的牛只有的在疾病晚期才出現臨床癥狀，且有廣泛病變的牛仍可能表現為健康狀態。隨著病情的發展，身體損耗癥狀可能會變得明顯。在肺結核晚期，動物可能最終發展為咳嗽和間歇性發熱。受感染的乳腺組織部分可能會出現明顯硬化，并伴有乳前淋巴結腫大。在該病早期階段，尸檢可能難以觀察到一些微小病變。這些病變主要由改變了的巨噬細胞即上皮樣細胞聚集而形成。由巨噬細胞融合形成的多核朗罕氏巨細胞也可能出現。在陳舊的病灶中，早期纖維性增生導致結核包樣結節的形成，其核心有一個干酪樣壞死區域（外觀與軟奶酪相似）。典型的結核性結節特征性的組織學外觀。

5 診斷程序

結核菌素試驗是標準的?；铙w檢驗程序。該檢測方法是基于結核菌素引起的遲發型超敏反應，也適用于豬和飼養的鹿的檢驗。牛在感染后30～50d通常能檢測到結核菌素的陽性反應。結核菌素是由分枝桿菌產生的，也稱為純蛋白衍生物。檢測時，進行PPD皮內注射來檢測動物敏感性。結核菌素試驗主要有兩種方法：

1）PPD皮內試驗，即在尾部皺褶處皮內注射0.1mL牛PPD。72h后檢查注射部位，陽性反應的特點是出現硬塊或水腫隆起。

2）雙PPD比較皮內試驗，即將0.1mL禽PPD和0.1mL牛PPD分別皮內注射至頸部側面相距12cm的位點。使用游標卡尺分別測量結核菌素注射前和注射后72h注射部位的皮膚厚度。注射牛PPD部位的皮膚厚度超過注射禽PPD部位的皮膚厚度4mm或以上，即可認為發生了感染，這樣的牛被稱為陽性反應牛。結核菌素試驗中假陽性結果的發生可能是由于動物被不是牛分枝桿菌的分枝桿菌所致敏。在假陽性發生率較高的國家，人們更傾向于比較皮內試驗，而不是單一皮內試驗。

結核菌素試驗中假陰性結果也可能發生，其原因是：在牛產生針對結核菌素的遲發型超敏反應能力之前（在感染后30d內）接受結核菌素測試，牛不發生此類超敏反應。有些感染牛結核分枝桿菌的牛對結核菌素不產生遲發型超敏反應，即所謂的“無反應性”，具體的機制尚不明確，這些牛可能正處于結核病進展期。注射結核菌素后可能出現短暫的脫敏現象，通常在60d內恢復反應性。由于應激導致的免疫抑制，包括分娩后的初期或使用免疫抑制藥物，可能會導致結核菌素試驗出現假陰性。

6 牛分枝桿菌的分離要求

1）樣本的去污處理，以消除快速增長的污染的雜菌。磨碎的樣品用2%～4%的氫氧化鈉或5%的草酸處理30min，再用酸或堿進行中和。然后，離心棄去上清液，沉淀中含有濃縮的分枝桿菌，用于分離培養。

2）在無甘油、但含有0.4%丙酮酸鈉的改良羅氏培養基的斜面上，接種上述離心沉淀，在37℃有氧條件下培養8周。

3）分離株鑒定標準：生長速率和菌落形態特征，菌落涂片呈抗酸染色陽性，和細菌的生化特性。

7 加強環境管理

牛的飼養方式不管是采取室內還是室外飼養，都要注意保持欄舍的干燥、干凈、通風、舒適，冬暖夏涼。欄舍內的墊料應有30cm厚，最好離開地面5～10cm，墊料必須及時更換，注意做好消毒，最好天天消毒。冬季室外飼養的犢牛要注意防風，可用墊料草捆或飼料包裝袋做成擋風墻，有條件的牛場在犢牛出生后及時采用保溫燈，穿上棉馬甲等保暖。室內飼養的犢牛既要保溫又要通風，防止室內氨氣等污濁氣體濃度過高。夏季要注意防曬，及時搭建遮蔭網，增加飲水，防止中暑等。█