板藍根飲片炮制工藝研究*

李 恒，陳江平，甘力帆，雷玉婧，姚曉璇，劉燎原

（廣東一方制藥有限公司，廣東省中藥配方顆粒企業重點實驗室，廣東 佛山 528244）

板藍根，別名靛根、藍靛根、靛青根等，為十字花科植物菘藍Isatis indigotica Fort.的干燥根[1]。板藍根始載于《神農本草經》，列為上品，其性寒，味苦，歸心、胃經，是一味清熱解毒、涼血利咽的臨床常用中藥，用于瘟疫時毒，發熱咽痛，溫毒發斑，痄腮，爛喉丹痧，大頭瘟疫，丹毒，癰腫[1]。現代研究表明，板藍根主要含有核苷類、有機酸類、氨基酸類、生物堿類等成分，核苷類成分為板藍根抗病毒作用的有效部位之一，尿苷、腺苷、鳥苷均為板藍根中的核苷類成分[2-4]。生物堿類中的（R，S）-告依春也具有抗病毒的作用，尤其對流感病毒具有顯著的抑制活性[5-7]。

2015年版《中華人民共和國藥典》一部“板藍根”項下飲片炮制方法為“除去雜質，洗凈，潤透，切厚片，干燥”[1]，缺乏具體的工藝參數，不利于板藍根飲片的質量控制。有關板藍根飲片炮制工藝研究的質量評價指標均較單一[7-8]，鮮見多指標綜合評價板藍根飲片炮制工藝的報道。主成分分析（principal component analysis，PCA）是基于化學、數學和計算機科學聯合交叉應用的多元分析方法，由PEARSON[9]在1901年首次提出，PCA的本質就是將數據的多元變量抽取出少量主成分，從而在能保留原始數據中絕大多數信息的情況下，使用盡可能少的主成分來表征復雜的原始數據[10-12]，其在中藥炮制研究中有著非常廣泛的應用[13-15]。本研究以外觀性狀、水分、浸出物、（R，S）-告依春含量和4個特征峰的峰面積為評價指標，結合主成分分析法，綜合評價不同炮制工藝對板藍根飲片質量的影響，優選板藍根飲片炮制工藝，為板藍根飲片規范炮制及質量提升提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 試藥板藍根藥材（批號：YM1906006，產地：陜西）購自陜西生生中藥飲片有限責任公司，經廣東一方制藥有限公司魏梅主任藥師鑒定為十字花科植物菘藍Isatis indigotica Fort.的干燥根。

1.2 試劑對照品尿苷（批號：wkq18042002，純度≥98%，四川省維克奇生物科技有限公司）；腺苷（批號：110879-201703，純度99.7%）、鳥苷（批號：111977-201501，純度93.6%）、（R，S）-告依春（批號：111753-201706，純度100%）對照品（中國食品藥品檢定研究院）；甲醇、磷酸（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司）；其他試劑均為分析純；水為超純水。

1.3 主要儀器Waters Arc型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；ME204E型萬分之一天平、XP26型百萬分之一天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；KQ-500DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Milli-Q Direct型超純水系統（默克股份有限公司）；DHG-9146A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）；C21-WK2102型多功能電磁爐（美的集團有限公司）。

2 方法與結果

2.1 板藍根飲片的制備參考2015年版《中華人民共和國藥典》一部“板藍根”項下方法[1]，本研究確定以下3種飲片炮制方法。A法：取板藍根藥材適量，除去雜質，分別置于10倍投料量的冷水中浸泡1、2、4、8 h（樣品編號依次為：A1、A2、A3、A4），切厚片，50℃烘箱干燥12 h，篩去碎屑；B法：取板藍根藥材適量，除去雜質，分別潤制2、4、8、12、24、36 h（樣品編號依次為：B1、B2、B3、B4、B5、B6），切厚片，50℃烘箱干燥12 h，篩去碎屑；C法：取板藍根藥材適量，除去雜質，分別蒸制0.5、1、2、3 h（樣品編號依次為：C1、C2、C3、C4），切厚片，50℃烘箱干燥12 h，篩去碎屑。按上述不同炮制工藝各制備3批樣品，不同炮制工藝的板藍根飲片外觀性狀見表1。由結果可知，采用冷水浸泡法和潤制法制得的飲片，隨著炮制時間的增加，切制時會出現翹片，部分樣品產生異味，因此需要合理選擇炮制時間。

表1 不同炮制工藝的板藍根飲片外觀性狀

2.2 色譜條件[16]色譜柱Agilent TC-C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇（A）-0.1%磷酸溶液（B）為流動相，梯度洗脫（0~5 min，1%A；5~30 min，1%→7%A；30~40 min，7%A），檢測波長為245 nm，流速為0.8 mL/min，柱溫為30℃，進樣量為10 μL。

2.3 對照品溶液的制備取尿苷、腺苷、鳥苷和（R，S）-告依春對照品適量，精密稱定，加甲醇制成含尿苷、腺苷、鳥苷和（R，S）-告依春各15.778、17.647、20.218、40.120 μg/mL的混合對照品溶液，即得。

2.4 供試品溶液的制備取板藍根飲片粉末（過四號篩）約1.0 g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，精密加入水50 mL，稱定質量，煎煮2 h，放冷，再稱定質量，用水補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.5 精密度試驗取“2.3”項下對照品溶液，按“2.2”項下色譜條件連續進樣6次，計算峰面積及保留時間的RSD。結果4個色譜峰峰面積的RSD分別為0.87%、0.54%、0.79%、0.69%，保留時間RSD分別為0.13%、0.18%、0.12%、0.15%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗取“2.4”項下供試品溶液，分別于制備0、2、4、6、8、12 h后按“2.2”項下色譜條件測定，計算峰面積及保留時間的RSD。結果4個色譜峰峰面積的RSD分別為2.41%、0.15%、0.71%、0.93%，保留時間RSD分別為0.24%、0.29%、0.19%、0.26%，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.7 重復性試驗取同一板藍根飲片，按“2.4”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件測定，計算峰面積及保留時間的RSD。結果4個色譜峰峰面積的RSD分別為4.40%、4.12%、2.78%、4.68%，保留時間RSD分別為0.22%、0.30%、0.21%、0.22%，表明該方法重復性良好。

2.8 樣品分析取不同炮制工藝飲片，按“2.4”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件測定，記錄色譜圖。以4種對照品為對照，對不同炮制工藝的板藍根飲片成分進行比較，得到HPLC圖譜見圖1。由圖1可知，板藍根藥材及不同炮制工藝的飲片中均含有尿苷、腺苷、鳥苷和（R，S）-告依春4種成分。因此，本研究采用共有峰按取樣量折合的峰面積為指標，比較板藍根炮制前后的成分變化。板藍根藥材及不同炮制工藝飲片的4個峰的平均色譜峰峰面積見表2。

表2 板藍根藥材及不同炮制工藝飲片共有峰平均峰面積結果（n=3）

圖1 板藍根藥材及不同炮制工藝飲片HPLC圖

2.9 水分、浸出物和（R，S）-告依春含量的測定水分測定法按照2015年版《中華人民共和國藥典》四部通則0832項下的烘干法，醇溶性浸出物測定法按照2015年版《中華人民共和國藥典》四部通則2201項下的熱浸法（溶劑為45%乙醇）[17]和2015年版《中華人民共和國藥典》一部板藍根項下含量測定方法[1]對板藍根藥材和飲片樣品的水分、浸出物和（R，S）-告依春含量進行測定。由結果可知，板藍根藥材及不同炮制品水分、浸出物和（R，S）-告依春含量分別在6.8%～12.1%、26.8%～45.9%、0.032%～0.234%之間，均符合《中華人民共和國藥典》規定。（見表3）

表3 板藍根藥材及不同炮制工藝飲片的水分、浸出物和（R，S）-告依春含量測定結果（n=3）

2.10 主成分分析使用SPSS 19.0軟件，以浸出物、生物堿類成分（R，S）-告依春含量及核苷類成分尿苷、腺苷、鳥苷的平均峰面積為變量，以特征值和累計貢獻率為判定依據，對不同炮制方法的板藍根飲片進行主成分分析。根據降維結果，共計算出2組主成分PC1和PC2，特征值分別為3.218、1.072。各成分方差貢獻值分別為64.361%、21.432%，累計貢獻值達到85.793%，具有較強的代表性，可用來評價板藍根不同炮制工藝飲片的質量。

根據各因子載荷矩陣及特征值計算得分系數，進一步得到PC1、PC2及總和得分（Y）方程式：

式中：ZX1、ZX2、ZX3、ZX4、ZX5分別為浸出物、（R，S）-告依春、尿苷、腺苷、鳥苷的標準化值。

利用上式計算不同炮制工藝的板藍根飲片的綜合得分，并按結果高低進行排序（見表3），得分越高，表示此炮制工藝條件下的板藍根飲片質量越好。由圖2和表4可知，PC1主要反映了尿苷、腺苷、鳥苷和（R，S）-告依春的信息，PC2主要反映了浸出物的信息。不同炮制工藝的板藍根飲片綜合得分為：B4＞B2＞A3＞B5＞A4＞A2＞B6＞B3＞C4＞C3＞C2＞A1＞C1＞B1。結合外觀性狀，板藍根飲片最優炮制工藝為潤制12 h，切厚片，50℃干燥12 h。

表4 因子載荷矩陣

圖2 主成分因子分析圖

2.11 驗證試驗取板藍根藥材適量，采用“潤制12 h，切厚片，50℃干燥12 h工藝”平行加工飲片樣品3份，分別按“2.4”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件測定，尿苷、腺苷、鳥苷和（R，S）-告依春的平均峰面積分別為170 052、265 843、286 422、289 987（n=3）。同時按2015年版《中華人民共和國藥典》板藍根項下相關方法測定，水分、浸出物和（R，S）-告依春的平均含量分別為9.0%、36.9%、0.171%（n=3）。

3 討 論

從外觀性狀判斷，冷水浸泡4、8 h（A3、A4）和潤制12 h（B6）的板藍根飲片有明顯異味，且切制時出現翹片，蒸制2、3 h（C3、C4）的板藍根飲片切制時也出現翹片。原因可能是由于藥材過度浸潤，致使藥材所吸水分過多，甚至造成藥材變質發黏，不易切制[18]。上述5種炮制工藝條件下的板藍根飲片水分、浸出物及（R，S）-告依春含量均符合2015年版《中華人民共和國藥典》板藍根項下相關要求，但其外觀性狀與標準存在一定差異，因此中藥飲片炮制應關注外觀性狀，其是中藥飲片質量評價的基礎。

板藍根中生物堿類成分（R，S）-告依春和核苷類成分尿苷、腺苷、鳥苷均具有明顯的抗病毒活性，可干擾病毒核酸的合成[19-21]。本研究結果顯示，不同炮制工藝的板藍根飲片中尿苷、腺苷、鳥苷、（R，S）-告依春的峰面積及浸出物含量均比原藥材有明顯增加，其抗病毒活性成分的含量有較大提升，更有利于發揮臨床療效。飲片外觀性狀結合綜合評分結果顯示，潤制法炮制的板藍根飲片整體質量較好，可作為板藍根飲片的最優炮制工藝。