蘭紫解毒顆粒的制備工藝優(yōu)化及質量控制*

楊美娜，王世信，丁洪青，閆國強，李寶芬，劉愛朋

（河北省滄州中西醫(yī)結合醫(yī)院，河北 滄州 061001）

蘭紫解毒糖漿為河北省滄州中西醫(yī)結合醫(yī)院院內制劑，屬純中藥制劑，源自崔樹德主編《中藥大全》中的抗毒湯，經(jīng)加減化裁而來，全方由板藍根、大青葉、山豆根、茵陳、紫草、金銀花6味中藥組成[1]。方中板藍根味苦性寒，清熱解毒，為君藥；大青葉、山豆根清熱解毒，涼血利咽，輔助君藥加強清熱解毒之效，為臣藥；茵陳清熱利濕，紫草清熱涼血解毒，二者共為佐藥；金銀花辛涼微苦，清熱解毒，體輕可上達發(fā)散為使藥，以上諸藥配伍合用，共奏清熱解毒之功效。蘭紫解毒糖漿為我院治療流感、乙型腦炎、病毒性肺炎、流行性腮腺炎、手足口病等病毒感染性疾病的首選藥物，長期臨床應用以來療效確切，安全可靠，無不良反應，在兒童患者中應用尤為廣泛[2-3]。然而，蘭紫解毒糖漿劑在臨床使用中存在不易保存，運輸攜帶不方便等缺點，且缺乏全面的質量控制，基于此，我院擬對糖漿劑進行劑型優(yōu)化，制成質量穩(wěn)定，貯存、運輸、攜帶方便的蘭紫解毒顆粒劑。為更好地控制藥品質量，確保制劑安全有效，穩(wěn)定可控，本實驗對蘭紫解毒顆粒進行了制備工藝優(yōu)化和質量標準研究，具體匯報如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器LC-10AVPPlus島津高效液相色譜儀，標配Shim-pack VP-ODS色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）（日本島津公司）；AG-135型電子分析天平（Mettler Toledo公司）；KQ3200 DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；DZF-6050型真空干燥箱（上海博訊實業(yè)有限公司）；AriumRcomfortⅡ超純水系統(tǒng)（德國賽多利斯公司）。

1.2 試藥處方中藥材均購自安國市常興藥材有限公司，并經(jīng)滄州市藥檢所鑒定為正品。（R，S)-告依春對照品（北京萬佳首化生物科技有限公司，批號：SH-281353）；綠原酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110753-202018）；可溶性淀粉、糊精（藥用級，國藥集團化學試劑有限公司）；乳糖、木糖醇、甘露醇（藥用級，江蘇西典藥用輔料有限公司）；乙腈、磷酸（色譜純，德國Merck公司），水為實驗室自制超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 蘭紫解毒顆粒處方組成板藍根600 g，大青葉600 g，山豆根360 g，紫草600 g，茵陳360 g，金銀花80 g。

2.2 原料藥浸膏的制備參照原糖漿劑的提取工藝，取處方量藥材加水煎煮兩次，每次1 h，濾過，合并兩次濾液，濃縮至相對密度為1.10（60℃）的清膏，加乙醇使含醇量達65%，靜置24 h沉淀后取上清液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.32～1.33（60℃）的稠膏，備用。

2.3 蘭紫解毒顆粒制備工藝優(yōu)化

2.3.1 稀釋劑的選擇 采用濕法制粒，以制粒情況、成型率、吸濕率、溶化性及口味為考察指標，分別以淀粉、糊精、乳糖、木糖醇和甘露醇作為稀釋劑，稠膏與稀釋劑比為1∶1，90%乙醇為潤濕劑，進行制粒，可見淀粉和甘露醇作為稀釋劑制粒效果不佳，成型率和口味均較差；糊精、乳糖和木糖醇制粒效果均較佳，但考慮到部分人對乳糖的不耐受，故將其排除；糊精作為稀釋劑制粒，成型率較高，但口感不佳，味苦；木糖醇成型率稍低，口味偏甜。綜合考慮，最終選擇糊精和木糖醇共同作為蘭紫解毒顆粒的稀釋劑。（見表1）

表1 稀釋劑的選擇

2.3.2 稀釋劑配比的考察 以制粒情況、成型率、吸濕率、溶化性及口味為考察指標，對糊精和木糖醇的配比進行了考察，稠膏與稀釋劑質量比為1∶1，90%乙醇為潤濕劑，進行制粒，可見糊精和木糖醇質量配比為2∶1時，制粒效果最佳，成型率、吸濕率和口味均較好，故選擇m（糊精）∶m（木糖醇）=2∶1為蘭紫解毒顆粒的稀釋劑。（見表2）

表2 糊精和木糖醇配比的考察

2.3.3 評價指標的選擇

2.3.3.1 成型率[4]將制備好的顆粒稱質量，依次通過1、5號篩，收集能過1號篩而不能過5號篩者，再次稱質量，計算成型率。成型率（%）=過篩后顆粒質量/過篩前顆粒質量×100%。

2.3.3.2 吸濕率[4-5]將制備好的顆粒平鋪于105℃干燥至恒重的稱量瓶中，稱定質量，將稱量瓶（瓶蓋打開）放置于相對濕度75%的容器內，于20℃恒溫箱中放置48 h，再次稱質量，計算吸濕率。吸濕率（%）=[（吸濕后顆粒質量-吸濕前顆粒質量）/吸濕前顆粒質量]×100%。

2.3.3.3 休止角[4,6]采用休止角測定儀測量休止角，評估顆粒流動性。將漏斗（錐度60°，出料口內徑10 mm）固定于測定儀上，距離下方玻璃皿75 mm，將制備好的顆粒沿漏斗壁緩慢倒入漏斗中至玻璃皿中的顆粒裝滿為止，測量顆粒圓錐體的最大高度h和圓錐半徑r，計算休止角（度），公式為tg α=h/r，α為休止角，測量3次，取平均值。

2.3.4 正交試驗優(yōu)化蘭紫解毒顆粒最佳制備工藝 本研究采用濕法制粒，以正交試驗設計對顆粒制備過程中影響較大的3個因素：藥輔比、乙醇濃度和干燥溫度進行考察[7-8]，優(yōu)化蘭紫解毒顆粒的最佳制備工藝，每個因素設3個水平，具體見表3。

表3 正交試驗因素水平表

取“2.2”項下制備的9份稠膏，參照L9（34）正交表試驗設計條件進行制粒，以成型率（%）、吸濕率（%）、休止角（度）為考察指標，篩選出最佳制備工藝，3個指標的權重系數(shù)分別為0.4、0.3、0.3。正交試驗結果見表4，方差分析結果見表5。

表4 正交試驗結果表

表5 方差分析結果表

由表4～5結果可見，3個因素對顆粒制備效果的影響順序為A>B>C，其中，藥輔比（A）和乙醇濃度（B）2個因素對制備效果有顯著影響（P＜0.05），干燥溫度（C）對制備效果無顯著影響（P＞0.05）。綜合正交試驗及方差分析結果，得出蘭紫解毒顆粒的最佳制備工藝為A3B2C2，即稠膏與稀釋劑比為1∶2，以95%乙醇為潤濕劑制粒，濕顆粒干燥溫度為60℃。

2.3.5 工藝驗證 取“2.2”項下制備的3份稠膏，按照篩選出的最佳制備工藝條件進行3次平行工藝驗證，結果見表6，可見制得的3批顆粒劑的成型率、吸濕率、休止角結果均較為穩(wěn)定，RSD值均小于1.0%，提示本實驗優(yōu)選的蘭紫解毒顆粒制備工藝穩(wěn)定可行。

表6 驗證實驗結果

2.4 蘭紫解毒顆粒的質量檢查

2.4.1 外觀性狀檢查 本品為干燥、大小形態(tài)均勻、色澤一致的顆粒劑，無吸潮、軟化、結塊等現(xiàn)象，符合《中華人民共和國藥典》規(guī)定[9]。

2.4.2 粒度檢查 本品不能通過一號篩和能通過四號篩的顆粒和粉末總和均低于8.0%，符合《中華人民共和國藥典》規(guī)定[9]。

2.4.3 干燥失重檢查 本品于105℃干燥至恒重，減失質量低于2.0%，符合《中華人民共和國藥典》規(guī)定[9]。

2.4.4 溶化性檢查 取本品10 g，加熱水200 mL攪拌5 min，觀察均全部溶化，符合《中華人民共和國藥典》規(guī)定[9]。

2.4.5 蘭紫解毒顆粒中（R,S）-告依春、綠原酸的含量測定

2.4.5.1 色譜條件 色譜柱：Shim-pack VP-ODS色譜柱（4.6mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.05%磷酸溶液（B），梯度洗脫[10-13]，洗脫順序見表7，（R,S）-告依春檢測波長245 nm，綠原酸檢測波長327 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL。

表7 流動相梯度洗脫順序

2.4.5.2 對照品溶液的制備 精密稱?。≧,S）-告依春、綠原酸對照品適量，置具塞量瓶中，加甲醇配制成每1 mL含（R,S）-告依春4.5 μg和綠原酸100.2 μg的混合對照品溶液，即得。

2.4.5.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，過80目篩，取細粉約2 g，精密稱定，置50 mL具塞量瓶中，精密加入60%甲醇至刻度，搖勻，超聲處理30 min（500 W，40 kHz），放冷，用60%甲醇補至刻度，搖勻，過0.22μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.4.5.4 陰性對照溶液的制備 將處方中去掉板藍根、茵陳和金銀花3味藥，同蘭紫解毒顆粒的制備工藝制成缺以上3味藥的陰性樣品，按照上述供試品溶液處理方法，制成缺板藍根、茵陳和金銀花的陰性對照溶液。

2.4.5.5 專屬性考察 精密吸取上述混合對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μL，如色譜條件進樣檢測，色譜圖見圖1。由圖1可知，各對照品峰與前后組分峰均可達基線分離，理論板數(shù)按（R,S）-告依春和綠原酸峰計算均高于5 000，且陰性對照溶液色譜未見干擾峰。

圖1 HPLC色譜圖

2.4.5.6 線性關系考察 精密吸取混合對照品溶液各1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置于5 mL具塞量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，依次進樣檢測。以各對照品溶液的濃度為橫坐標（x），峰面積為縱坐標（y），計算得（R，S）-告依春的回歸方程為y=8 262.8x-152.19（R2=0.999 7），綠原酸的回歸方程為y=7 412.2x-2 543.1（R2=0.999 8），表明（R，S）-告依春和綠原酸分別在0.90～4.50 μg/mL與20.04～100.20 μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.4.5.7 精密度試驗 精密吸取同一混合對照品溶液10 μL，重復進樣檢測6次，以峰面積計算得（R，S）-告依春、綠原酸的RSD值分別為0.58%和0.77%，表明本實驗儀器的精密度良好。

2.4.5.8 穩(wěn)定性試驗 取同一新處理的供試品溶液，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、12、24 h后，依次進樣檢測，以峰面積代入回歸方程，計算得（R，S）-告依春、綠原酸含量的RSD值分別為0.92%和1.14%，表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定性良好。

2.4.5.9 重復性試驗 取同一批蘭紫解毒顆粒樣品（批號：20200501）6份，按照上述供試品溶液處理方法，分別制得6份供試品溶液，依次進樣分析，以峰面積計算得（R，S）-告依春、綠原酸的RSD值分別為0.82%和0.89%，表明本方法的重復性良好。

2.4.5.10 加樣回收率試驗 取同一批蘭紫解毒顆粒樣品（批號：20200501）6份，各取約0.5 g，精密稱定，置于具塞量瓶中，依次精密加入（R，S）-告依春對照品（0.020 0 mg/mL）、綠原酸對照品（0.450 0 mg/mL）各1 mL，按照上述供試品溶液處理方法，分別制得6份加樣供試品溶液，依次進樣分析，以峰面積代入回歸方程計算得樣品中（R，S）-告依春和綠原酸的平均加樣回收率分別為97.04%和97.87%，RSD值分別為0.88%和0.93%，表明本方法的加樣回收率良好。（見表8）

表8 加樣回收率實驗結果

2.4.5.11 含量測定結果 取3批蘭紫解毒顆粒樣品，按照上述供試品溶液處理方法，制得3份供試品溶液，依次進樣分析，以峰面積代入回歸方程計算得樣品中（R，S）-告依春和綠原酸的平均含量分別為0.038 3 mg/g和0.903 3 mg/g。（見表9）以每克樣品中各成分含量的85%作為蘭紫解毒顆粒含量測定的限度，則規(guī)定生產(chǎn)中本品每克含（R,S）-告依春和綠原酸計不得少于0.032 mg和0.768 mg。

表9 樣品含量測定結果

3 討 論

本研究在蘭紫解毒糖漿劑原有處方條件和提取工藝基礎上，進行了劑型優(yōu)化，采用傳統(tǒng)濕法制粒，制備成蘭紫解毒顆粒劑。首先通過單因素實驗對稀釋劑種類及配比進行了考察，分別考察了淀粉、糊精、乳糖、木糖醇和甘露醇幾種不同稀釋劑的制粒效果，其中，糊精、乳糖和淀粉是中藥顆粒劑制備中最常選用的稀釋劑品種，本研究在以糊精制粒時，顆粒的外觀性狀、成型率、溶化性均較佳，但由于糊精甜度較低，口感略苦；乳糖不具有吸濕性，且性質穩(wěn)定，在本研究中制粒效果較佳，但考慮到該制劑在兒童中應用較多，部分兒童患者由于先天缺少乳糖酶，易發(fā)生乳糖不耐受，引起腹瀉、脹痛、嘔吐等不良反應[14-15]，故將乳糖排除；在以淀粉制粒過程中，因制得軟材較黏，不利于顆粒成型，且由于淀粉的沖溶性不良，所得顆粒表面色澤不均勻，顆粒溶化后可見白色粉末狀物，故而排除淀粉。甘露醇、木糖醇均易溶于水，但在使用甘露醇制粒時，效果不太理想，顆粒成型率較低，顆粒偏硬，且嘗之有異味感，而單以木糖醇制粒時，除口味偏甜，其他方面均較為理想，且木糖醇本身具有矯味功能，使用其為稀釋劑既能夠減少病人對糖分的攝入，又能同時掩蓋中藥的苦味。綜合考慮，故選擇以糊精和木糖醇共同作為蘭紫解毒顆粒的稀釋劑，在對二者配比的考察中，發(fā)現(xiàn)在m（糊精）∶m（木糖醇）為2∶1時，制粒效果及口味均為最佳。

制備顆粒劑時，潤濕劑的選擇也很重要。預實驗發(fā)現(xiàn)，用乙醇制得的軟材黏度適中，顆粒成型較好，故選擇乙醇作為蘭紫解毒顆粒的潤濕劑。制粒后的干燥溫度對顆粒中的有效成分含量和水分均有影響，溫度過高可能會破壞藥物中的不耐熱成分，而溫度過低會增加顆粒中的水分，不利于制劑的儲存、運輸[16]。本研究采用正交試驗設計，對顆粒制備過程中影響較大的3個因素：藥輔比、乙醇濃度和干燥溫度進行了額外考察，以成型率、吸濕率、休止角為考察指標，優(yōu)化蘭紫解毒顆粒的最佳制備工藝。在對不同干燥溫度進行預實驗時，發(fā)現(xiàn)在以80～90℃進行干燥后，所得顆粒顏色較深，質地稍硬，而以50～70℃進行干燥后，顆粒質地、顏色均較佳，故選擇以50～70℃作為干燥溫度的考察范圍。正交試驗結果顯示，在稠膏與稀釋劑質量配比為1∶2，以95%乙醇為潤濕劑，干燥溫度60℃時，制備的顆粒效果最佳。

板藍根是處方中的君藥，功效清熱解毒，主要藥效成分為（R，S）-告依春；茵陳和金銀花為佐使藥，輔助君藥清熱解毒、涼血利濕，二者均以綠原酸為主要藥效成分，且在藥材中含量較高，并相對穩(wěn)定，故在對蘭紫解毒顆粒的質量標準研究中，本研究擬對處方中（R，S）-告依春和綠原酸同時進行含量測定，以控制藥品的質量。研究參考《中華人民共和國藥典》和文獻中方法[10-13]，分別考察了乙腈-0.1%甲酸水、乙腈-0.05%磷酸水、乙腈-0.1%磷酸水等不同流動相系統(tǒng)的洗脫效果，結果表明蘭紫解毒顆粒以乙腈-0.05%磷酸水溶液為流動相時，各對照品峰型最佳，與前后組分峰分離度最好。由于（R，S）-告依春和綠原酸化學結構差異較大，最大吸收波長亦不同，故采用波長切換法，選用不用的波長進行檢測，設定（R，S）-告依春、綠原酸檢測波長分別為245 nm和327 nm，測得蘭紫解毒顆粒樣品中（R，S）-告依春和綠原酸的平均含量分別為0.038 3 mg/g和0.903 3 mg/g，可見該含量測定方法準確度高、專屬性強、重現(xiàn)性好。以每克樣品中各成分含量的85%為限度，則規(guī)定生產(chǎn)中本品每克含（R，S）-告依春和綠原酸計不得少于0.032 mg和0.768 mg。

4 結 論

本研究篩選出的蘭紫解毒顆粒制備工藝穩(wěn)定可行，建立的含量測定方法準確度高、專屬性強、重現(xiàn)性好，能夠作為蘭紫解毒顆粒的質量控制標準。