連云港地區(qū)健康成人糖化血清蛋白濃度的分布及其參考區(qū)間的建立

劉倩 楊伏猛 徐同道 丁群 趙長新 梁偉

1江蘇省連云港市第二人民醫(yī)院檢驗科 222006；2江蘇省連云港市第二人民醫(yī)院內(nèi)分泌科 222006

糖化血清蛋白（glycated serum protein，GSP）是血糖與血漿蛋白（其中約70%是白蛋白）之間非酶促反應的產(chǎn)物，也被稱為果糖胺［1］。GSP 是反映近2～3 周內(nèi)人體血糖控制情況的重要指標，臨床上主要用于評價糖尿病患者血糖短期內(nèi)的平均控制情況，并為臨床治療方案的制定和調(diào)整提供指導［2］。在某些特殊情況下，如接受血液透析的中晚期腎病患者、糖尿病合并妊娠患者等，GSP 較糖化血紅蛋白能夠更早反映短期內(nèi)血糖變化，進而可以更快地對臨床治療做出反應［3］。

國家衛(wèi)生健康委自2012 年先后發(fā)布了WS/T 404《臨床常用生化檢驗項目參考區(qū)間》等行業(yè)標準文件［4-7］，為實驗室參考區(qū)間的引用提供了重要依據(jù)。但截至目前，未見關于GSP 參考區(qū)間的行業(yè)標準文件，實驗室所引用GSP 的參考區(qū)間多來源于試劑廠商提供的說明書，但由于人群分布、地域特點等差異，其適宜性有待進一步評價。本實驗室所用的試劑盒為重慶中元公司所提供，其說明書提供的參考區(qū)間為1.40～2.95 mmol/L，我們通過Lis 系統(tǒng)回顧性分析和驗證后發(fā)現(xiàn)，該參考區(qū)間范圍過于寬泛，尤其是參考區(qū)間的上限過高，不適宜本地區(qū)人群使用。基于上述情況，本研究通過收集本區(qū)域健康人群的體檢樣本，檢測并分析血清中GSP 的分布情況，旨在建立連云港地區(qū)20～79 歲健康成人血清GSP 的參考區(qū)間，進而充分發(fā)揮該指標的臨床應用價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2020年5月至6月于連云港市第二人民醫(yī)院體檢中心的健康體檢者1 154 例，男556 例，女598 例，年齡 20～79 歲。納入標準：⑴年齡 20～79 歲，體質(zhì)量指數(shù)18.5～28.0 kg/m2，血壓正常；⑵血清生化常規(guī)指標均正常（如肝功能、腎功能、血脂等項目）；⑶尿液蛋白質(zhì)、隱血均為陰性；⑷各項傳染病指標（如乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒螺旋體）均為陰性。排除標準：⑴患有肝、腎、心功能不全等疾病；⑵處于妊娠期的女性；⑶近1 個月內(nèi)使用過影響糖代謝的藥物，如糖皮質(zhì)激素、甲狀腺激素等；⑷近半年內(nèi)有手術史者；⑸個人基本信息、既往史等填寫不全者。依據(jù)臨床實驗室標準化協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）C28-A3［8］推薦要求和世界衛(wèi)生組織年齡劃分標準，根據(jù)性別將受試對象分為男性組、女性組；再依據(jù)年齡分為青年組（20～44 歲）、中年組（45～59 歲）和老年組（60～79歲）。根據(jù)各組人群血清GSP檢測結(jié)果的分布情況差異是否有統(tǒng)計學意義，確定分組或合并建立其參考區(qū)間。本研究經(jīng)連云港市第二人民醫(yī)院倫理學委員會審批通過，且受試者均知情同意。

1.2 標本采集 囑受試對象于采血前3 d 正常飲食、活動，采集其空腹靜脈血5 ml（不添加抗凝劑的血清管），靜置30 min待標本凝固后，置于離心機中進行離心處理（離心半徑 8 cm，3 000 r/min 離心 10 min），并將血清分裝于EP 管中儲存于-80 ℃冰箱，于規(guī)定時間內(nèi)進行集中標本測定。同時，囑受試對象留取新鮮晨尿10 ml，并于2 h 內(nèi)完成尿液常規(guī)項目的檢測。

1.3 儀器與試劑 生化檢測采用貝克曼AU5821 全自動生化分析儀（美國貝克曼公司）；GSP 檢測試劑盒（重慶中元公司，批號200502），測定方法為四氮唑藍顯色法。UN2000全自動尿液分析儀（日本希森美康公司），且尿液常規(guī)試劑為原裝配套產(chǎn)品。所有樣本在分析前，儀器均依據(jù)儀器標準操作規(guī)程進行定期維護和保養(yǎng)，確保檢測系統(tǒng)處于良好狀態(tài)，且所檢測的項目室內(nèi)質(zhì)控均在控，室間質(zhì)量評價均為合格。

1.4 統(tǒng)計學分析 全部數(shù)據(jù)應用SPSS 19.0 軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料應用Kolmogorov-Smirnov 檢驗進行正態(tài)性分析，P＜0.05表示數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布。兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗，多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。非正態(tài)分布資料以中位數(shù)和第25、75 百分位數(shù)［M（P25，P75）］表示，并以百分位數(shù)表示參考區(qū)間（P2.5～P97.5）。

2 結(jié) 果

2.1 健康成人血清GSP 檢測結(jié)果分布情況Kolmogorov-Smirnov 檢驗顯示：健康成人血清GSP 檢測結(jié)果呈偏態(tài)分布（Z=0.044，P＜0.001），其分布情況見圖1。

圖1 1 154例健康體檢者血清GSP的濃度分布直方圖

2.2 不同性別研究對象血清GSP 檢測結(jié)果 本研究顯示：健康成人血清GSP 的濃度存在性別方面的差異，健康成年男性（20～79 歲）GSP 水平顯著高于女性（20～79 歲）［2.15（2.06，2.27）mmol/L 比 2.03（1.95 ～2.14）mmol/L，Z=-11.602，P＜0.001］。

2.3 各年齡組研究對象血清GSP 檢測結(jié)果 本研究顯示：健康成年男性血清GSP 濃度在青年組、中年組和老年組之間差異無統(tǒng)計學意義（P=0.14）；健康成年女性血清GSP 濃度在青年組、中年組和老年組之間差異無統(tǒng)計學意義（P=0.07）。因此，健康成人血清中GSP 的分布與年齡之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各年齡組健康體檢者血清GSP檢測結(jié)果

2.4 健康成人血清GSP 參考區(qū)間的建立 上述研究結(jié)果顯示：健康成人血清GSP 的分布僅存在性別上的差異，故合并年齡組分別建立男性和女性血清GSP 的參考區(qū)間。由于健康成人血清GSP 濃度呈偏態(tài)分布，故根據(jù)CLSI C28-A3文件［8］和我國衛(wèi)生行業(yè)標準《臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》［9］的建議，取雙側(cè)95%（P2.5～P97.5）建立了健康成人血清GSP 的參考區(qū)間。因此，本研究采用四氮唑藍顯色法建立的本地區(qū)健康成人血清GSP 參考區(qū)間分別為：男性（20～79 歲）1.86～2.52 mmol/L，女性（20～79 歲）1.78～2.37 mmol/L。見表2。

表2 1 154例健康體檢者血清GSP檢測結(jié)果分布情況（mmol/L）

3 討 論

臨床檢驗項目的參考區(qū)間作為實驗室報告單的重要組成部分，是臨床醫(yī)生判斷患者結(jié)果是否正常的客觀指標，更是實施臨床決策的輔助依據(jù)。因此，實驗室項目的參考區(qū)間意義重大，如果項目沒有參考區(qū)間或所使用的參考區(qū)間不適合，該項目則失去了檢測的意義和臨床價值［10-11］。然而，參考區(qū)間的建立受限于實驗室自身條件、標本來源、受試對象的納入標準、成本支出等因素的影響，在一定程度上限制了實驗室自建各項目的參考區(qū)間［10-11］。國內(nèi)實驗室普遍的做法是驗證并引用現(xiàn)有的參考區(qū)間，如衛(wèi)生行業(yè)標準、《臨床檢驗操作規(guī)程》、試劑說明書等［12-13］，但由于參考區(qū)間與人群分布特征、地域特點、飲食習慣等因素密切相關，因此實驗室非常有必要自建各項目的參考區(qū)間。本實驗結(jié)合連云港地區(qū)人群分布特點、飲食習慣和檢測系統(tǒng)特性，進行了20～79 歲健康成人血清GSP 參考區(qū)間的研究，以期為與糖代謝相關疾病的輔助診斷、治療情況監(jiān)測、預后評估等方面提供重要的指導價值。

本研究通過建立的納入標準與排除標準進行了受試對象的篩選，一共有1 154 例研究對象納入本實驗進行研究。本研究結(jié)果顯示：本地區(qū)健康成年人血清GSP 的濃度水平呈偏態(tài)分布，并呈現(xiàn)出明顯的性別上的差異，且健康成年男性的血清GSP 濃度明顯高于女性。Pedrosa 等［14］針對466例巴西人進行了GSP 參考區(qū)間的研究，結(jié)果顯示：健康成人的血清GSP 濃度存在明顯的性別差異，且男性血清GSP 濃度明顯高于女性，其采用的檢測方法與我們的方法一致，且研究結(jié)果與本研究也保持一致。Kohzuma 等［15］針對美國人群進行了這方面的研究，其研究未發(fā)現(xiàn)健康成人血清GSP 濃度存在性別上的差異。該研究結(jié)果與本研究存有差異，經(jīng)分析其原因可能為：人群分布特征存在一定差異；GSP 檢測方法不同，本研究采用的是色原法，而Kohzuma 等［15］采用的檢測方法是酶法。在此基礎上，我們又根據(jù)年齡區(qū)間進行了數(shù)據(jù)的分組統(tǒng)計，且結(jié)果顯示：本地區(qū)健康成人血清GSP濃度在年齡方面差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），且濃度水平與年齡之間并無趨勢性變化。Chen 等［16］針對北京地區(qū)人群特點建立了GSP參考區(qū)間，該研究認為：65歲以上人群血清GSP 水平顯著高于65歲以下人群，但是20～45歲健康成人與46～65 歲健康成人之間的血清GSP 水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。此外，國內(nèi)學者肖光軍等［17］針對GSP 參考區(qū)間的建立進行了大樣本研究，該研究將14 639 例健康成年人作為研究對象，其研究顯示：四川省遂寧地區(qū)健康成年人的血漿GSP 濃度在年齡方面差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），其研究結(jié)果與我們的結(jié)果較為一致。結(jié)合既往研究與本研究結(jié)果充分顯示：健康成人血清GSP 的濃度變化與人群分布特征具有潛在的關聯(lián)性，同時證實了實驗室自建參考區(qū)間的必要性和重要性。

因此，本研究依據(jù)CLSI C28-A3 文件指南和衛(wèi)生行業(yè)標準《臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》建議的方法初步建立了連云港地區(qū)健康成人的血清GSP 參考區(qū)間：男性（20～79 歲）1.86～2.52 mmol/L，女性（20～79 歲）1.78～2.37 mmol/L。肖光軍等［17］建立的四川遂寧地區(qū)的健康成人GSP 參考區(qū)間分別為男性1.4～2.0 mmol/L、女性1.5～2.0 mmol/L，該參考區(qū)間明顯低于本研究建立的參考區(qū)間，其可能的原因為：⑴地域特征存在差異；⑵人群分布特征存在差異；⑶生活飲食習慣存有潛在的差異。

綜上所述，本研究基于實驗室檢測系統(tǒng)和區(qū)域人群特征初步建立了健康成人GSP血清參考區(qū)間，通過與試劑廠商提供的參考區(qū)間比較，證實了實驗室自建參考區(qū)間的必要性，如果我們采用了試劑說明書中GSP的參考區(qū)間，勢必會導致陽性結(jié)果的誤判，甚至給臨床決策的實施造成不良的影響。因此，臨床檢驗指標的參考區(qū)間是度量結(jié)果正常與否的重要尺子，實驗室應根據(jù)自身所具備的條件，建立適合區(qū)域人群的生物參考區(qū)間，以充分發(fā)揮該指標的臨床價值。

利益沖突：作者已申明文章無相關利益沖突。