陽江地區產前血清學篩查高風險孕婦的羊水細胞染色體核型分析的研究

曾昭珊 曾瑞華 張偉羨

廣東省陽江市婦幼保健院產前診斷中心，廣東陽江 529500

染色體病是嚴重的遺傳病，是最常見的新生兒出生缺陷，也是導致嬰幼兒死亡的主要原因，臨床主要表現為多發畸形、發育遲緩、智力低下等。染色體病以21-三體綜合征最常見，此病目前無有效的治療手段，只能通過產前篩查及產前診斷技術提前發現異常，及時終止妊娠避免新生兒出生缺陷[1]。羊水細胞染色體核型分析檢查是數目異常染色體病產前診斷的標準方法[2]。本研究擬對陽江地區孕早中期產前血清學篩查高風險孕婦進行羊水細胞染色體核型檢測，分析本地區血清學篩查高風險孕婦的羊水染色體核型特征及本地區胎兒常見染色體病的發病率，為制訂胎兒常見染色體病的臨床篩查與診斷及選擇性終止妊娠等干預方案提供科學依據，以減少本地區染色體病患兒的出生率。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年4月至2021年1月陽江市婦幼保健院（我院）收治的血清學陽性孕婦730例行染色體核型檢測。納入標準：孕婦年齡l8～50歲，孕齡18～24周；血清學結果為陽性；告知孕婦及家屬羊水細胞染色體分析的意義及風險，孕婦及家屬自愿參與且簽署知情同意書。排除標準：已確診的染色體異常；羊水細胞培養兩次不成功；非自愿參與者。

1.2 方法

1.2.1 羊水穿刺 在無菌條件下，由臨床醫生經B超定位后行羊膜腔穿刺，先抽取羊水2 ml棄去，再抽取羊水20 ml左右，分裝于兩個15 ml無菌離心管（江蘇晟康醫療用品有限公司，15 ml，批號：170120）中，2000 r/min，離心 10 min，棄上清液。

1.2.2 細胞培養 向兩個離心管中分別加入4 ml培養液（美國 gibco，批號：2254035；以色列 BI，批號：2032113），吹打混勻后將細胞懸液分別接種于50 ml細胞培養瓶（丹麥NUNC，批號：00821601）中，置入37℃、5%CO2的培養箱[賽默飛世爾科技（中國）有限公司，型號：371，編號：NT0131]中培養5 d后換液，再培養2 d。

1.2.3 細胞收獲 在倒置顯微鏡（重慶光電儀器有限公司，型號：XDSA-1B+Z2+lkaros，編號：JY0016）下觀察細胞克隆數量及生長情況，克隆數量多且較大連成片時，加入秋水仙素[碧艾（上海）生物科技有限公司，REF：01-194-1BCS，LOT：2032113，批號：20200509，規格：100 ml]至濃度為 0.25 μg/ml，置于培養箱中繼續培養3～4 h后收獲細胞。

1.2.4 烤片及顯帶 75℃烤片1 h，胰酶分帶后用Gi-emsa染色，進行核型分析。根據染色體的長度、著絲點位置、臂比、隨體的有無等特征，并借助染色體顯帶技術對染色體進行分析、比較、排序和編號。形成檢測報告。

1.3 觀察指標

記錄羊水細胞培養成功率、培養時間，分析異常染色體核型結果，包括數目與結構異常、高危指征染色體異常。

2 結果

2.1 培養結果

羊水細胞一次性培養成功724例（99.18%），兩次培養成功729例（99.86%），失敗1例。羊水細胞最短培養時間為6 d，最長為15 d，收獲時間長短與個體差異相關。最終獲得可分析有效染色體核型729例。

2.2 異常染色體核型結果

2.2.1 數目與結構異常情況 729例染色體核型中，發現異常核型98例（13.44%），其中數目異常50例（6.86%），結構異常25例（3.43%），倒位19例（2.61%），嵌合體4例（0.55%）。見表1。

表1 98例異常核型數目與結構異常情況

2.2.2 高危指征染色體異常情況 產前診斷血清學異常染色體檢出率從高到低分別為夫（婦）染色體異常、超聲異常、高齡妊娠、不良孕產史與唐氏篩查高風險。見表2。

表2 高危指征染色體異常情況（n）

3 討論

染色體病是由于各種原因引起的染色體數目和（或）結構異常。由于染色體上基因眾多，加上基因的多效性，因此染色體病常涉及多個器官、系統的形態和功能，臨床表現多種多樣，是一大類嚴重的遺傳病。染色體畸變嚴重者在胚胎早期死亡并自然流產，少數染色體畸變者能存活至出生，但常造成機體多發畸形、智力低下、生長發育遲緩和多系統功能障礙[3]。染色體病無有效治療方法，因此通過染色體病的遺傳咨詢和產前診斷預防染色體病尤為重要。

染色體病嚴重致愚、致殘、致死，對社會及家庭造成沉重負擔，又因目前缺乏有效治療手段，唯一有效的途徑是通過產前篩查、產前診斷等手段發現染色體異常并選擇性終止妊娠。目前，產前診斷技術主要包括有創和無創性產前診斷[4]，前者主要包括經腹羊膜腔穿刺羊水染色體診斷、絨毛取樣、臍血染色體診斷、胚胎活檢，后者包括血清學篩查、影像學診斷等。隨著產前診斷技術的不斷進展和完善，因羊水細胞培養染色體核型分析能明確診斷、準確率高（高達99%）、操作簡便及并發癥幾率低，現已占產前診斷病例的1/4～1/2[5]，成為染色體異常發現最經典的方法之一，在國內產前診斷機構已經常規開展。本研究結果顯示，羊水細胞一次性培養成功724例（99.18%），兩次培養成功729例（99.86%）；羊水細胞最短培養時間為6 d，最長為15 d。與王藝潼等[6]報道培養時間基本一致，考慮培養成功率及培養時間與個體差異相關。729例染色體核型中，發現異常核型98例（13.44%），與當前報道基本一致[7-9]，而其中數目異常50例（6.86%），結構異常25例（3.43%），倒位19例（2.61%），嵌合體4例（0.55%）的結果與鄭安舜等[10]報道的結果大致相仿。羅立等[11]報道的產前診斷指征中異常染色體檢出率從高到低依次為夫（婦）染色體異常、超聲異常、不良孕產史、高齡妊娠、唐氏篩查高風險，與本次結果高齡妊娠檢出率高于不良孕產史結果存在一定差異，考慮與本次研究樣本量及血清學陽性納入對象有關，還需要進一步深入研究探討。

介入性產前診斷技術目前在陽江地區尚屬空白，對于染色體病中21-三體綜合征的篩查和診斷僅依靠血清學篩查、影像學診斷等手段，而兩者均存在假陽性、診斷滯后的缺點[12-14]，因而許多血清學篩查陽性孕婦必須轉診到省級醫院進行產前診斷，部分孕婦依從性差，導致每年均有Down綜合征患兒出生，嚴重影響陽江地區出生缺陷防控工作的開展[15-16]。本研究結果發現，羊水細胞染色體核型分析能夠準確發現胎兒染色體異常，可在陽江地區進行應用與推廣，對提升陽江地區出生人口素質意義重大。

綜上所述，陽江地區產前血清學篩查高風險孕婦的羊水細胞染色體核型異常率較高，羊水細胞染色體核型分析可準確發現胎兒染色體異常，為臨床治療及終止妊娠提供科學依據。