大腸桿菌快速檢測原料4-甲基傘形酮葡糖酸苷在食品檢測中應用效果分析

王佳

摘要：本次課題主要針對自制品牌和國際品牌的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷。在檢測食品中大腸桿菌活菌素的應用效果進行探討，最終的研究結果表明，使用自制品牌4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷的進行檢測工作與國際品牌的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷檢測工作最后獲得的大腸桿菌活菌數，所得的結果具有較大的相似性。所以我們可以認為自制的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷產品，可以完全替代國際品牌的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷應用于食品檢測的大腸桿菌活菌素檢測工作中。

關鍵詞：大腸桿菌;快速檢測原料;4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷;應用效果

1.材料

1.1試驗材料

本次課題在進行研究的過程當中，試驗期間使用的所有材料都是來自當地的食品超市，使用隨機選取的方式對所有未打開包裝的產品進行購買，并對樣品進行提前準備。所有的產品類型11種，每種類型的材料購買30份。

1.2主要試劑及儀器

在試用的過程當中，我們需要的所有試劑以及儀器，包括水相濾膜，胰蛋白酶，366nm紫外燈，真空泵以及分析純等等。

1.3試驗方法

在進行樣品檢測操作之前，我們需要對所有的樣品進行提前處理工作，如果樣品屬于固體，那么我們就需要使用無菌操作的方式對樣品進行爭取，稱取量為25克，將其放置到255毫升的滅菌生理鹽水容器當中，搖合混勻。液體的樣品在提前處理時需要于23℃到37℃的環境下，經過蛋白酶處理工作。只有牛奶樣品需要進行蛋白酶處理，其他樣品不需要進行處理。接著再使用無菌吸管吸取25毫升的樣品，放置到225毫升的滅菌生理鹽水當中。在完成以上操作之后，需要以30厘米幅度，7秒內，振搖25次的方式進行稀釋備用。接著我們需要將滅菌過濾的裝置連接到真空抽濾瓶上，使用無菌操作的方式把無菌濾膜放置到抽濾的底座當中，進行固定操作，而在完成以上操作之后，仍然需要使用無菌操作的方式，將10毫升到20毫升的無菌蒸餾水加入到過濾器當中，打開真空泵之后進行抽取和過濾的操作。最后，將過濾之后的樣品濾膜放置在瓊脂平板表面，而且濾膜和瓊脂表面之間不能存在氣泡，接著開展培養工作，培養時間為兩個小時，最后使用菌落計算的方式，對藍白色熒光的菌落進行計算，再乘以稀釋倍數，計算樣品當中大腸桿菌的具體數量。

1.4產品合格評價方法

以產品衛生標準與檢測結果對產品是否合格，進行綜合性評價。不同類型的產品，飲用天然礦泉水，膨化食品，方便面，飲料，以及巴氏殺菌乳等產品的衛生標準，在內容方面存在比較明顯的差異。

2.結果與分析

通過對收集的數據進行綜合性分析，可以了解到自制4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷和進口品牌4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷用于食品的大腸桿菌數量檢測工作，其最終的結果表現為下。而從該表當中我們也可以了解到，不同類型的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷應用在食品檢測工作當中，其最終所得的大腸桿菌數幾乎一致。

3.結論與討論

在進行樣品試驗的過程當中，我們選擇的方法具有多樣性的特點，但是可以按照其具體方案的內容分成傳統檢測法以及新型檢測法。傳統檢測法有4種不同的類型，分別是多管發酵法，平板計數法，測試片法以及濾膜法。新型檢測方法主要有ATP生物發光技術，免疫磁珠法以及免疫學檢測，基因芯片法，自動化儀器法，生物傳感器檢測法。所有的樣品在檢測之前都必須要先開展樣品前處理，操作固體樣品和液體樣品需要采用不同的處理方法。

在使用多管發酵法進行4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷的大腸桿菌數量檢測工作，需要先將樣品放置在44.5℃的飛行器當中，進行24小時的培養工作。在培養結束之后，使用紫外光源對培養基進行照射，如果發現檢測樣品當中有熒光出現，那么就可以認為該樣品當中有大腸桿菌，可以通過具體分析熒光量對大腸桿菌的含量進行檢測。這種檢測的方法需要對樣品進行發酵處理，讓其在發酵管當中發酵之后，再針對待測菌進行分離及純化工作，接著對分離之后的樣品進行二次發酵。最后工作人員還需要使用格蘭仕染色以及顯微鏡觀察的方式，對熒光的數量進行分析，從而明確大腸桿菌的具體含量。多管發酵法的操作過程比較簡單，而且成本低，在檢測的過程當中卻很容易受到其他因素的影響，對最終的檢測準確性產生消極的影響。

使用平板計數法對4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷檢測，需要先對樣品進行稀釋工作，將樣品當中含有的微生物通過稀釋的方式分散成單個細胞，接著再對這些已經稀釋的稀釋液進行培養工作。經過一段時間的培養之后，這些細菌就會逐漸長成肉眼科觀察的菌落，那么我們就可以通過收集稀釋度以及樣本數量的方式，對大腸桿菌的數量進行計算。

使用測試片法，對4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷進行測試工作，可以最大程度的縮短培養基的培養時間，他在接種后，測試片人員需要進行培養，時間可以控制在24小時到48小時之內，所以他也不能滿足快速檢測的實際需求。

使用濾膜法進行大腸桿菌的測試工作，這種方法是常見的微生物檢測方法，在進行檢測的過程當中，檢測人員需要先將待測的樣本放在0.65納米的濾膜上進行過濾，而樣本當中的細菌就會留在濾膜上，將濾膜放在培養基進行24小時的培養工作，那么大腸桿菌群就會導致濾膜呈現出紫紅色，此時檢測人員就可以通過計算內膜上的菌落，推斷出樣本當中具體大腸桿菌的含量。

在多種類型的新型檢測方法當中ATP生物發光技術的檢測使用概率相對較高。 Att是活細胞當中最常見的能量，而它的代謝物主要是為細胞提供正?；顒有枰母鞣N能量，所以它在生物體當中的含量具有穩定性的特點，那么活細胞在熒光素酶的催化下，也會產生較為明顯的熒光反應。所以我們可以將熒光素買放入到樣品當中，如果樣品當中的微生物ATP含量越多，那么發出的熒光也就越多，此時檢測人員就可以通過熒光量對活細胞代謝水平進行了解，從而獲取到大腸桿菌的具體數量。

使用免疫磁珠法進行大腸桿菌的測試工作需要以磁珠作為抗體的載體，在磁珠和大腸桿菌結合之后就會通過磁力實現大腸桿菌的分離操作。它可以整體提高大腸桿菌的檢測效率，并且快速完成樣品的微生物檢測工作，這種方法在一天當中就可以獲得94%的捕捉效率，而且不會出現交叉反應的情況。

使用免疫學檢測法進行大腸桿菌的檢測工作，可以在40分鐘之內完成檢測的結果，它的檢測靈敏度非常高。與此同時，不會對其他類型的腸桿菌科細菌產生影響作用或者出現交叉反應。免疫學檢測法的原理是將抗原的抗體的特異性反應作為原理對食品當中的大腸桿菌進行特定的抗體檢測工作，它的操作方法簡單，而且檢測速度非?？?。

基因芯片法可以對極低濃度狀態下的大腸桿菌進行檢測工作，它的檢測靈敏度非常高，但是它需要制作帶有標記的基因芯片，所以是其成本相對較高，與此同時對于檢測人員也具有較高的要求。

自動免疫測定分析儀的使用方法非常簡單，而且它的靈敏度和準確度也非常高，使用自動化儀器對大腸桿菌進行檢測工作，目前僅局限于實驗室使用，因為它的配套試劑價格非常的昂貴。

使用生物傳感器檢測法，對大腸桿菌進行檢測工作具有成本低，穩定性高，靈敏度高以及選擇性多的特點，與此同時，它還是一種可以對復雜成分進行快速在線檢測的技術。在實際操作的過程當中，我們需要將DNA雜交抗原抗體反應信號轉化為光信號和電信號，并且通過儀器對信號進行分析之后，得出最終的檢測結果。

此次課題的研究結果顯示：兩種類型的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷在食品檢測工作當中獲得的結果是一致的，所以我們可以認為自制的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷可以代替國外品牌的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷進行產品的檢測工作。

參考文獻：

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