檸檬酸銅對肉兔生產性能和肉品質的影響

郭志強，胡海強，謝曉紅，鄺良德，李叢艷，雷 岷，鄭 潔，楊 銳，晏家友，李明暉*

（1.四川省畜牧科學研究院，動物遺傳育種四川重點實驗室，四川成都 610066；2.西南大學動物科學技術學院，重慶 400715）

銅是動物生長發育不可缺少的微量元素之一，具有促進動物生長、參與機體造血、影響免疫器官發育和免疫功能的發揮以及抗氧化等多種功能。大量研究表明，在動物實際生產中添加高劑量銅，可以獲得明顯的促生長效果，但過量的銅進入體內不易被動物體吸收，會隨糞便排出體外，污染環境，并且銅還會在動物組織中沉積，在人類食用后影響身體健康[1-2]。與硫酸銅相比，檸檬酸銅具有生物學效價高、易被動物機體吸收、利用率高等優勢，并能有效減少銅的排放量和殘留量，保護生態環境[3]。Peng 等[4]研究表明，30～60 mg/kg 檸檬酸銅可以顯著提高仔豬的生長性能，降低了銅在體內的殘留，提高仔豬抗氧化功能，降低盲腸大腸桿菌含量，提高乳酸桿菌含量。Yan 等[5]研究發現，20 mg/kg 檸檬酸銅組仔豬日增重、采食量和耗料增重比與180 mg/kg硫酸銅組無顯著差異，但是檸檬酸銅可以提高仔豬骨髓抗菌肽的表達量，顯著降低仔豬腹瀉率。晏家友等[6]研究結果顯示，20 mg/kg 堿式氯化銅、甘氨酸銅和檸檬酸銅組肉兔日增重和耗料增重比顯著優于硫酸銅組。歐洲文獻對銅的推薦量一般是3～10 mg/kg，實際商品預混料中添加量一般為4～25 mg/kg，但也有報道表明100～400 mg/kg 銅可提高育肥兔的生長速度[7-11]。檸檬酸銅是農業農村部2019 年批準的新型飼料添加劑，目前飼料中關于檸檬酸銅的研究主要集中在仔豬方面，而關于在肉兔飼糧中的適宜添加量及對肉品質的研究鮮見報道。因此，本試驗旨在研究飼糧中添加檸檬酸銅對新西蘭兔生長性能、屠宰性能和肉品質的影響，為檸檬酸銅在肉兔飼料中的科學應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗設計及試驗飼糧 選用體況相近、體重在720 g 左右的28 日齡斷奶的新西蘭兔420 只，隨機分為5 組，每組84 只，每組分成14 個重復，每個重復6 只，公母各半。對照組不添加銅，硫酸銅組分別添加20、150 mg/kg硫酸銅，檸檬酸銅組分別添加10、20 mg/kg 檸檬酸銅，各組銅含量實測值依次為4.6、24.7、148.4、15.1、24.6 mg/kg。預試期7 d，正試期42 d。飼糧參照谷子林[7]推薦的營養水平和結合本地飼料資源設計，飼糧制成顆粒飼料。試驗飼糧組成及營養成分見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養成分（風干基礎）

1.2 飼養管理 試驗前將兔舍清洗干凈并進行消毒處理，每籠2 只（公母各1 只），試驗期間早晚各飼喂1 次，按常規進行飼養管理和免疫程序，定期消毒，自然采光和通風，自由采食和飲水，預試期7 d，正試期42 d。

1.3 樣品采集與制備 試驗結束前4 d，每組隨機抽取6 只試驗兔（公母各3 只），轉移到經消毒處理的代謝籠內，單籠飼養，并飼喂原組試驗飼糧，自由采食和飲水，第1 天適應環境不收集糞尿，第2 天開始分別收集每只試驗兔全天的糞樣和尿樣，糞樣用塑封袋收集、尿樣用塑料瓶收集。鮮糞稱重后，在烘箱中65℃烘干24 h后，常溫狀態下回潮24 h 稱重即糞樣的風干重，最后將3 d 的風干糞樣混合待測。將每只兔3 d 的尿樣混合作為該兔最終的尿樣，4℃保存，待測銅含量。試驗結束當天每組隨機選擇6 只體況相近的試驗驗兔，耳緣動脈采血5 mL，3 500 r/min 離心20 min，取上層血清裝入Eppendorf 管中。采血完成后對試驗兔進行屠宰，并分別取心臟、肝臟、腎臟、背最長肌組織各5 g，用組織管盛裝，以上樣品均在采集后轉至-20℃冰箱保存，待測銅含量。

1.4 測定指標和方法

1.4.1 生產性能 稱量并記錄試驗正試期當天晨飼前空腹體重和試驗結束當天空腹體重，統計試驗兔在試驗期間的采食量，計算平均日增重、平均日采食量和耗料增重比。

1.4.2 屠宰性能 試驗結束時，每組抽取該組體重相近的試驗兔6 只，空腹12 h，屠宰前稱重，即為宰前活重，并記錄全凈膛重和半凈膛重，計算全凈膛率和半凈膛率。

1.4.3 肉品質 屠宰后第3～6 腰椎處取2 cm×1 cm×1 cm的背最長肌肉樣，冷藏于4℃待屠宰后45 min、24 h 時分別測定pH45min、pH24h，測定時將電極頭部完全包埋在肉樣中，待數據穩定，讀取數據并記錄，每個肉樣測定3 次。采用日本KONICAMINOL TACR-10 色差儀測定肌肉的亮度（L）、紅度（a*）、黃度（b*）。屠宰后從第3～6 腰椎處取3 cm×1 cm×1 cm 的背最長肌肉樣，稱重記為W1；用鐵絲穿過肉樣一端，懸空掛于紙杯中，肉樣不與紙杯壁接觸，用保鮮膜將紙杯口密封，4℃放置24 h 后，取出肉樣進行稱重記為W2，計算滴水損失率，滴水損失=（W1－W2）/W1×100%。

1.4.4 組織、糞尿和血清銅含量 稱取0.5～1.0 g 樣品于微波消解罐中，加入10 mL 濃硝酸（優級純）隔夜冷消化后，在100℃條件加熱趕酸30 min，冷卻后加入3 mL濃鹽酸（優級純），再100℃加熱趕酸30 min，冷卻后，轉入微波消解器（t1：0～1 500 W，0～150℃，30 min；t2：0～1 500 W，150℃，20 min；t3：0～1 500 W，150～170℃，20 min，t4:0～1 500 W，170℃，30 min），冷卻后用一級水轉移至25 mL 容量瓶中，定容搖勻，過濾得待測溶液后于日立ZA3300 型火焰原子吸收分光光度計進行測定。血清銅含量采用絡合比色法，按照南京建成生物工程研究所試劑盒說明書進行，用半自動生化分析儀（Micorlab300，荷蘭）測定。

1.5 統計分析 試驗數據用Excel 2016 進行簡單整合后，采用SPSS 20.0 統計軟件進行單因素方差分析（One-Way ANOVA），并采用Duncan′s 法多重比較檢驗組間差異顯著性，結果表示為平均值±標準差，以P<0.05 為差異顯著，以P<0.01 為差異極顯著。

2 結果

2.1 檸檬酸銅對肉兔生產性能的影響 由表2 可知，飼糧添加硫酸銅和檸檬酸銅均可以提高肉兔采食量和日增重，降低耗料增重比。與對照組和20 mg/kg 硫酸銅組相比，20 mg/kg 檸檬酸銅可以提高肉兔日增重和采食量（P<0.05），降低耗料增重比（P<0.05），但與150 mg/kg 硫酸銅組差異不顯著。

表2 飼糧中添加檸檬酸銅對肉兔生長性能的影響

2.2 檸檬酸銅對肉兔屠宰性能的影響 由表3 可知，150 mg/kg 硫酸銅組的全凈膛重和半凈膛重高于對照組、20 mg/kg 硫酸銅組和10 mg/kg 檸檬酸銅組（P<0.05），但與20 mg/kg 檸檬酸銅組無顯著差異。與對照組相比，所有試驗組全凈膛率和半凈膛率均有升高的趨勢。

表3 飼糧中添加檸檬酸銅對肉兔屠宰性能的影響

2.3 檸檬酸銅對肉兔肉品質的影響 由表4可知，150 mg/kg硫酸銅組兔肉亮度、pH45min、pH24h和滴水損失均較對照組降低（P<0.05），但20 mg/kg 檸檬酸銅組兔肉pH45min、pH24h和滴水損失與150 mg/kg 硫酸銅組無顯著差異，且各組兔肉紅度、黃度均無顯著差異。

表4 飼糧中添加檸檬酸銅對肉兔肉品質的影響

2.4 檸檬酸銅對肉兔排泄物和組織中銅含量的影響 由表5 可知，各試驗組糞便、肝臟、腎臟和心臟銅含量均顯著高于對照組，且150 mg/kg 硫酸銅組的糞便、肝臟、腎臟和心臟銅含量均高于其他試驗組（P<0.01）。150 mg/kg 硫酸銅組背最長肌銅含量高于其他組（P<0.05），各組尿液和血清銅含量均無顯著差異。

表5 飼糧中添加檸檬酸銅對肉兔排泄物和組織中銅含量的影響

3 討 論

3.1 檸檬酸銅對肉兔生產性能的影響 眾多研究表明，動物對飼糧中不同銅源的吸收率存在較大差異，因此相同劑量不同銅源的飼糧對動物生產性能的影響也存在較大差異，絡合銅、銅蛋白鹽和氨基酸螯合銅等有機銅源添加效果顯著高于無機硫酸銅[3,6-9]。本試驗結果表明，20 mg/kg 檸檬酸銅組采食量、日增重和耗料增重比與150 mg/kg 硫酸銅組差異不顯著，說明檸檬酸銅吸收利用率較高，低劑量檸檬酸銅和高劑量硫酸銅在促進肉兔生產性能方面效果相當。晏家友等[6]研究也表明，飼糧添加20 mg/kg 檸檬酸銅組肉兔日增重顯著優于20 mg/kg硫酸銅組。

3.2 檸檬酸銅對肉兔屠宰性能的影響 本試驗中，與對照組相比，添加檸檬酸銅可以顯著提高宰前活重、全凈膛重和半凈膛重，20 mg/kg 檸檬酸銅與150 mg/kg 硫酸銅作用相當，均可一定程度上提高肉兔的屠宰性能，而各組間全凈膛率和半凈膛率無顯著差異。馬德磊[10]研究表明，添加硫酸銅顯著提高生長肉兔全凈膛重和半凈膛重，而對全凈膛屠宰率和半凈膛屠宰率無顯著影響。影響全凈膛率的因素較多，除了全凈膛、半凈膛重量以外還包括活重、心臟、消化器官、腸道內容物等，飼糧銅在增加胴體重的同時，相應臟器增重也不同程度增加，加之影響因素眾多[7,11-12]，因此檸檬酸銅對胴體增重的影響不足以影響全凈膛率。

3.3 檸檬酸銅對兔肉品質的影響 本試驗中，20 mg/kg檸檬酸銅顯著降低了兔肉滴水損失。歐秀瓊等[13]研究發現，飼糧中添加255.22 mg/kg 硫酸銅可以顯著降低四川白鵝的蒸煮損失。眾多研究顯示，隨著飼糧添加銅濃度的升高，各組織中微量元素沉積呈線性增加，組織沉積量由高到低依次為肝臟、腎臟、肌肉、心臟和血漿，肝臟是銅蓄積量的主要器官[14-17]。Peng 等[4]研究表明，仔豬飼糧中加入240 mg/kg 檸檬酸銅可以顯著提高肝、腎銅濃度，30～120 mg/kg 檸檬酸銅組肝腎濃度顯著降低，與本試驗中添加20 mg/kg 檸檬酸銅后肉兔的肝臟銅濃度差異不大。因肝銅濃度是評價銅營養狀況的重要敏感指標[6]，以上結果說明低劑量檸檬酸銅完全可滿足營養代謝需要。本試驗中糞便銅含量隨著銅添加量的增加呈極速增加的態勢，而各組尿銅含量差異不顯著，這表明銅主要通過糞便排出，尿中僅排出少量銅[18-19]?？傮w來看，檸檬酸銅組糞便中銅含量顯著低于硫酸銅組，而組織中沉積差異并不顯著，這可能與肉兔對銅的生物吸收利用方式有關，作用機制還需進一步研究。

4 結 論

本研究結果表明，飼糧中添加檸檬酸銅可以顯著提高肉兔生產性能，改善肉品質，減少糞污銅排放，降低環境污染，20 mg/kg 檸檬酸銅組肉兔增重與150 mg/kg硫酸銅組相當，且可以顯著改善肉品質。本試驗條件下，檸檬酸銅的適宜添加量為20 mg/kg。