復方甘草含片與復方甘草片的藥效學比較研究

薄雙琴，景明，朱英布，李宗民，王靜

(1.甘肅中醫藥大學，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅祁連山制藥股份有限公司，甘肅 酒泉 735000)

復方甘草片是臨床應用較廣的止咳化痰藥，其止咳化痰平喘效果顯著。復方甘草片中含有甘草流浸膏、阿片粉、樟腦、八角茴香、酒石酸銻鉀等成分。復方甘草片組分中的甘草浸膏為保護性鎮咳祛痰劑；阿片粉有較強的鎮咳作用；樟腦及八角茴香油能刺激支氣管黏膜，反射性地增加腺體分泌，稀釋痰液，使痰易于咳出[1]。含服復方甘草片，可使藥片在口腔中溶化，有效成分易覆蓋在發炎的咽部黏膜，止咳作用起效快。同時，阿片的有效成分經口腔黏膜吸收后，不經肝臟的首過效應而直接進入血液，減少了有效成分的損失，避免了吞服復方甘草片中阿片粉的肝臟代謝，減輕了藥物的不良反應，如惡心、口干、便秘等[2]。大多研究表明，復方甘草片的含服效果較好，不良反應較少[3-7]。但是，目前生產的復方甘草片為素片，藥片中含阿片粉，導致素片具阿片粉特殊臭氣，影響服用，從而影響藥物的療效；其次，處方中含八角茴香油、樟腦，屬易揮發物質，貯存期間成分易散失，也會影響療效。復方甘草含片是近年來對復方甘草片劑型進行改良的一種新制劑，其可改善人們對藥物的順應性，最大限度地發揮藥物療效，同時也能夠提高復藥物穩定性。本文通過比較復方甘草片與復方甘草含片止咳、化痰、平喘以及抗炎作用，為復方甘草含片的臨床應用提供理論依據。

1 材料

1.1 實驗動物 SPF級昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，動物合格證號：SCXK(甘)2015-0002-0001382；SPF級豚鼠，雌雄各半，體重180～210 g，均由甘肅中醫藥大學科研實驗中心提供。

1.2 主要藥物及試劑 復方甘草片(甘肅莫高制藥廠，批號：1903181)；復方甘草含片(甘肅祁連山藥業有限公司，批號：1811070)；生理鹽水(四川科倫藥業有限公司，規格250 mL：2.25 g，批號：N20101507B)；0.1%磷酸組胺(Bioruler，批號：3410)；二甲苯(成都金山化學試劑有限公司，批號20190906)；酚紅(北京索萊寶公司，批號：1211C031)；氨水(北京化工廠，批號:20141008)。

1.3 主要儀器設備 JWC-201D型超聲霧化器(鞍山市同信醫用儀器廠)；Benchmark Plus酶標儀(Bio RAD公司)；小鼠/豚鼠熏蒸系統(自制)；HX502T電子天平(慈溪市天東衡器廠)。

2 方法

2.1 小鼠止咳實驗 取昆明種雄性小鼠30只，隨機分為3組，即空白對照組、復方甘草含片組及復方甘草含片組(10 g·kg-1)，每組各10只。各組給予相應的藥物混懸液(20 mL·kg-1)，空白對照組給予等容積的純水，每天1次，連續7 d，末次給藥1 h后，將小鼠置于密封的透明容器中，用超聲霧化器通過連接容器的軟管噴入霧化氨水20 s后，立即取出小鼠放在另一個干凈容器中，記錄小鼠咳嗽潛伏時間3 min內咳嗽次數(小鼠腹肌劇烈收縮，肩背聳動，伴有張嘴為咳嗽指標)。以用藥后咳嗽潛伏期(s)、3 min的咳嗽次數為評價指標，評價藥物有無止咳作用。

2.2 小鼠氣管段酚紅祛痰實驗[8-9]取昆明小鼠30只，分為3組，每組10只，雌雄各半，空白對照組(生理鹽水0.4 mL/20 g)、復方甘草片組10 g·kg-1、復方甘草含片組10 g·kg-1，容量按20 mL·kg-1，連續5 d。末次給藥30 min后腹腔注射0.5%酚紅溶液0.5 mL，30 min后處死小鼠，剝離頸部氣管周圍組織，甲狀軟骨下緣及氣管分支處用小血管夾夾住，然后剪下甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，將各氣管段放入預先盛有4 mL、5% NaHCO3溶液試管中靜置1 h，將試管中上清液于酶標儀558 nm處測量并記錄OD值(OD值大小表示酚紅排泌量的多少，OD值大表示酚紅排泌量多)。

2.3 豚鼠磷酸組胺引喘平喘實驗 將40只豚鼠于密閉容器內，連接超聲霧化器，將2 mg·mL-1磷酸組胺注入霧化罐內，持續熏蒸20 s，觀察豚鼠從接受噴霧到發生抽搐跌倒的引喘潛伏期，選擇150 s內出現哮喘的豚鼠30只，隨機分為3組，即空白對照組、復方甘草片組以及復方甘草含片組(6 g·kg-1)，各組灌胃給予相應的藥物混懸液(20 mL·kg-1)；空白對照組予等容積純水灌胃。均每天1次，連續7 d。末次給藥后30 min，將豚鼠放入噴霧裝置內，按同樣條件分別噴霧加入磷酸組胺，記錄豚鼠自噴霧開始出現哮喘的潛伏期(以第一次抽搐跌倒的時間作為潛伏期)，引喘潛伏期超過5 min者，以5 min計[10]。

2.4 小鼠耳郭腫脹實驗 取昆明種小鼠30只，隨機分成空白對照組(生理鹽水)，復方甘草片(10 g·kg-1)、復方甘草含片組(10 g·kg-1)，每組10只。連續7 d灌胃給藥，并于末次給藥30 min后用二甲苯致炎小鼠耳郭[11]。將二甲苯0.05 mL涂于小鼠右耳正反兩側致炎，左耳做對照。致炎2 h后將小鼠脫頸椎致死，沿耳郭基線剪下兩耳，打孔器在左右耳同一部位打下圓耳片，電子天平稱重。計算耳腫脹度和腫脹抑制率。

腫脹抑制率(%)=(空白對照組腫脹度-給藥組腫脹度)/空白對照組腫脹度×100%

3 實驗結果

3.1 小鼠止咳實驗結果 與空白對照組相比，復方甘草含片及復方甘草片均可延長小鼠咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數(P<0.01或P<0.05)；與復方甘草片組相比，復方甘草含片對小鼠咳嗽潛伏期的延長效果以及減少咳嗽次數的趨勢更顯著(P<0.05)。

3.2 小鼠氣管段酚紅祛痰實驗結果 與空白對照組相比，復方甘草含片及復方甘草片的OD值明顯增大(P<0.01)，表示復方甘草含片及復方甘草片均可明顯增加酚紅排泌量；復方甘草含片比復方甘草片的OD值明顯增大(P<0.01)，表示復方甘草含片可明顯增加酚紅排泌量。說明復方甘草含片及復方甘草片均具有化痰作用，但復方甘草含片的化痰作用更明顯。

表2 各組小鼠OD值

3.3 豚鼠磷酸組胺引喘平喘實驗結果 與空白對照組相比，復方甘草片以及復方甘草含片均可明顯延長豚鼠引喘潛伏期(P<0.01)，減少抽搐跌倒的豚鼠數量，但復方甘草含片延長豚鼠引喘潛伏期，減少抽搐跌倒的豚鼠數量更明顯(P<0.01)。

表3 各組豚鼠引喘潛伏期及抽搐跌倒數

3.4 小鼠耳郭腫脹實驗結果 復方甘草含片以及復方甘草含片較空白對照組對小鼠耳郭腫脹的抑制率明顯增高(P<0.01)，復方甘草含片組的耳郭腫脹度與復方甘草含片組相比，差異具有統計學意義(P<0.05)，說明復方甘草含片的抗炎效果更明顯。

表4 各組小鼠耳郭腫脹度及腫脹抑制率

4 討論

咳嗽、咳痰、喘息是呼吸系統疾病常見的臨床癥狀，而且在呼吸系統疾病的發生發展中會伴隨炎癥的發生，包括鼻腔、咽喉、上呼吸道、下呼吸道、肺部等炎癥，主要表現為組織腫脹、發紅、發熱、分泌物增多、組織周圍免疫細胞增多、免疫因子濃度增加[12]。臨床上治療呼吸道感染，主要是根據患者的感染原因，通過改善其咳嗽及咳痰癥狀達到主要治療目的。復方甘草片主要用于各種原因導致的咳嗽和咳痰治療中，以呼吸道感染的治療最為常見。復方甘草片與復方甘草含片中的主要成分甘草浸膏粉發揮鎮咳祛痰的作用。本研究采用氣管酚紅排泌量測定、氨水致小鼠咳嗽、磷酸組胺引喘、二甲苯致小鼠耳郭腫脹法來評價并比較復方甘草片和復方甘草含片的止咳、化痰、平喘以及抗炎作用。研究結果表明，復方甘草含片及復方甘草片均可延長小鼠咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數，復方甘草含片對小鼠咳嗽潛伏期的延長效果以及減少咳嗽次數的趨勢更顯著。復方甘草含片比復方甘草片增加酚紅排泌量更多，顯示復方甘草含片明顯的化痰作用。復方甘草含片可更明顯的延長豚鼠引喘潛伏期，減少豚鼠抽搐跌倒的數量，表明復方甘草含片較復方甘草片的平喘作用更強。在二甲苯致小鼠耳腫脹實驗中，復方甘草含片以及復方甘草片均可抑制小鼠耳郭腫脹，但復方甘草含片的抑制率更高，說明復方甘草含片的抗炎效果更明顯。綜上所述，復方甘草含片止咳、化痰、平喘以及抗炎作用更明顯，治療效果更好，并且改善了患者對藥物的順應性。本實驗通過比較復方甘草含片以及復方甘草片的止咳、化痰、平喘以及抗炎作用，為復方甘草含片投入臨床使用提供了科學依據，對復方甘草含片的其他藥理作用及不良反應還需進一步的研究與觀察。