精制新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體效果研究

任培森，楊 燚，呂文靜，朱秀同，陳紅秀，尤永君

（天津瑞普生物技術股份有限公司，天津 300381）

新型鴨呼腸孤病毒（novel duck reovirus，NDRV）是一種RNA病毒，能造成鴨法氏囊出血、肝臟不規則出血斑或塊狀壞死，可引起番鴨、半番鴨、麻鴨和北京鴨等水禽發病[1-5]。該病被命名為“新肝病”或“鴨出血性壞死性肝炎”。該病可導致雛鴨出雛率低、免疫抑制和生長遲緩，從而降低鴨飼料的利用率。該病無明顯季節性，感染有明顯的日齡依賴性，發病鴨一般在30日齡內。鴨的日齡越小，發病率和病死率越高[6-7]。

2017年以來，我國山東、河南、江蘇等地區暴發新型鴨呼腸孤病毒病，發病率為5.0%～32.5%，病死率達4%～20%[8-11]。研究表明，新型鴨呼腸孤病毒不僅可水平傳播，還可以經卵垂直傳播[12-13]。有報道稱，新型鴨呼腸孤病毒能經過內部基因組節段的重組和進化使病毒出現新的遺傳和抗原變異，且給鴨群接種商品化滅活苗也不能完全預防病毒的感染和傳播[14-15]。國內目前尚無商品化的疫苗。為了有效控制該病的發生，本試驗使用卵黃抗體做緊急預防和治療，為該病的預防和治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 卵黃抗體

新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體（250 mL/瓶），批號為210701、210702，AGP 效價均為1∶4，由天津瑞普生物技術股份有限公司空港經濟區分公司制備。

1.1.2 新型鴨呼腸孤病毒

RPVA 1301-Z株為凍干毒，毒種批號為NDRV-Q-01，規格為2.0 mL/瓶，由天津瑞普生物技術股份有限公司分離，鑒定，保管和供應。

1.1.3 雛鴨

雛鴨購自聊城市東昌府區恒康養殖專業合作社，雛鴨未進行疫苗免疫，抗體檢測陰性，未發生過鴨出血壞死性肝炎。

1.2 試驗設計

取3、5、7 日齡健康易感雛鴨各100 只，其中90 只肌肉注射新型鴨呼腸孤病毒強毒RPVA1301-Z 株強毒1.0 mL（含100 ID50）。攻毒24 h 后，取其中3、5、7 日齡分別80 只肌肉注射210701 批新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體進行治療，3 日齡鴨注射劑量為0.2、0.3、0.5、1.0 mL/只，不同劑量組分別20 只雛鴨；5、7 日齡鴨為0.3、0.5、1.0、1.5 mL/只，不同劑量組分別20 只雛鴨。取同批3、5、7 日齡雛鴨各10 只不注射抗體作為攻毒對照，10 只作為健康對照，不攻毒也不接種卵黃抗體，同條件下隔離飼養觀察5 日。使用210702 批新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體重復試驗1 次。

1.3 測定指標及方法

每日記錄觀察期內各組雛鴨的發病、存活情況，統計發病情況、治愈率。每次觀察期結束后均剖殺所有組的雛鴨，重點檢查肝臟、脾臟、法氏囊病變情況，以攻毒對照組至少80%雛鴨出現新型呼腸孤病毒感染導致的肝臟或脾臟有典型壞死癥狀，健康對照組應100%健康，為試驗成立，計算抗體治愈率。

2 結果與分析

2.1 不同劑量卵黃抗體治療試驗結果（210701 批次）（見表1）

表1 不同劑量卵黃抗體治療試驗結果（210701批次）Tab.1 Therapeutic results of different dose of yolk antibody（210701 batch）

由表1可知，剖檢發病雛鴨，攻毒對照組90%～100%雛鴨有典型病變；健康對照組雛鴨100%健活且無異常，說明前期處理滿足后續試驗要求。隨著卵黃抗體劑量的增大，雛鴨的治愈率隨之增加。3日齡雛鴨以0.2 mL卵黃抗體治療，治愈率為50%；以0.3 mL治療，治愈率為85%；以0.5、1.0 mL治療，治愈率為100%。5、7日齡雛鴨，以0.3 mL卵黃抗體治療，治愈率為40%～50%；以0.5 mL治療，治愈率為85%～90%；以1.0、1.5 mL治療，治愈率為100%。

2.2 不同療劑量卵黃抗體治療試驗結果（210702 批次）（見表2）

表2 不同療劑量卵黃抗體治療試驗結果（210702批次）Tab.2 Therapeutic results of different dose of yolk antibody（210702 batch）

由表2 可知，剖檢發病雛鴨，攻毒對照組90%～100%發病，有典型病變；健康對照組100%健活且剖檢無異常。3 日齡雛鴨，以0.2 mL 卵黃抗體治療，治愈率為55%；以0.3 mL 治療，治愈率為80%；以0.5、1.0mL 治療，治愈率為100%。5、7日齡雛鴨，以0.3 mL 卵黃抗體治療，治愈率為40%～50%，以0.5 mL 治療，治愈率為85%；以1.0、1.5 mL治療，治愈率為100%。

2.3 卵黃抗體治愈效果

由表1、表2 可知，攻毒對照組均為90%～100%發病；健康對照組100%健活，說明兩個批次卵黃抗體試驗結果均可靠。3 日齡雛鴨，以0.2 mL 卵黃抗體治療，治愈率為52.5%；0.3 mL治療，治愈率為82.5%；0.5、1.0 mL治療，治愈率為100%。5、7日齡雛鴨，以0.3 mL卵黃抗體治療，治愈率為37.5%～42.5%；0.5 mL治療，治愈率為85%～87.5%；1.0、1.5 mL治療，治愈率為100%。

3 討論

近年來，新型鴨呼腸孤病毒病在全國各地區流行趨勢增強，同一養殖企業不同年份分離的病毒毒株之間生物學特性也存在一定的差異，因此對該病的預防已經逐漸成為水禽養殖戶的防控重點[16-17]。新型鴨呼腸孤病毒病可導致肝臟、脾臟和法氏囊的淋巴細胞變性壞死，從而引起免疫抑制[18]，使疫苗免疫失敗，同時可能導致患鴨繼發感染，造成水禽養殖業嚴重的經濟損失。新型鴨呼腸孤病毒病發病日齡低，雛鴨即使免疫疫苗，但可能疫苗尚未產生有效抗體，雛鴨已經發病，新型鴨呼腸孤病毒抗體對于緊急預防、治療有著重要的意義。卵黃抗體注射雛鴨后，抗體在體內能持續存在一段時間，并產生被動免疫保護作用。

本研究中，不同日齡雛鴨人為感染新型鴨呼腸孤病毒24 h后，進行注射卵黃抗體治療，重復試驗2次。3日齡雛鴨0.5 mL/只，治愈率均可達到100%；5、7 日齡鴨1.0 mL/只，治愈率均可達到100%；3～7 日齡的雛鴨0.3 mL/只，均有不同程度的治療效果。抗體試驗組存活雛鴨剖檢無病理變化；攻毒對照組雛鴨90%～100%發病。攻毒對照組發病的雛鴨，肝臟、脾臟均可見典型的出血、壞死，部分法氏囊可見出血性病理變化；健康對照組雛鴨均100%健活，剖檢無病理變化。本試驗僅對人為感染24 h后的雛鴨進行卵黃抗體治療，未進行更長感染時間后的治療，主要是想模擬臨床感染初期，確認抗體的治療效果。試驗結果表明，在鴨群感染初期，對已感染新型鴨呼腸孤病毒但未出現臨床癥狀的雛鴨及時注射抗體進行治療，新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體效果良好。因此，建議在臨床上治療新型鴨呼腸孤病毒引起的鴨出血壞死性肝炎，應早診斷早治療，推薦新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體臨床預防治療使用劑量為5 日齡以下雛鴨，0.5 mL/只；5～7 日齡雛鴨，1.0 mL/只。

4 結論

本研究結果表明，新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體對于感染初期的雛鴨有確切的治療效果，且不同批次卵黃抗體治療結果具有可重復性，具有臨床應用推廣的價值。