肺炎支原體抗體滴度和RNA病原檢測在兒童肺炎支原體肺炎診斷和治療中的應用價值

林琳 應媛媛

肺炎是臨床常見病癥之一，多見于兒童，支原體（Mp）感染是主要致病原因，在兒童社區(qū)獲得性肺炎（CAP）中占比高達10%～32%，且地區(qū)性爆發(fā)流行時可達到55%～80%，對患者危害極大[1]。由于Mp感染而引起的兒童肺炎，與其他病原體所引起的感染疾病在影像學、體征及癥狀等方面具有相似性，難以準確區(qū)分，因此，實驗室病原檢測成為兒童支原體肺炎（Mpp）的有效診斷方法之一[2]。對于血清學檢測Mp感染的診斷方法，臨床常用肺炎支原體抗體滴度檢測，而RNA實時熒光恒溫擴增技術(shù)（SAT）可對RNA病原準確檢測，研究發(fā)現(xiàn)，兩種方法聯(lián)合檢測具有較高的準確率[3]。本次選取442例患兒，研究兒童Mpp診治中肺炎Mp抗體滴度與RNA病原檢測的應用價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取我院于2018年1月～2020年12月診治的442例CAP患兒為研究對象，以實驗室診斷結(jié)果為依據(jù)，分為支原體肺炎組（M組）和非支原體肺炎組（非M組），分別為312例、130例。M組患兒納入標準：①均出現(xiàn)呼吸道感染癥狀，以干咳、發(fā)熱等為主，經(jīng)實驗室檢查確診為Mpp；②急性期、恢復期雙份血清抗體滴度升高≥4倍或單次血清抗體滴度≥1∶160；③資料完整；④家長簽署知情同意書。非M組患兒納入標準：①經(jīng)臨床確診為非Mpp的其他肺炎類型；②復查結(jié)果顯示血清Mp抗體滴度≤1∶80；③資料完整；④家長簽署知情同意書。排除合并精神疾病者、中途退出者及合并血液系統(tǒng)疾病者。以入院前是否使用大環(huán)內(nèi)酯類藥物為依據(jù)，將M組患兒分為使用組（規(guī)律用藥>3d）和未使用組（未用藥及用藥≤3d）。入組病例中，M組男173例，女139例，年齡1～16歲，平均（5.16±2.45）歲。非M組男72例，女58例，年齡8個月～11歲，平均（5.01±2.51）歲。兩組資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P<0.05）。本研究獲倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 抗體滴度檢測 Mp抗體檢測試劑盒由日本富士瑞必歐株式會社提供，采用顆粒凝集法測定抗體滴度，分別設(shè)置為<1∶40、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、>1∶640。

1.2.2 Mp-RNA檢測 Mp核酸檢測試劑盒由上海仁度生物科技有限公司提供，于患兒入院當天采集咽拭子，并放置于生理鹽水中，將等量裂解液加入，制作成待測樣本。加入內(nèi)標后，應用磁珠法對靶標RNA進行提取，對擴增檢測液進行配置后應用核酸擴增儀測定。采用4支Mp-RNA標準品，對待測樣本進行定量分析。

1.3 觀察指標①對比兩組抗體滴度分布情況及Mp-RNA檢測結(jié)果；②分析M組Mp-RNA與抗體滴度檢測結(jié)果；③分析M組不同檢測方法對陽性率的影響因素；④分析不同檢測方法對不同病程患兒的檢測結(jié)果；⑤分析Mp-RNA檢測在Mpp療效評估及短期復發(fā)診斷中的意義。

1.4 統(tǒng)計學方法數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 19.0軟件分析，計量、計數(shù)資料分別用±s、%表示，分別經(jīng)t、χ2檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Mp-RNA檢測結(jié)果及抗體滴度分布對比M組抗體滴度陰性（<1∶160）64例，占比20.51%；陽性（≥1∶160）248例，占比79.49%。抗體滴度陽性率隨病程增加呈升高趨勢，Mp-RNA陽性率隨抗體滴度升高呈下降趨勢；于4～6d后復查，抗體滴度<1∶160患者的滴度均升高≥4倍；以抗體滴度1∶160為截點分組，Mp-RNA陽性率比較，<1∶160組（90.63%）高于>1∶160組（72.85%），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=8.810，P<0.05）。于4～6d后復查結(jié)果顯示，非M組有5例Mp-RNA陽性，占比為3.85%，見表1。

表1 兩組Mp-RNA結(jié)果及抗體滴度分布

2.2 M組Mp-RNA與抗體滴度檢測結(jié)果對比M組抗體滴度陽性率（≥1∶160）為79.49%（248/312），Mp-RNA陽性率為77.24%（241/312），未見明顯差異（χ2=0.463，P>0.05）。兩種檢測方法陽性一致率為58.65%（183/312），陰性一致率為1.92%（6/312），見表2。

表2 M組Mp-RNA與抗體滴度檢測結(jié)果比較（n）

2.3 M組不同方法檢測陽性率的影響因素與<3歲組、>10歲組比較，4～6歲組與7～9歲組兩種檢測方法的陽性率均更高，但整體年齡分組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與病程較短組比較，病程較長組的抗體滴度陽性率更高，Mp-RNA陽性率更低（P<0.05）；入院前藥物使用對兩種檢測方法的陽性率影響差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表3。M組入院時Mp-RNA檢測為陰性共73例，其中14例患兒于3～7d后復查，12例復查結(jié)果為陰性，2例轉(zhuǎn)陽性。

表3 M組不同方法檢測陽性率的影響因素

2.4 不同檢測方法對不同病程患兒的檢測結(jié)果應用單一方法檢測時，病程較長組抗體滴度陽性率較高，而病程較短組Mp-RNA陽性率較高。聯(lián)合檢測以任意一種陽性結(jié)果為感染判斷標準，除4～7d組陽性率為95.71%，其余病程組陽性率均為100%。8～14d組兩種檢測方法均陽性率最高，其次是4～7d組，見表4。

表4 不同病程組不同檢測方法的陽性率比較[n（%）]

2.5 Mp-RNA檢測在Mp療效評估及短期復發(fā)診斷中的意義M組78例患兒入院Mp-RNA結(jié)果為陽性，住院時間為（6.63±2.31）d，期間規(guī)范用阿奇霉素，于出院當天復查，結(jié)果顯示，Mp-RNA轉(zhuǎn)陰27例（34.62%），轉(zhuǎn)陰患兒入院前大環(huán)內(nèi)酯類藥物服用時間為（4.32±3.01）d。Mp-RNA定量檢測結(jié)果顯示，83.33%（65/78）的患兒復查結(jié)果下降，拷貝數(shù)下降至原來的16.8%；51例未轉(zhuǎn)陰者首次測定RNA拷貝數(shù)高于轉(zhuǎn)陰者；43.14%（22/51）的患兒首次拷貝數(shù)>106拷貝數(shù)/ml，轉(zhuǎn)陰組為25.93%（7/27）。

M組中29例患兒出院后1個月再次入院，首次診斷Mpp與再次入院時間間隔為（18.29±7.98）d， 首次入院抗體陽性率為62.07%（18/29），Mp-RNA陽性率為86.21%（25/29），再入院時抗體陽性率為100%，且抗體滴度均>1∶640，Mp-RNA陽性率為27.59%（8/29）。

3 討論

Mp是目前已知獨立生活最小的一種病原微生物，可由鼻、喉、咽等吸入氣溶膠或飛沫等進行傳播，人群普遍易感，多見于學齡兒童、青少年等，以5～10歲為高發(fā)年齡。兒童一旦感染Mp，依據(jù)身體情況不同可出現(xiàn)不同臨床癥狀，且癥狀輕重程度具有一定差異，多數(shù)以高熱為主要表現(xiàn)，體溫可達到39℃，也有部分患兒無發(fā)熱，但多見咳嗽、咳痰等，偶見惡心、斑丘疹及嘔吐等癥狀。Mp侵入呼吸道后，可附著于上皮細胞，對黏膜纖毛的清除作用產(chǎn)生抵抗，進而引起機體氧化應激反應，損傷呼吸道上皮[4～6]。以往，臨床多采用X線、CT等診斷兒童Mpp，但準確度較差，且患兒配合度不高。隨著醫(yī)學技術(shù)不斷發(fā)展，Mp抗體滴度、RNA抗原檢測等均得到廣泛應用，不僅能早期診斷兒童Mpp，還可用于治療及復發(fā)評估，應用價值較高[7]。

本研究發(fā)現(xiàn)，M組Mp-RNA陽性率、抗體滴度陽性率均高于75%，提示兩種方法單一檢測，可取得相近的診斷效率，對于疾病診斷具有較高的準確度。相較于病程較短組，病程較長組抗體滴度陽性率明顯更高，而抗體滴度為1∶160患兒的平均病程為5.89d，提示對于發(fā)病時間為1～7d患兒，單次抗體滴度檢測結(jié)果為1∶160進行診斷，可能存在一定假陰性情況，需聯(lián)合病原檢測，以提高診斷準確性。首次抗體滴度檢測結(jié)果為≤1∶80的M組患者，4～6d后可見抗體滴度升高，而非M組患兒未見明顯升高，提示Mp感染后，對于免疫力正常的兒童來說，短時間內(nèi)可出現(xiàn)抗體滴度明顯升高情況，由此，應用雙份血清對兒童Mpp進行診斷，可提高診斷準確度。同時，對于首次抗體滴度檢測結(jié)果較低患兒，考慮可能處于Mp感染早期，機體內(nèi)抗體仍然處于上升期或尚未產(chǎn)生抗體，應當結(jié)合病原學檢測結(jié)果、臨床癥狀及抗體滴度變化情況等進行綜合診 斷[8]。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，29例再次入院患兒的首次入院Mp-RNA陽性率為86.21%，明顯高于M組平均值，而復查未轉(zhuǎn)陰患兒的早期Mp-DNA定量檢測結(jié)果也高于轉(zhuǎn)陰組，提示PCR病原學檢測中，早期載量高、早期陽性等均與疾病程度密切相關(guān)，可作為兒童Mpp重癥病例的預警判斷因素。分析原因，SAT屬于新型分子生物學檢測方法的一種，相較于傳統(tǒng)PCR檢測方法，其診斷準確度、敏感度均更高[9]。RNA僅在活菌體中存在，自身免疫、用藥等均可導致病原體死亡，或?qū)ζ浠钚援a(chǎn)生抑制，RNA降解、載量由此降低，因此對Mp-RNA進行檢測，對于兒童Mpp的診斷、治療、轉(zhuǎn)歸等均有較高的價值。早期進行PCR病原學檢測，有利于指導臨床合理制定治療方案[10]。

綜上所述，聯(lián)合檢測Mp抗體滴度及RNA病原，可為臨床診斷兒童Mpp及治療提供可靠依據(jù)。