市售蜂蜜中花粉粒總數測定

徐姍娜，盧 軍，侯鴻飛，唐 蕾，金菊萍

（漢中市食品藥品監督檢驗檢測中心，陜西漢中 723000）

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜，與自身分泌物結合后，經充分釀造而成的天然甜物質[1]。蜜蜂采集花蜜時會吸入一部分花粉到蜜囊中，花蜜中不可避免地混入了蜜源植物的花粉，而每種花粉都有自己特有的形態特征，所以花粉是天然蜂蜜具有確定性、穩定性和追溯性的天然標識物。根據蜂蜜中花粉的種類和含量可區分蜂蜜的品種、辨別優劣蜂蜜。

陜西省漢中市北依秦嶺，南屏巴山，氣候溫和濕潤、干濕有度，造就了物種的多樣性。森林覆蓋率為52%，林草的植被率達60%，境內的兩大水系（漢江和嘉陵江）均為長江一級支流，是國家“南水北調”中線工程的水源地。漢中具有良好的蜂養殖自然生態環境資源，土蜂養殖歷史悠久，主要生產的蜜種是油菜花蜜和百花蜜。漢中是傳統的油菜種植生產基地，全市有7.5 億m2的油菜花田，為當地蜂群提供了充足蜜源。而秦巴山脈花草資源豐富，大量的野生山花以及野生或人工栽培的中草藥資源，如黨參、山茱萸、大黃、天麻、杜仲、厚樸、五味子等，都是本地產百花蜜的重要蜜源。近年來，漢中市蜂蜜產業得到突飛猛進發展，2020年7 月20 日實施的優質漢中蜂蜜（T/HZSBX 02—2020）[1]和優質漢中土蜂蜜（T/HZSBX 03—2020）[2]中均將蜂蜜中花粉濃度列為特征指標，參考限量值分別為≥10 000 個/mL和≥14 000 個/mL。

本研究隨機抽取了13 批漢中市市面上銷售的蜂蜜，根據《蜂蜜中植物花粉的測定方法》（GB/T 23194—2008）[3]，分別測定其全部花粉粒含量，以對其品質優劣進行初步判定。

1 材料與方法

1.1 材料

13 批蜂蜜，購于漢中市市場。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑

硫酸，天津市風船化學試劑科技有限公司；乙酸，天津市天力化學試劑有限公司；乙酸酐，天津市天力化學試劑有限公司；甘油，天津市科密歐化學試劑有限公司；苯酚，天津市天力化學試劑有限公司。

1.2.2 儀器

冷凍離心機H2100R，湖南湘儀離心機儀器有限公司；數顯恒溫水浴鍋HH-8，國華電器有限公司；光學顯微鏡Ci-L，尼康儀器有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 試樣的制備

未結晶的樣品，攪拌均勻備用。有結晶的樣品，在密閉情況下，置于55 ℃左右的水浴中溫熱，振蕩，待樣品全部融化后攪勻，冷卻至室溫備用。稱取均勻蜜樣25 g，加入40 ℃的50 mL 蒸餾水，使蜂蜜均勻溶解。

1.3.2 花粉粒總數測定

將試樣溶液倒入離心管中，以2 000 r/min 的速度離心10 min，棄去55 mL 的上清液，加入5 mL 乙酸并拌勻，浸泡2 h。進行離心（2 000 r/min，10 min），棄去10 mL 上清液，加入新鮮配制的乙酸酐和硫酸的混合液6 mL，并拌勻，然后將離心管放入80～90 ℃水浴中加熱7 min。停止加熱后，迅速離心（2 000 r/min，10 min），棄去5 mL 上清液，加10 mL 蒸餾水洗滌，離心水洗3 次后，棄去上清液，使試樣溶液留下約5 mL 的樣液。加入1 mL 50%的甘油保存，并加入2～3 滴苯酚作為防腐劑。

利用血細胞計數板制片，靜置5 min后，于顯微鏡下計數，先用低倍鏡找到計數室所在位置，然后換高倍鏡進行計數。本次采用的血細胞計數板為25 中方格、16 小方格款。

1.4 不同離心轉速對每個計數室花粉?？倲档挠绊憸y定

以6 號蜂蜜為樣本，按照1.3.1 和1.3.2 方法將步驟中所使用的離心轉速和時間依次設定為4 000 r/min 10 min、6 000 r/min 10min、8 000 r/min 10 min、10 000 r/min 10 min、10 000 r/min 5 min，分別計數花粉粒總數。

2 結果與分析

2.1 13 批蜂蜜花粉?？倲档臏y定

按照1 mL 樣液中的總花粉粒數=25 個中方格總花粉粒數×104計算，全部13 批蜂蜜花粉?？倲到y計結果見表1。由表1 可知，不同品牌、不同批次的蜂蜜中花粉粒總量差距較大，其中2、4、7 號樣品中花粉粒數量為0，均購自本地超市，屬大規模工業生產產品。導致花粉粒數為0 的原因有可能是這些品牌的蜂蜜在經過高密度過濾，移除了花粉在內的各種雜質[4]，花粉一方面會影響到蜂蜜的營養價值，另一方面大規模生產中的高溫加熱也會直接影響蜂蜜的口感和風味。因此，選擇小規模生產的土蜂蜜，可以最大程度地品嘗到蜂蜜的原始風味。廣大消費者在購買時可以根據自己的需求選購。

表1 13 批蜂蜜花粉?？倲禍y定結果

2.2 不同離心轉速對每個計數室花粉粒總數的影響

以6 號蜂蜜為樣本，測定不同離心轉速對每個計數室花粉粒總數的影響（見表2），由表2 可知，增大離心轉速后所得花粉粒總數與國標要求的2 000 r/min 比較并無顯著差異(P＞0.05)，而將轉速提高至10 000 r/min，時間縮短至5 min 時所得花粉?？倲蹬c國標要求的2 000 r/min 離心10 min 比較無顯著性差異（P＞0.05），因此在實驗室大批量測定蜂蜜中花粉濃度且條件允許時，可以采用提高轉速縮短時間的方式加快試驗進度。

表2 不同離心轉速對每個計數室花粉粒總數的影響

3 討論

本研究以13 批漢中市市售蜂蜜為研究對象，采用國標方法進行了測定，因本次試驗所采樣品多數為本地生產的百花蜜，所以并未測定單一種類花粉的含量和濃度，而是測定總花粉粒數量。結果顯示，不同品牌、批次的蜂蜜中花粉含量差異較大。其中兩種高山棒棒蜜所含花粉含量最高，可能與取蜜方式、過濾效率有直接關系，因高山棒棒蜜多采用壓榨取蜜法，會混入更多蜂脾和花粉，也帶來了更高的營養價值。有研究顯示壓榨蜂蜜中的花粉含量可比分離蜂蜜高出4、5 倍之多[5]。本次試驗顯示不同蜂蜜的花粉粒測定的確可以反映蜂蜜的品質高低，國標并沒有將蜂蜜中花粉粒含量作為判定蜂蜜真假的依據，但筆者認為蜂蜜中花粉粒含量的測定試驗操作簡單、耗時短、成本低，可以作為一種判斷蜂蜜真偽的初篩手段，經檢測不含花粉?；蛘咚ǚ哿７N類與標示蜜源不吻合者，再通過蛋白質為“內標”的同位素檢測法或高效液相色譜質譜聯用法進行真假的鑒定。