乳中地塞米松殘留量檢測方法的改進研究

宋 鴿，王克超，關蘊杰，秦思文，李慧娟，王 宏

（蒙牛乳業（沈陽）有限責任公司，遼寧沈陽110122）

地塞米松是一種人工合成的腎上腺皮質激素，具有抗病毒、消炎、促進泌乳等多種功效，在養殖業中被頻繁使用，造成動物乳源不同程度的藥物殘留，人體攝入過量可能會引起激素代謝紊亂、肥胖、骨質疏松等病癥，并可能產生致畸、致癌等風險[1-2]。

地塞米松殘留量項目為國家監管機構重點抽檢指標，根據我國《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）、中華人民共和國農業部公告第235號的規定，地塞米松在牛奶中的最大殘留限量為0.3 μg/kg[3-4]。目前，地塞米松檢測方法主要有膠體金免疫層析法[5]、酶聯免疫法[6]、氣相色譜法[7]、氣相色譜-質譜法[8]和液相色譜-質譜法[9-11]等。其中液相色譜-質譜聯用法具有靈敏度高、特異性強、分析速度快等優點被廣泛應用[12-14]。本文基于《牛奶和奶粉中地塞米松殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》（GB/T 22978—2008）和農業部1031號公告《動物源性食品中糖皮質激素類藥物多殘留檢測 液相色譜-串聯質譜法》，通過簡化色譜條件、優化樣品前處理，更換離子源，建立一種快速有效的檢測方法，提高檢驗結果精準性。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

XSE204電子天平；UPLC-TQD高效液相色譜-質譜聯用儀，配有電噴霧離子源（ESI-）；渦旋混合儀；旋轉蒸發儀；高速冷凍離心機；氮吹儀；固相萃取裝置。

1.1.2 試劑

色譜純乙腈、甲醇、色譜純甲酸；地塞米松標準物質（純度＞99%）。HLB固相萃取柱；雞心瓶 150 mL；一次性有機過濾器0.22 μm。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準曲線的制備

準確量取地塞米松標準溶液，用基質空白配制0.5 ng/mL、1 ng/mL、2.0ng/mL、5.0 ng/mL和10.0 ng/mL的標準工作液，繪制標準曲線，相關系數≥0.99。（現用現配）。

1.2.2 樣品處理

稱取5～10 g樣品（精確到0.000 1 g）置于50 mL塑料離心管中，加入20 mL乙腈，渦旋混勻3 min，以8 000 r/min離心10 min，取上清液至雞心瓶中，用旋轉蒸發儀（50±5）℃水浴上減壓蒸發，將提取液濃縮至體積小于5 mL。

1.2.3 凈化

將提取液移至經預處理的HLB固相萃取柱中，分別用兩次10 mL一級水洗滌雞心瓶，將洗滌液移至HLB固相萃取柱中，棄去全部流出液，抽干，用8 mL甲醇以≤ 3 mL/min流速洗脫，收集洗脫液于玻璃試管中，（50±5）℃水浴中氮氣吹干，用1 mL的20%乙腈水溶解殘渣，經過0.22 μm一次性有機過濾器過濾后供液相色譜-串聯質譜儀測定。

1.2.4 測定

（1）液相色譜儀參考條件。色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μL；流速：0.3 mL/min。

（2）質譜參考條件。離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：負離子掃描；定量離子對：437.0/361.0，定性離子對：437.0/391.5；正離子掃描：定量離子對：393.2/373.2，定性離子對：393.2/355.2；流動相：A相：乙腈，B相：0.1%甲酸水，流動相梯度洗脫條件和流速見表1。

表1 流動相梯度洗脫條件和流速

1.2.5 結果計算：

式中：X-試樣中地塞米松殘留量，單位為μg/kg；C-從標準工作曲線得到的試樣溶液中被測組分的濃度，單位為ng/mL；V-試樣溶液定容體積，單位為mL；m-最終試樣溶液所代表的的試樣質量，單位為g。

2 結果與分析

2.1 改進研究試驗結果

2.1.1 標準曲線

依據1.2.1制作標準曲線，得出標準曲線y=155.845x+4.171 81，相關系數為r2=0.997 456，符合相關系數≥0.99的要求。

2.1.2 方法檢出限

由表2可知，依據《食品衛生檢驗方法 理化部分總則》（GB/T 5009.1—2003）附錄A中色譜法檢出限為3倍儀器噪音/標準曲線回歸方程中的斜率[15]，理論計算出該方法檢出限為0.2 μg/kg，故添加0.2 μg/kg濃度的樣品，該濃度加標樣品能夠檢出，色譜峰型正常，回收率結果均在《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）[16]中60%～120%，結果符合要求。

表2 方法檢出限結果

2.1.3 回收率

由表3可知，添加濃度為0.2 μg/kg、 0.3 μg/kg、 1.0 μg/kg共3個濃度點，每個點6次平行測試，回收率結果均在《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）中60%～120%范圍內，結果符合要求。

表3 加標回收率結果

2.1.4 精密度

由表4可知，添加定量檢測限、限量值、5倍定量檢測限3個濃度樣品，連續檢測6個平行樣，相對標準偏差RSD%分別為：12.4%、7.3%、7.3%。依據《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）F.3中精密度的要求，即當被測組分含量在0.1 μg/kg時，實驗室內變異系數≤43%，當被測組分含量在1 μg/kg時，實驗室內變異系數≤30%，符合方法要求。

表4 相對標準偏差結果

2.2 改進后方法對比

使用改進方法與國標方法分別檢測定量檢測限、限量值、5倍定量檢測限3個濃度樣品平行試驗，回收率結果對比，改進方法優于國標方法，具體見表5。

表5 改進方法與國標方法對比表

3 結論與討論

本研究是應用高效液相色譜串聯質譜法建立一種快速有效檢測乳中地塞米松的檢測方法，與國家標準中的方法相比，本方法更改了液相色譜-串聯四級桿質譜儀的離子源，優化了前處理過程，簡化了操作步驟，重新設定了質譜參數，縮短了分析時間，本研究標準曲線線性良好，回收率70.0%～102.7%，精密度7.3%～12.4%，滿足《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）的標準要求，有效提高了檢測結果的準確性，滿足日常檢測需求，解決了實驗室資源配置問題，為保證乳的質量安全提供了技術保障，值得在實驗室中推廣。