基于鹽炙前后成分煎出差異與止瀉作用相關性探討補骨脂丸增效機制

毋啟桐，王金金，楊安南，周 寧, 2，趙 強，李 凱, 2*，張振凌, 2*

基于鹽炙前后成分煎出差異與止瀉作用相關性探討補骨脂丸增效機制

毋啟桐1，王金金1，楊安南1，周 寧1, 2，趙 強3，李 凱1, 2*，張振凌1, 2*

1. 河南中醫藥大學，河南 鄭州 450046 2. 河南省中藥特色炮制技術工程研究中心，河南 鄭州 450046 3. 湖北省藥品監督管理局技術審評核查中心，湖北 武漢 430071

探討鹽炙對補骨脂丸中代表性成分煎出的影響，以及成分與止瀉藥效的相關性。采用HPLC-MS法測定補骨脂丸及3種補骨脂丸模擬品水煎液中13種代表性成分的含量差異，并結合不同給藥組對脾腎陽虛泄瀉模型大鼠的胃腸激素和下丘腦-垂體-腎上腺軸相關指標的影響，采用灰色關聯分析法，對代表性成分與止瀉藥效進行相關性分析，尋找藥效貢獻較大成分。與3種模擬品（模擬I～III號）相比，補骨脂丸水煎液中黃酮類成分如蘆丁、異補骨脂二氫黃酮、新補骨脂異黃酮、補骨脂二氫黃酮、補骨脂寧、異補骨脂查耳酮及補骨脂二氫黃酮甲醚的含量較高，揮發油類成分如茴香醛、反式茴香腦及補骨脂酚的含量較低；與模擬II、III號相比，香豆素類成分如補骨脂素及異補骨脂素的含量較低。不同成分對止瀉藥效的貢獻具有差異，黃酮類和揮發油類成分與止瀉藥效的關聯度較高，香豆素類成分（如補骨脂素與異補骨脂素）與止瀉藥效的關聯度較低。補骨脂、小茴香鹽炙后組成補骨脂丸，能促進黃酮類成分煎出，抑制揮發油類、香豆素類成分煎出，這可能是鹽炙增強其止瀉作用的關鍵環節之一。

補骨脂丸；補骨脂；小茴香；鹽炙；配伍；止瀉；HPLC-MS；脾腎陽虛；灰色關聯分析；黃酮；香豆素；揮發油

補骨脂丸來源于宋《魏氏家藏方》[1]，由鹽補骨脂和鹽小茴香組成，治腎氣虛冷、小便無度。鹽炙主要作用為“引藥下行走腎經”，補骨脂、小茴香鹽炙后配伍使用功效更著，入下焦則溫腎散寒，入中焦則溫脾暖胃。但鹽炙后中藥配伍增效的物質基礎研究還相對缺乏。灰色關聯分析法通常用來明確因素間關聯程度，通過比較2個系統數據發展曲線的接近程度，來推測系統間關聯強弱，發展曲線越接近，即變化趨勢越接近，關聯度就越大[2]，近年來常被用來探討成分與藥效指標的關聯性，從而探尋中藥作用的物質基礎。

補骨脂丸中主要含有香豆素類、黃酮類、揮發油類等成分[3-4]。湯劑是臨床主要應用形式，補骨脂、小茴香為臨床常用藥對，既可作為傳統丸劑，也可作為湯劑使用，為便于研究，本實驗將補骨脂丸及3種補骨脂丸模擬品（模擬I號：鹽補骨脂、生小茴香；模擬II號：生補骨脂、鹽小茴香；模擬III號：生補骨脂、生小茴香）制備成水煎液，采用HPLC-MS法測定不同組合樣品水煎液中香豆素類、黃酮類、揮發油類等共13種代表性成分含量差異，并結合相關止瀉藥效指標進行灰色關聯分析，探討成分與藥效之間的相關性，從而豐富中藥鹽炙增效的科學內涵。

1 儀器與材料

1.1 儀器

LC-20ADXR型高效液相色譜儀，配SPD-M20A檢測器，LCMS-2020單四級桿質譜儀，島津企業管理（中國）有限公司；BT25S型十萬分之一分析天平，賽多利斯科技儀器有限公司；FA2104B型電子天平，上海越平科學儀器（蘇州）制造有限公司；TGL-16M型高速冷凍離心機，常州金壇良友儀器有限公司；KQ-500DV型數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；DZTW型電子調溫電熱套，天津工業實驗室儀器有限公司。

1.2 藥物與試劑

補骨脂，批號180301，亳州市張仲景中藥飲片有限責任公司，產地河南，經河南中醫藥大學藥學院董誠明教授鑒定為豆科植物補骨脂屬植物補骨脂Linn.的干燥成熟果實；小茴香，批號170101，亳州市永剛飲片廠有限公司，產地甘肅，經河南中醫藥大學藥學院董誠明教授鑒定為傘形科茴香屬植物茴香Mill.的干燥成熟果實；對照品補骨脂素（批號C12J8Q39802）、異補骨脂素（批號Y18O8H46134）、異補骨脂二氫黃酮（批號YM0509HA14）、新補骨脂異黃酮（批號ZN1112BD13）、補骨脂二氫黃酮（批號C19J8G28797）、補骨脂寧（批號ZN1112BA13）、補骨脂定（批號Y06J9S65151）、異補骨脂查耳酮（批號Y23J9H64242）、補骨脂二氫黃酮甲醚（批號Y21J3S1）、補骨脂酚（批號YM0320SA14）、蘆丁（批號Y16M9S61523）、茴香醛（批號H04J10Z78823）、反式茴香腦（批號Y24N6S6391）均購自上海源葉生物科技有限公司，質量分數均≥98%；甲醇、甲酸、乙腈均為色譜級，美國Thermo Fisher公司；純凈水，杭州娃哈哈集團有限公司。

2 方法與結果

2.1 樣品的制備

2.1.1 鹽補骨脂 取凈補骨脂1.5 kg，加食鹽水（100 kg補骨脂用食鹽2 kg）拌勻，悶潤4 h，置炒鍋中，以文火（120～150 ℃）加熱，炒制8.5 min，待表面黑色或黑褐色，微鼓起，氣微香，味微咸時取出，放涼[5]。

2.1.2 鹽小茴香 取凈小茴香1.5 kg，用食鹽水（100 kg小茴香用食鹽2 kg）拌勻，悶潤，待食鹽水被吸盡后，置炒鍋內，以文火（120～150 ℃）加熱，炒至微黃、微鼓起，色澤加深，偶有焦斑，味微咸時，出鍋，晾涼[6]。

2.1.3 補骨脂丸 由鹽補骨脂、鹽小茴香等比例組成；補骨脂丸模擬I號、II號、III號分別由鹽補骨脂、生小茴香，生補骨脂、鹽小茴香，生補骨脂、生小茴香等比例組成。

2.2 檢測條件

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent Zorbox Eclipse Plus C18柱（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱溫30 ℃；流動相為乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫條件：0～2 min，5%～20%乙腈；2～5 min，20%～32%乙腈；5～10 min，32%乙腈；10～11 min，32%～45%乙腈；11～23 min，45%乙腈；23～31 min，45%～90%乙腈；31～33 min，90%～5%乙腈；檢測波長為254 nm；體積流量0.2 mL/min；進樣量2 μL。

2.2.2 質譜參數 電噴霧離子源（ESI），選擇性掃描模式，正、負離子同時掃描，離子源噴霧電壓4.5 kV/?3.5 kV，加熱模塊溫度350 ℃，脫溶劑氣溫度250 ℃，霧化氣體積流量1.5 L/min，干燥氣體積流量15 L/min。各成分的分子式、保留時間（R）、質荷比（/）及正、負離子模式等參數見表1。混合對照品溶液及補骨脂丸供試品溶液的HPLC圖及正、負離子模式（ESI+、ESI?）下總離子流圖（TIC）見圖1。

2.3 對照品溶液的制備

分別精密稱取蘆丁、茴香醛、補骨脂素、異補骨脂素、異補骨脂二氫黃酮、新補骨脂異黃酮、補骨脂二氫黃酮、補骨脂寧、補骨脂定、反式茴香腦、異補骨脂查耳酮、補骨脂二氫黃酮甲醚、補骨脂酚對照品適量至10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得質量濃度分別為1.015、2.000、1.152、1.029、1.031、1.024、1.042、1.008、0.817、2.000、1.099、1.027、2.000 mg/mL的單一對照品儲備液；再分別精密量取上述單一對照品儲備液適量，至同一10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得質量濃度分別為4 922.75、35 000.00、131 328.00、118 849.50、2 113.55、8 845.31、10 107.40、1 310.40、5 424.88、25 000.00、7 583.10、7 529.96、208 000.00 ng/mL的混合對照品母液；將混合對照品母液逐級稀釋，得一系列不同質量濃度的混合對照品溶液，待測。

表1 13種代表性成分的檢測信息

1-蘆丁 2-茴香醛 3-補骨脂素 4-異補骨脂素 5-異補骨脂二氫黃酮 6-新補骨脂異黃酮 7-補骨脂二氫黃酮 8-補骨脂寧 9-補骨脂定 10-反式茴香腦 11-異補骨脂查耳酮 12-補骨脂二氫黃酮甲醚 13-補骨脂酚 A-13種成分的混合對照品（HPLC） B-13種成分的混合對照品（ESI+） C-13種成分的混合對照品（ESI?） D-補骨脂丸樣品（HPLC） E-補骨脂丸樣品（ESI+） F-補骨脂丸樣品（ESI?） G-缺補骨脂陰性樣品（HPLC） H-缺補骨脂陰性樣品（ESI+） I-缺補骨脂陰性樣品（ESI?） J-缺小茴香陰性樣品（HPLC） K-缺小茴香陰性樣品（ESI+） L-缺小茴香陰性樣品（ESI?）

2.4 供試品溶液的制備

將鹽補骨脂、鹽小茴香搗碎，過1號藥典篩。分別取鹽補骨脂20 g、鹽小茴香20 g組成補骨脂丸，精密稱定，置圓底燒瓶中，加8倍量水，浸泡30 min，回流提取30 min，濾過；再加6倍量水，回流提取30 min，濾過，合并2次濾液，稀釋至1000 mL，離心（轉速為12 000 r/min）2次，每次10 min，取上清液，即得補骨脂丸供試品溶液。補骨脂丸模擬I號、II號及III號供試品溶液的制備同上。

2.5 方法學考察

2.5.1 專屬性考察 取各單一對照品儲備液、供試品溶液、缺補骨脂陰性供試品溶液、缺小茴香陰性供試品溶液，按照“2.1”項所述的檢測方法進樣，13種代表性成分分離度良好，其他成分對測定無干擾，色譜圖見圖1。

2.5.2 線性關系考察、檢測限和定量限 將“2.2”項下配制的一系列混合對照品溶液按照“2.1”項所述的檢測方法進樣分析，以對照品的質量濃度為橫坐標（），相應峰面積為縱坐標（），繪制標準曲線，得各指標成分的線性回歸方程及相關系數（），所有指標成分均呈現良好的線性關系。將混合對照品溶液進行連續稀釋，以信噪比3∶1和10∶1來確定各指標成分的檢測限和定量限，結果見表2。

2.5.3 精密度試驗 取混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜及質譜方法，連續進樣6次，測得13種代表性成分蘆丁、茴香醛、補骨脂素、異補骨脂素、異補骨脂二氫黃酮、新補骨脂異黃酮、補骨脂二氫黃酮、補骨脂寧、補骨脂定、反式茴香腦、異補骨脂查耳酮、補骨脂二氫黃酮甲醚、補骨脂酚峰面積的RSD分別為1.12%、0.64%、0.60%、0.77%、1.13%、0.99%、0.91%、1.19%、1.02%、0.79%、1.00%、2.60%、2.89%，表明儀器精密度良好。

2.5.4 重復性試驗 取模擬III號6份，精密稱定，以“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜及質譜條件，記錄峰面積，計算供試品溶液中13種代表性成分蘆丁、茴香醛、補骨脂素、異補骨脂素、異補骨脂二氫黃酮、新補骨脂異黃酮、補骨脂二氫黃酮、補骨脂寧、補骨脂定、反式茴香腦、異補骨脂查耳酮、補骨脂二氫黃酮甲醚、補骨脂酚質量分數的RSD分別為3.36%、2.91%、1.63%、3.66%、3.10%、4.87%、4.06%、3.54%、4.39%、4.16%、4.43%、3.18%、4.72%，表明該方法重復性良好。

2.5.5 穩定性試驗 取同一模擬III號供試品溶液，分別在不同時間（制備后0、2、4、6、8、10、12、24 h）進樣分析，計算13種代表性成分蘆丁、茴香醛、補骨脂素、異補骨脂素、異補骨脂二氫黃酮、新補骨脂異黃酮、補骨脂二氫黃酮、補骨脂寧、補骨脂定、反式茴香腦、異補骨脂查耳酮、補骨脂二氫黃酮甲醚、補骨脂酚峰面積的RSD分別為2.25%、1.89%、1.04%、4.06%、4.48%、3.85%、4.55%、3.36%、4.33%、4.17%、4.66%、3.52%、2.95%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

表2 13種代表性成分的回歸方程和相關參數

2.5.6 加樣回收率試驗 分別精密稱取已測定13種指標成分含量的模擬品（生補骨脂10 g＋生小茴香10 g），平行6份，分別加入“2.2”項下單一對照品溶液適量，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，以“2.1”項下方法進樣分析，計算得13種代表性成分蘆丁、茴香醛、補骨脂素、異補骨脂素、異補骨脂二氫黃酮、新補骨脂異黃酮、補骨脂二氫黃酮、補骨脂寧、補骨脂定、反式茴香腦、異補骨脂查耳酮、補骨脂二氫黃酮甲醚、補骨脂酚的平均加樣回收率分別為92.49%、105.22%、96.52%、96.32%、88.76%、91.87%、92.23%、107.89%、103.06%、105.13%、89.88%、92.69%、102.34%，RSD分別為3.50%、2.76%、1.29%、2.07%、4.60%、3.90%、3.14%、5.08%、3.27%、4.79%、4.14%、3.25%、5.34%。

2.5.7 樣品含量測定 按“2.3”項下方法制備補骨脂丸和3種模擬品供試品溶液，按“2.1”項下方法進樣分析，計算13種代表性成分的質量分數（扣除水分，以干燥品計算含量，生補骨脂含水量6.48%、鹽補骨脂含水量6.17%、生小茴香含水量6.87%、鹽小茴香含水量5.51%），結果見表3。

表3 不同樣品中13種代表性成分的含量測定 (, n = 3)

與模擬III號比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01simulants group III

2.6 補骨脂丸及補骨脂丸模擬品水煎液中代表性成分含量差異

通過SPSS 20.0軟件對補骨脂丸及3種補骨脂丸模擬品中13種代表性成分的含量結果進行單因素方差分析，結果見表3。與模擬III號（由生補骨脂、生小茴香組成）相比，補骨脂丸水煎液中，異補骨脂二氫黃酮、新補骨脂異黃酮、補骨脂二氫黃酮明顯升高（＜0.01），補骨脂二氫黃酮甲醚明顯升高（＜0.05），補骨脂素、異補骨脂素、茴香醛及反式茴香腦明顯降低（＜0.01）；模擬I號水煎液中，新補骨脂異黃酮明顯升高（＜0.01），補骨脂素、異補骨脂素、反式茴香腦及異補骨脂查耳酮明顯降低（＜0.01）；模擬II號水煎液中，異補骨脂二氫黃酮、新補骨脂異黃酮、異補骨脂查耳酮、補骨脂二氫黃酮甲醚、補骨脂定和茴香醛明顯降低（＜0.01），補骨脂二氫黃酮和反式茴香腦明顯降低（＜0.05）。其余成分各組之間無顯著性差異，但也具有一定的變化趨勢。

與3種模擬品相比，補骨脂丸中蘆丁、異補骨脂二氫黃酮、新補骨脂異黃酮、補骨脂二氫黃酮、補骨脂寧、補骨脂定及補骨脂二氫黃酮甲醚7個成分含量均升高，而茴香醛、反式茴香腦及補骨脂酚含量降低；與模擬II、III號相比，香豆素類如補骨脂素、異補骨脂素的含量降低。

將補骨脂丸及補骨脂丸模擬品中13種代表性成分，分別按照香豆素類、黃酮類及揮發油類進行分類，并比較不同類型成分含量變化。與3種模擬品相比，補骨脂丸水煎液中香豆素類和揮發油類成分煎出減少，黃酮類成分煎出增加。與模擬III號相比，模擬I號和II號呈現共同趨勢：黃酮類、香豆素類和揮發油類成分煎出均減少。

2.7 化學成分與止瀉藥效相關性分析

2.7.1 指標水平檢測 鹽炙對補骨脂丸成分煎出的影響，最終表現為藥理作用差異。課題組前期已建立脾腎陽虛泄瀉大鼠模型，探討了補骨脂丸和3種補骨脂丸模擬品對脾腎陽虛泄瀉大鼠的干預作用，發現補骨脂丸溫腎助陽、暖脾止瀉的作用優于3種補骨脂丸模擬品，本實驗造模、分組、給藥參照已發表文獻方法[7]。取雄性SD大鼠（共117只，造模過程中死亡16只，剩余101只）適應性喂養3 d后，隨機分為9組，分別為對照組、模型組、陽性藥參苓白術丸組、鹽補骨脂組、生補骨脂組、補骨脂丸組及模擬補骨脂丸I～III組。除對照組外，其他各組大鼠每天上午ig給予氫化可的松注射液（15 mg/kg），連續14 d致腎陽虛，從第15天開始每天上午ig冰番瀉葉水煎液（10 g/kg），連續14 d，致脾陽虛瀉下。除對照組和模型組外，其余各給藥組從第15天開始，每天下午ig給藥，陽性藥組給予參苓白術丸混懸液（2 g/kg），鹽補骨脂組、生補骨脂組、補骨脂丸組及模擬補骨脂丸I～III組按生藥劑量8 g/kg給藥，連續給藥14 d，對照組和模型組給予同等體積生理鹽水。

胃腸激素中胃泌素促進胃酸和胃蛋白酶的分泌，并促進消化道黏膜生長及胃腸道平滑肌收縮，脾虛泄瀉使胃腸運動加劇，胃泌素水平偏高[8]；氫化可的松為外源性糖皮質激素，可通過抑制垂體前葉促腎上腺皮質激素的釋放，而減少腎上腺酮的分泌，同時促進蛋白質分解、加快能量代謝，造成機體“耗竭”，繼而誘發腎陽虛癥狀。藥效學指標選用胃腸激素和下丘腦-垂體-腎上腺軸相關指標胃泌素、促腎上腺皮質激素（adrenocorticotrophic hormone，ACTH）、腎上腺酮進行測定，各組大鼠血清中指標水平測定結果見表4。

本實驗采用灰色關聯分析法[9-10]，對補骨脂丸及3種補骨脂丸模擬品中代表性成分和止瀉藥效指標進行相關性分析，探討化學成分與止瀉作用的貢獻度，以探討鹽炙增效機制。

表4 補骨脂丸及補骨脂丸模擬品大鼠血清胃泌素、ACTH、腎上腺酮水平(, n = 10)

2.7.2 原始數據的處理 以胃泌素、ACTH、腎上腺酮數據作為參考數列，以代表性成分的含量作為比較數列，采用均值化方法變換原始數據，得到均值化處理數列。

2.7.3 絕對差序列及關聯系數的計算 經數據變換的比較數列記為Y()，參考數列記為o()，計算各比較數列與參考數列的絕對差，稱為絕對差序列，即Δoi()＝|o(m)－Y(m)|。

求比較數列｛Y()｝與參考數列｛o()｝的關聯系數（oi），分辨系數＝0.5（0＜＜1，一般取0.5），其計算公式為oi＝[Δmax＋Δmin]/[Δmax＋Δoi()]。

2.7.4 關聯度 關聯度為各成分關聯系數的平均值，結果見表5。補骨脂丸及3種補骨脂丸模擬品中，與止瀉作用相關指標胃泌素關聯度較高的成分為茴香醛＞補骨脂酚（關聯度＞0.7）；與ACTH關聯度較高的成分為新補骨脂異黃酮＞補骨脂二氫黃酮＞補骨脂二氫黃酮甲醚＞補骨脂寧＞補骨脂定＞異補骨脂二氫黃酮（關聯度＞0.7）；與腎上腺酮關聯度較高的成分為異補骨脂二氫黃酮＞補骨脂寧＞蘆丁＞補骨脂酚＞補骨脂二氫黃酮＞新補骨脂異黃酮＞茴香醛＞補骨脂定（關聯度＞0.7）。總體上，補骨脂丸及3種補骨脂丸模擬品的止瀉作用與黃酮類成分相關性較高，與香豆素類相關性較低。

3 討論

補骨脂丸與3種補骨脂丸模擬品相比，香豆素類和揮發油類成分含量降低，而黃酮類成分含量升高。模擬I、II號與模擬III號相比，黃酮類、香豆素類和揮發油類成分煎出均減少。因此，補骨脂和小茴香鹽炙后組成補骨脂丸，可促進復方中黃酮類成分的煎出，抑制香豆素類和揮發油類成分的煎出。

表5 13種代表性成分含量與止瀉藥效指標的關聯度分析結果

鹽炙促進黃酮類成分煎出。相比其他模擬品，補骨脂丸水煎液中黃酮類成分含量升高，可能原因是①鹽炙過程中的“殺酶保苷”，使苷類成分更好的保留；②補骨脂中的磷脂類成分和小茴香中的脂肪酸類成分都屬于表面活性劑，可形成單個膠束或磷脂-脂肪酸混合膠束。2種以上表面活性劑締合而成的混合膠束，具有更低的臨界膠束濃度，更好的穩定性[11-12]。而無機鹽的存在，一是能降低表面活性劑臨界膠束濃度[13-14]，使其更易形成膠束，增大膠束直徑；二是能降低離子頭相互排斥作用，使更多表面活性劑離子進入膠團中，疏水端更集中，提高膠束締合數量，增加增溶空間[15-16]。黃酮類成分與膠束親和性更強，這可能是鹽炙后黃酮類成分含量升高的原因。

鹽炙抑制香豆素類成分煎出。與模擬III號相比，補骨脂丸和模擬I號的水煎液中香豆素類成分補骨脂素、異補骨脂素的含量均明顯降低，其原因可能為：①鹽炙主要包括鹽水悶潤和炒制兩個過程，在鹽水悶潤時，補骨脂處在低溫、濕潤的環境中，補骨脂苷和異補骨脂苷被酶解為補骨脂素和異補骨脂素；在炒制的過程中，酶在高溫作用下失去活性，而“熱因素”大于“鹽或水因素”，使苷類成分更好的保留，從而苷元成分補骨脂素和異補骨脂素含量下降[17]；②補骨脂素和異補骨脂素為呋喃香豆素類化合物，鹽炙過程中的高溫可能致其開環而含量降低[18]；③表面活性劑可以形成具有增溶作用的膠束，但不同的化合物在同一膠束體系中存在競爭性，致使同一體系中，與疏水端極性相近的物質會占領更多的結合位點，從而抑制極性更大或極性更小的物質與膠束結合。黃酮類成分較香豆素類成分可能占據了更多結合位點，使香豆素類成分含量降低。基于以上3大方面因素的影響，補骨脂鹽炙后與小茴香配伍，補骨脂素和異補骨脂素的含量降低。

鹽炙抑制揮發油類成分煎出。與補骨脂丸模擬品相比，補骨脂丸中揮發性成分補骨脂酚、茴香醛和反式茴香腦的含量降低，可能與鹽炙過程中高溫降低揮發油含量，及不同成分競爭性結合膠束能力不同有關，從而影響揮發油類成分的煎出。

研究證明，蘆丁具有一定的止瀉作用[19-20]，新補骨脂異黃酮、補骨脂二氫黃酮甲醚、補骨脂酚、補骨脂素和異補骨脂素等成分止瀉藥效貢獻率較高[21]，這與本實驗灰色關聯分析的結果基本一致。補骨脂酚是補骨脂肝腎毒性的來源之一[22-24]，小茴香中以反式茴香腦和茴香醛等為主的揮發油類成分具有促進胃腸蠕動的作用[25-26]。相關性分析結果表明，黃酮類成分與止瀉藥效相關度較高，揮發油類成分次之，香豆素類成分中補骨脂素和異補骨脂素與止瀉藥效相關性較低。鹽炙后配伍組成補骨脂丸，促進黃酮類成分煎出，抑制揮發油類成分煎出，可能是鹽炙后止瀉作用增強的主要原因之一。

鹽炙炮制目的主要體現在增效和緩燥，補骨脂“性本大燥毒”，鹽炙可緩和其燥性。補骨脂素和異補骨脂素作為補骨脂的主要成分，鹽炙后體外溶出降低，但與止瀉作用關聯度較小，這是否與鹽炙緩和燥毒有關，需要進一步研究。此外炮制增效不僅與化學成分體外溶出相關，還與化學成分體內過程有關，課題組將繼續研究補骨脂丸中成分體內過程，以進一步豐富中藥鹽炙炮制機制科學內涵。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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To explore synergistic mechanism of Buguzhi Pills based on correlation between antidiarrheal effect and difference of ingredients before and after salt processing

WU Qi-tong1, WANG Jin-jin1, YANG An-nan1, ZHOU Ning1, 2, ZHAO Qiang3, LI Kai1, 2, ZHANG Zhen-ling1, 2

1. Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China 2. Henan Research Center for Special Processing Technology of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China 3. Center for Evaluation and Inspection of Hubei Medical Products Administration, Wuhan 430071, China

To explore the influence of salt processing on the representative decoction components of Buguzhi Pills (補骨脂丸), and the correlation between the components and the antidiarrhea effect.HPLC-MS was used to determine the differences of 13 representative components in decoction of Buguzhi Pills and three simulants of Buguzhi Pills. Combined with the different experimental groups’ results on spleen-kidneydeficiency diarrhea model rats about their gastrointestinal hormone and related indexes of hypothalamus-pituitary-adrenal axis, then gray correlation analysis method was used to analyze the correlation between the ingredients and the antidiarrhea effects to determine major contributors in efficacy.Compared with the three simulants, the decoction of Buguzhi pills was higher in flavonoids such as rutinum, isobavachin, neobavaisoflavone, bavachin, corylin, isobavachalcone and bavachinin, while it was lower in volatile oils, for instance, anisaldehyde, trans-anethol and bakuchiol. Moreover, compared with the group II and III, it was lower in coumarins like psoralen and isopsoralen. And the ingredients vary in the antidiarrhea efficacy: The flavonoid and volatile oil were highly correlated with the antidiarrhea efficacy, whereas the coumarin (such as psoralen and isopsoralen) had a low correlation.After salt processing,andformed Buguzhi Pills, which can promote the dissolution of flavonoids and inhibit the dissolution of volatile oils and coumarins, this may be one of the key processes in salt processing to enhance the antidiarrhea effect.

Buguzhi Pills;;; salt processing; compatibility of medicines; antidiarrheal; HPLC-MS; spleen-kidneydeficiency; gray correlation analysis; flavonoids; coumarin; volatile oils

R283.1

A

0253 - 2670(2021)21 - 6493 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.21.006

2021-06-03

國家自然科學基金面上項目（81873005）；河南省高校科技創新人才支持計劃（21HASTIT047）；河南省高等學校青年骨干教師培養計劃（2018GGJS083）；大學生創新創業訓練計劃項目（201810471002）

毋啟桐（1997—），女，碩士研究生，主要從事中藥炮制物質基礎及炮制機制研究。E-mail: 1106766001@qq.com

李 凱，男，教授，碩士生導師，從事中藥炮制研究。Tel: (0371)65962746 E-mail: cpulikai@163.com

張振凌，女，教授，博士生導師，從事中藥炮制研究。Tel: (0371)65962746 E-mail: zhangzl6758@163.com

[責任編輯 鄭禮勝]