水產品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測技術研究進展

尹華丁，張 蕾，丁亞平，張夢雪，趙永坡

（1.石家莊市畜產品和獸藥飼料質量檢測中心 050000；2.石家莊市農林科學研究院 050000）

隨著我國居民生活水平的提高，水產品已經是居民餐桌日常的食物，水產養殖也日益發達。 水產品具有高蛋白、低脂肪的特點，是一類適合人類飲食的食物。 但是，近年來隨著養殖業的發展，獸藥殘留成為了影響水產品質量安全的重要問題。 氟喹諾酮（fluoroquinolones，FQs）類獸藥具有廣譜抗菌，殺菌效果好，成本低等優點，近年來在水產養殖業得到了廣泛的使用，較為常見的藥物有環丙沙星、恩諾沙星等。 過分的濫用導致了水體受到污染，水產品中藥物殘留超標，被人類食用后可以造成人體內分泌系統、消化系統等的損傷。 因此，建立靈敏度高、操作簡便、高通量的檢測方法勢在必行， 本文介紹了幾種針對水產品中氟喹諾酮類藥物的檢測方法。

1 膠體金法

膠體金免疫層析法一般用于大量樣品的初篩工作，該方法特異性高，靈敏度較高，操作簡單，檢測所需時間短。 宗婧婧等采用膠體金免疫層析法檢測水產品中15 種喹諾酮類藥物，樣品用0.1%甲酸乙腈溶液提取，正己烷除脂，膠體金試紙條檢測，檢測時間約為3～5min，恩諾沙星、環丙沙星等15 種喹諾酮類藥物檢出限在0.3～5μg/kg，檢測結果與液質聯用法驗證結果一致[1]。

2 酶聯免疫法

酶聯免疫法可作為半定量檢測方法，具有快速、靈敏、高通量等優點，操作方法簡單，特異性好，適合于基層檢測站使用。 鄭晶等運用酶聯免疫分析方法測定鰻魚中恩諾沙星殘留， 最低檢測限為3μg/kg。 向樣品中分別添加25、50、100μg/kg 3 個濃度水平的恩諾沙星，平均回收率分別為74.5%、76.6%和66.5%。 特異性試驗結果表明與喹諾酮類中的其它藥物以及其他類抗生素均無交叉反應[2]。

王強等建立了檢測水產品中6 種氟喹諾酮類藥物殘留的直接競爭酶聯免疫吸附分析方法，針對環丙沙星、恩諾沙星、諾氟沙星、培氟沙星、沙拉沙星和雙氟沙星6 種氟喹諾酮類藥物的檢測限(LOD)均不超過0.5ng/mL，對蝦、鰻鱺和鯽魚三種水產樣品中添加5.0、10.0 和20μg/kg 時，加標回收率為70.4%～104.1%[3]。

楊金易等建立了水產品中3 種喹諾酮類(恩諾沙星、環丙沙星、氧氟沙星)獸藥多殘留的新型QuEChERS 前處理技術結合酶聯免疫快速檢測的分析方法， 樣品批內和批間平均回收率分別為94.10%、93.70%[4]。

3 高效液相色譜法

高效液相色譜-熒光檢測器法是較為常用的檢測氟喹諾酮類藥物的實驗室檢測方法。 蘭承興等針對農業部783 號公告-2-2006 的方法進行了改進， 針對流動相比例， 洗脫體積等進行優化， 實現了在10～40μg/kg 加標濃度下， 回收 率為72.40%～83.68%，優化后的方法回收率高，重復性和分離效果好[5]。

賀江等采用固相萃取—超高效液相色譜法測定水產品中6種氟喹諾酮類藥物殘留， 固相萃取技術在獸藥殘留檢測中已經得到了越來越多的應用，其具有操作簡便，回收率高的特點，逐漸取代了液液萃取的操作；超高效液相色譜法分離度更好，能夠在更短的時間完成分析。 該方法添加回收率為63.69%～90.83%，最低檢出限為0.5～1.8μg/kg[6]。

4 高效液相色譜-串聯質譜法

液質聯用法檢測獸藥殘留一般作為確證方法， 能夠有效地進行定性以及定量，MRM 方式作為成熟的質譜檢測方式， 已經是近年來最為常用的實驗室檢測方法。 梁晶晶等采用高效液相色譜-串聯質譜法快速測定水產品中19 種喹諾酮類藥物殘留，應用PRiME HLB 凈化技術作為前處理方式， 對樣品的凈化、濃縮、液相色譜分離及串聯質譜等相關檢測參數進行了優化，各組分在各自濃度范圍內線性關系良好， 平均回收率為72.1%～119.9%，檢出限均為0.5μg/kg，定量下限均為1.5μg/kg[7]。

質譜法還有一種更加具有優勢的定量方法-內標法。采用同位素內標來定量，可以忽略基質效應造成的影響，大大提高回收率。 周偉光等建立了超高壓液相色譜-串聯質譜方法快速檢測水產品中9 種氟喹諾酮類藥物殘留量的方法。9 種氟喹諾酮類藥物在2.5μg/kg、5.0μg/kg、10.0μg/kg 3 個 加 標 濃 度 下 平 均 回 收 率75%～110%[8]。

5 高效液相色譜-高分辨質譜法

高分辨質譜在獸藥殘留檢測領域主要使用的是四極桿-飛行時間質譜（Q-TOF），其特點是通量高，能夠一次檢測多種化合物，而且對于未知目標物能夠進行很好的定性分析，在定量方面檢出限也能滿足一般的需求。 章紅等采用QuEChERS 方法作為預處理， 四極桿-飛行時間質譜法建立了典型水產品中的15 種喹諾酮類藥物殘留的快速篩查方法。 15 種喹諾酮類殘留藥物檢出限為0.5～1.5μg/kg，方法平均回收率在72.3%～102.1%[9]。

6 毛細管電泳法

除以上的速測以及實驗室檢測方法外， 常用的水產品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測方法還包括毛細管電泳法， 陳宗保等建立了一種利用改性納米金粒子富集與毛細管電泳-電化學發光(CE-ECL) 法測定水產品中4 種氟喹諾酮類藥物殘留的分析方法，該方法用于鰻魚樣品的分析，回收率為94.5%～112%[10]。

7 結語

國內水產養殖越來越發達， 養殖用藥也成為了困擾水產品質量安全的一大問題，尤其是氟喹諾酮類藥物療效較好，成本低廉，目前已經被廣泛用于水產養殖治療過程中。 但是由于藥物殘留危害巨大，已經引起了廣泛的重視，我國也專門針對此類藥物出臺了相應規范。 由此引發的殘留檢測也受到了空前的重視，各種速測方法、實驗室確證方法層出不窮，其中膠體金法、酶聯免疫法前處理簡單，適合大批量樣品做快速篩查，但準確度有所欠缺。 高效液相色譜法是最為常用的檢測方法，靈敏度較高，但是由于色譜柱分離性能受到基質影響較大，定性能力有較大缺陷。液相色譜-串聯質譜聯用法和液相色譜-高分辨質譜聯用法作為近年來常用的實驗室確證檢測方法， 擁有較高的定性能力和定量能力，是較為理想的實驗室檢測方法，但由于設備昂貴，限制了基層檢測機構的使用。 毛細管電泳法分離度高，成本較低，但檢出限較高。 在實際檢測中，要根據樣品數量，檢測樣品的基質，實驗室設備等條件選擇合理的檢測方法。