不同免疫方式對(duì)雞群抗體消長(zhǎng)規(guī)律的影響

2021-01-09 05:38:08王雪敏李明珠李佳佳薛曉陽(yáng)周守長(zhǎng)河北邯鄲華裕農(nóng)業(yè)科技有限公司057150

今日畜牧獸醫(yī) 2020年11期

王雪敏，李明珠，李佳佳，薛曉陽(yáng)，周守長(zhǎng)（河北邯鄲華裕農(nóng)業(yè)科技有限公司 057150）

1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/h2>
對(duì)不同兩個(gè)場(chǎng)區(qū)，分別用兩種方法進(jìn)行同一種疫苗免疫，通過(guò)HI 抗體檢測(cè)，評(píng)價(jià)免疫方法。

2 實(shí)驗(yàn)材料及雞群

試驗(yàn)雞群，某種雞場(chǎng)A301 批次，420 日齡；某種雞場(chǎng)B301批次，415 日齡。免疫疫苗，T3 新支二聯(lián)活疫苗（VGGA+ma5+QX）。

3 實(shí)驗(yàn)分組

3.1 試驗(yàn)分組

試驗(yàn)組一（A 場(chǎng)）：某種雞場(chǎng)A301 批次中固定30 只雞，用T3 新支二聯(lián)活疫苗（VGGA+ma5+QX)進(jìn)行點(diǎn)眼免疫，免疫劑量為1 羽份，另固定飲水免疫的30 只雞作為試驗(yàn)對(duì)比對(duì)象，免疫劑量為2 羽份。

試驗(yàn)組二（B 場(chǎng)）：某種雞場(chǎng)B301 批次中固定30 只雞，用T3 新支二聯(lián)活疫苗（VGGA+ma5+Q)進(jìn)行點(diǎn)眼免疫，免疫劑量為1 羽份，另固定飲水免疫的30 只雞作為試驗(yàn)對(duì)比對(duì)象，免疫劑量為2 羽份。

3.2 檢測(cè)時(shí)間

分別在免疫前1d、免疫后16d、免疫后30d 檢測(cè)進(jìn)行采樣，采樣雞只包括固定的30 只點(diǎn)眼雞只，以及固定的飲水免疫的30只雞，通過(guò)HI 抗體檢測(cè)。

4 檢測(cè)方法

4.1 物品準(zhǔn)備

一次性96 孔V 型反應(yīng)板，移液器（配有一次性槍頭；待檢血清；試驗(yàn)抗原；生理鹽水；公雞紅細(xì)胞；100μL 單道移液器；100μL 八道移液器；一次性移液器吸頭；9cm 直徑玻璃平皿；一次性96 孔v 型板；微量振蕩器；離心機(jī)；10mL 離心管；一次性手套、一次性口罩、記號(hào)筆等材料。）

4.2 抗凝劑、1%雞紅細(xì)胞配比

采血：5mL 注射器吸取1mL 配置好濃度為3.8%的檸檬酸鈉抗凝劑，采用翼根靜脈方法進(jìn)行采血。

紅細(xì)胞的洗滌：將采集好的抗凝血注射到10mL 離心管中，向離心管中加滿生理鹽水并混勻，放入離心機(jī)內(nèi)配平，3000rpm離心3min 后，棄掉上清，重復(fù)清洗3 次，離心后得到的紅細(xì)胞沉淀加入生理鹽水后放置4℃冷藏備用。

抽出所需的生理鹽水，并從中抽出棄去紅細(xì)胞所占量，即紅細(xì)胞與生理鹽水比例為1∶100，用移液器插入含有紅細(xì)胞離心管的底部進(jìn)行抽取紅細(xì)胞，加入生理鹽水，反復(fù)吹吸混勻備用。

4.3 實(shí)驗(yàn)操作細(xì)則

4.3.1 血液凝集（HA）試驗(yàn)采用96 孔板微量法操作。

4.3.1.1 在微量反應(yīng)板上，從第1 孔加生理鹽水，依次加到12 孔，每孔分別加入生理鹽水0.025mL。

4.3.1.2 在第1 孔按照生理鹽水與抗原1∶1 的比例加入25μL 的抗原，充分震蕩成均勻的混懸液。

4.3.1.3 第一孔混懸液震蕩均勻后，從第1 孔吸取25μL 混懸液加入到第12 孔，依次倍比倍稀釋至11 孔，再?gòu)牡?1 孔吸出25μL 懸液連同槍頭一起丟棄。

4.3.1.4 體積分?jǐn)?shù)為1%雞紅細(xì)胞懸液，每孔依次加入25μL充分震蕩混勻。

4.3.1.5 振蕩混勻后，在25℃的室溫下靜置20min 后觀察其結(jié)果，陽(yáng)性對(duì)照孔的紅細(xì)胞完全凝集。

4.3.1.6 結(jié)果判定：微量板靜置20min 后，2min 內(nèi)讀取血液凝集結(jié)果，紅細(xì)胞凝集抑制呈現(xiàn)明顯的淚滴流淌狀。完全血凝（不流淌）的抗原最高稀釋倍數(shù)代表一個(gè)血凝單位（HAU）。

4.3.2 血凝抑制（HI）試驗(yàn)（微量法）

4.3.2.1 根據(jù)1 試驗(yàn)結(jié)果配制4HAU 的病毒抗原。以完全血凝的抗原最高稀釋倍數(shù)作為一個(gè)抗原的效價(jià)，稀釋倍數(shù)除以4即為含4HAU 的抗原的稀釋倍數(shù)。例如：如果血凝的終點(diǎn)滴度為1∶256，則4HAU 抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是1∶64（256 除以4）。

4.3.2.2 在一次性板的1～12 孔加入25μL 的生理鹽水。

4.3.2.3 抽取25 微升血清加入第1 孔內(nèi)，充分混勻后吸取25μL 于第2 孔，依次對(duì)倍稀釋至11 孔，從第11 孔吸取25μL 棄去。

4.3.2.4 1～11 孔均加入含4HAU 混勻的抗原液25μL，振蕩混勻，室溫（約20℃～25℃）靜置25min。

4.3.2.5 每孔加入25μL 體積分?jǐn)?shù)為1%的雞紅細(xì)胞懸液，振蕩混勻，室溫（約20℃～25℃）靜置25min，對(duì)照孔紅細(xì)胞將呈明顯紐扣狀沉于孔底。

4.3.2.6 結(jié)果判定

以完全抑制4 個(gè)抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI 滴度。

附錄HA 和HI 試驗(yàn)用溶液的配制

1%雞紅細(xì)胞懸液制備：

采集至少3 只無(wú)免疫的健康公雞的血液與抗凝劑4∶1 混合，用生理鹽水洗滌3 次左右，前兩次用2000r/min 離心3min，最后一次以2500r/min 離心3min，洗滌后用生理鹽水配成體積分?jǐn)?shù)為1%紅細(xì)胞懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

5 試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果詳見(jiàn)表1。通過(guò)表1 可見(jiàn)：在本次試驗(yàn)中，使用飲水免疫后，ND 抗體水平未有明顯變化，抗體離散度從數(shù)值上看有下降趨勢(shì)，但從抗體滴度跨度看，沒(méi)有顯著影響。使用點(diǎn)眼免疫后，ND 抗體均呈現(xiàn)小幅度升高趨勢(shì)，且離散度得到較好的改變。