PUMA、IQGAP1在胰腺癌中的表達及與臨床病理、預后生存的相關性

胡懷遠 夏燕 雍翔 鄒萍 劉巖

胰腺癌是一種惡性程度極高的腫瘤，患者大多預后差。目前臨床治療胰腺癌以手術切除為首要治療手段，但由于該病早期誤診、漏診率高，導致生存率極低［1］。積極尋找胰腺癌新的標志物對于胰腺癌的早期診斷及治療具有重要的臨床價值。凋亡調控基因（53 Up-regulated Modulator of Apoptosi，PUMA）為P53基因中誘導細胞凋亡的重要介質，可阻礙線粒體發揮功能，刺激凋亡線粒體蛋白釋放，在肝癌、胃癌等惡性腫瘤中均有表達［2］。IQ 結構域GTP 酶激活蛋白（IQ-domain GTPase-activating proteins，IQGAPs）是鳥苷三磷酸酶活化蛋白家族，IQGAP1 蛋白屬于其家族成員之一，具有多個結構域［3］。有學者研究指出，IQGAP1可通過轉導信號通路刺激腫瘤細胞的增殖、遷移［4］。本文旨在探討PUMA、IQGAP1 蛋白在胰腺癌中的表達及其與臨床病理、預后生存的相關性，現研究報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年10月至2018年10月本院收治的74 例胰腺癌患者胰腺癌組織標本、遠離胰腺腫瘤3 cm 的癌旁組織標本各74 份。其中男44例，女30 例；平均年齡（55.19±4.52）歲；腫瘤直徑最大為8.5 cm，最小1.8 cm；腫瘤位于胰腺頭頸部39 例，位于體尾部35 例。納入標準：①CT 檢查提示胰周脂肪層消失，出現雙軌征，局部出現凸起的腫物，并經術后病理檢查確診為胰腺癌［5］；②均在入院后2 周內進行根治性手術切除；③術前未接受過放、化療等輔助治療。排除標準：①合并惡性腫瘤、阿爾茲海默癥者、因精神障礙無法配合治療者；②病理檢查結果為胰腺囊性腫瘤者；③因非胰腺癌死亡者及隨訪期間失訪者。本研究經醫院醫學倫理委員會批準通過，受試者或其家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 標本采集

PUMA、IQGAP1 標本均經甲醛固定、石蠟包埋、切片、DAB 顯色劑顯色、蘇木精復染、乙醇脫水、二甲苯透明，中性樹膠封固等步驟處理。采用免疫組化染色法檢測PUMA、IQGAP1 表達情況。

1.2.2 試劑

PUMA 及IQGAP1 兔多克隆抗體均采購自美國Epitomics 公司。DAB 顯色劑及配套試劑盒采購自北京中杉金橋生物技術有限公司。L.3 回旋式切片機由北京手術器械廠提供。

1.2.3 結果判定

陽性結果判定［6］：PUMA 及IQGAPl 蛋白染色陽性信號呈棕黃或棕褐色，位于胞膜或胞漿。陽性細胞計分：0 分：無陽性細胞，1 分：陽性細胞＜10%，2 分：陽性細胞10%～50%，3 分：陽性細胞50%～75%，4 分：陽性細胞＞75%；細胞質無染色計0 分，淡黃色計1 分，棕黃色計2 分，棕褐色計3 分。以雙盲法觀察切片，兩項評分之和≤2 分為陰性，≥3 分為陽性。陽性率=陽性例數/總例數×100%。

1.3 隨訪

隨訪從患者術后開始，直至患者死亡或本研究結束，為期2年（截止時間：2020年10月）。隨訪時間在1～24 個月中分布，平均隨訪時間為（11.10±2.64）個月。隨訪方式為門診復查，詳細記錄兩組患者治療后無進展生存時間（Progression-Free-Survival，PFS））、總生存時間（Overall Survival，OS）。

1.4 統計學方法

應用SPSS 21.0 軟件進行統計學分析；計量資料以（）表示，多組間采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t 檢驗；計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗；采用Kaplan-Meier 生存分析預后，使用tarone 法進行檢驗；以P＜0.05 為有統計學意義。

2 結果

2.1 PUMA 及IQGAPl 在不同組織中的表達

胰腺癌組織中的PUMA 陽性率顯著低于癌旁組織，IQGAPl 陽性率顯著高于癌旁組織，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表1及圖1。

表1 PUMA 及IQGAPl 在不同組織中的表達［n（%）］Table 1 expression of Puma and iqgapl in different tissues［n（%）］

圖1 胰腺癌組織免疫組化染色圖（SP，×500）Figure 1 immunohistochemical staining of pancreatic carcinoma（SP，×500）

2.2 胰腺癌組織中PUMA、IQGAPl 蛋白表達與臨床病理特征的關系

TNM 分期為Ⅲ～Ⅵ期、有淋巴結轉移、分化程度為中-低分化的胰腺癌患者PUMA 陰性率、IQGAPl 陽性率更高（P＜0.05）。見表2。

表2 胰腺癌組織中PUMA、IQGAPl 蛋白表達與臨床病理特征的關系［n（%）］Table 2 Relationship between puma，iqgapl protein expression and clinicopathological features in pancreatic cancer［n（%）］

2.3 胰腺癌患者不同PUMA、IQGAPl 表達的預后情況

74 例胰腺癌患者2年生存率為16.22%。PUMA陰性表達、IQGAPl 陽性表達的胰腺癌患者死亡率高于PUMA 陽性表達、IQGAPl 陰性表達的患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 胰腺癌患者PUMA、IQGAPl 表達的預后情況［n（%）］Table 3 prognosis of different expression of Puma and iqgapl in patients with pancreatic cancer［n（%）］

2.4 生存曲線分析

PUMA 表達陰性、表達陽性及IQGAPl 表達陰性、表達陽性半數生存時間分別為（9.12±1.18）月、（16.25±1.58）月、（17.40±2.70）月、（10.70±1.60）月。生存分析顯示PUMA（表達陽性）、IQGAPl（表達陰性）者生存期較長，Keplan-meier 生存曲線明顯不同（P＜0.05）。見圖2。

圖2 不同PUMA、IQGAPl 表達的患者生存曲線分析Figure 2 analysis of survival curve of patients with different Puma and IQGAPl expression

2.5 影響胰腺癌患者預后生存的單因素和多因素分析

TNM（Ⅲ～Ⅵ期）、淋巴結轉移（有）、分化程度（中-低分化）、PUMA（表達陰性）、IQGAPl（表達陽性）為影響胰腺癌患者預后生存的獨立危險因素（P＜0.05）。見表4。

表4 影響胰腺癌患者預后生存的單因素和多因素分析Table 4 univariate and multivariate analysis of prognostic factors in patients with pancreatic cancer

3 討論

據統計，胰腺癌在全球范圍內惡性腫瘤發病率中排名靠前，死亡率位居第7 位，目前臨床多依據腹部CT、胰腺MRI、腹部超聲、超聲內鏡等檢查結合術后病理檢查確診［7］。但由于胰腺位置隱蔽，在患者表現出臨床癥狀時，腫瘤多已發展到中晚期，手術根治難度大，患者仍面臨術后腫瘤復發、轉移的風險，且預后情況不理想。

隨著醫學檢驗技術的發展，腫瘤相關基因標志檢測逐漸引起廣大學者的重視，有學者研究指出，正常的胰腺細胞發展為胰腺癌的過程中有多個癌基因及抑癌基因的參與［8］。PUMA是近年來新發現的促凋亡基因，可發揮強大的促凋亡作用［9］。IQGAPl 是一種能通過ERk-2 信號通路的透明質酸，并與透明質酸受體結合促進細胞遷移及侵襲。本研結果顯示這與既往學者報道結果一致［10］。

國外文獻報道，胰腺癌患5年生存率僅在5%左右［11］。本研究隨訪資料顯示：胰腺癌患者術后2年生存率僅為16.22%；PUMA 陰性表達、IQGAPl 陽性表達的患者死亡率更高；PUMA 陽性表達、IQGAPl 陰性表達的患者生存期更長。這與Ghosh 等學者［12］研究結果一致，可見PUMA、IQGAPl 參與了胰腺癌發生、發展的過程。IQGAPl 作為血管內皮細胞生長因子受體結合蛋白，在血管內皮的遷移、增殖過程中發揮重要作用；而PUMA是一種新的具有凋亡作用的靶基因，對細胞起著惡性轉化的作用，其可抑制細胞凋亡并參與腫瘤的發生、惡化的過程。有學者報道，PUMA 的表達下調與腫瘤發生相關，PUMA基因丟失后，加劇了淋巴組織的轉移，并促使腫瘤生長［13］。

吳萍等學者［14］通過小鼠實驗發現，PUMA 表達的改變會影響胃癌細胞的增殖能力，PUMA 低表達與胃癌的發生有關。提示可在患者化療過程中，通過增加PUMA 表達量，達到促進癌細胞凋亡、抗腫瘤的目的。國內學者報道，在食管鱗狀細胞癌組織中，IQGAP1 表達明顯上調，推測IQGAP1陽性表達可促進惡性腫瘤浸潤，提高腫瘤侵襲能力［15］。本研究結果亦證實這一觀點。但由于本研究納入樣本量較少，且未對PUMA、IQGAP 在腫瘤中侵襲、轉移的作用機制進行深入研究，導致研究存在不足。后續將擴大樣本量并對血清標志物進行聯合檢測，以明確二者在胰腺癌病情進展中的作用機制，證實其對診治胰腺癌的敏感性。

綜上所述，PUMA 陰性、IQGAPl 陽性為影響胰腺癌患者預后生存的危險因素，臨床可通過加強監測二者表達情況，以評估胰腺癌患者病情進展情況及預后。