CXCR4、RGS4及RAGE在小兒腎母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及臨床意義

胡傳兵 韓暖 于寶華 田俊嚴(yán) 孫勁松

腎母細(xì)胞瘤又稱為威爾姆斯瘤，為嬰幼兒較為常見的一種腹部惡性實(shí)體腫瘤，組成部分為腎源性上皮以及間質(zhì)［1］。由于腎母細(xì)胞瘤的生物學(xué)行為多變，加之當(dāng)前對(duì)腎母細(xì)胞瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制并未完全明確，故尋找特異性腫瘤標(biāo)志物十分重要［2］。隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，研究者發(fā)現(xiàn)選擇趨化因子受體（C-X-C motif chemokine receptor 4，CXCR4）、蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)因子4（Recombinant Regulator Of G Protein Signaling 4，RGS4）、晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（receptor for advanced glycationend products，RAGE）在神經(jīng)母細(xì)胞瘤、胃癌、乳腺癌及肺癌等多種實(shí)體腫瘤中表達(dá)異常，且和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，而關(guān)于CXCR4、RGS4 及RAGE 在腎母細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中的作用卻鮮少報(bào)道［3-4］。基于此，本研究將通過檢測(cè)小兒腎母細(xì)胞瘤患者CXCR4、RGS4 及RAGE 的水平，探討上述指標(biāo)水平在小兒腎母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及臨床意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年6月至2020年6月本院收治的98例小兒腎母細(xì)胞瘤患者，手術(shù)留取腎母細(xì)胞瘤組織納入研究組。其中男59 例，女39 例，平均年齡為（3.82±0.74）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理、影像學(xué)檢查確診［5］；②臨床資料完整者；③術(shù)前未進(jìn)行化療、放療等治療；④患兒監(jiān)護(hù)人皆自愿參與本研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在其他系統(tǒng)病變或惡性腫瘤者；②存在嚴(yán)重心、肺、肝等器官功能不全患者；③存在精神疾病無法配合本研究或依從性差者。選取距離腫瘤邊緣5 cm 以外的正常腎組織納入對(duì)照組（經(jīng)病理篩查無癌細(xì)胞后最終納入73例）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。

1.2 方法

所有標(biāo)本組織于手術(shù)切除后立即使用10%甲醛固定，組織切片后脫蠟、水化。并采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶（Streptomycin avidin peroxidase，S-P）免疫組化染色法對(duì)CXCR4、RGS4 及RAGE 進(jìn)行檢測(cè)，CXCR4 兔抗人多克隆抗體濃縮型購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)公司，RGS4 及RAGE兔抗人多克隆抗體濃縮型北京博奧森生物技術(shù)有限公司提供，試劑盒、DAB 顯色劑由河北博海生物工程開發(fā)有限公司提供，具體方法嚴(yán)格按照試劑盒說明執(zhí)行。每批切片染色均以磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffered Saline，PBS）代替一抗作低表達(dá)對(duì)照，用已知高表達(dá)的組織切片作高表達(dá)對(duì)照。一抗的稀釋比例皆是1/100。

根據(jù)高表達(dá)細(xì)胞百分比及染色情況判定CXCR4、RGS4 及RAGE 表達(dá)水平［6］：0 分：無高表達(dá)細(xì)胞；1 分：高表達(dá)細(xì)胞低于10%，2 分：高表達(dá)細(xì)胞在11%～15%的范圍內(nèi)，3 分：高表達(dá)細(xì)胞＞50%。染色情況判定：0 分：無色，1 分：淡黃色，2 分：棕黃色，3 分：棕褐色。總積分：上述2 項(xiàng)評(píng)分的乘積。低表達(dá)為3 分及以下，高表達(dá)為4 分及以上。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較對(duì)照組與研究組CXCR4、RGS4 及RAGE 表達(dá)情況。②分析CXCR4、RGS4 及RAGE表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤臨床病理特征的關(guān)系。③對(duì)患者進(jìn)行為期1年的門診或電話隨訪，記錄預(yù)后生存、死亡的情況，分析影響腎母細(xì)胞瘤患者預(yù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 22.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以（）表示，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；影響因素采用多元Logistic 回歸分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組CXCR4、RGS4 及RAGE 表達(dá)情況比較

對(duì)照組CXCR4、RAGE 高表達(dá)率顯著低于研究組，RGS4 高表達(dá)率高于研究組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1、圖1。

圖1 免疫組化染色圖（SP，×400）Figure 1 Immunohistochemical staining（SP，×400）

表1 兩組CXCR4、RGS4 及RAGE 表達(dá)情況比較［n（%）］Table 1 Comparison on CXCR4，RGS4 and RAGE expression between the two groups［n（%）］

2.2 CXCR4、RGS4 及RAGE 表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤臨床病理特征的關(guān)系

臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、預(yù)后不良組織結(jié)構(gòu)（unfavorable histology，UH）、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者CXCR4、RAGE 高表達(dá)率明顯高于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、預(yù)后良好組織結(jié)構(gòu)（favorable histology，F(xiàn)H）及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。FH 者RGS4 高表達(dá)率高于UH 者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 CXCR4、RGS4 及RAGE 表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤臨床病理特征的關(guān)系［n（%）］Table 2 the relationship between the expressions of CXCR4，RGS4 and RAGE and clinicopathological features of Wilms tumor［n（%）］

2.3 影響腎母細(xì)胞瘤患者預(yù)后死亡的單因素分析

術(shù)后1年預(yù)后死亡者8 例（8.16%）。非條件單因素logistic 回歸模型分析顯示：臨床分期、臨床分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CXCR4、RAGE 及RGS4 表達(dá)為影響腎母細(xì)胞瘤患者預(yù)后死亡的單因素（P＜0.05）。見表3。

表3 腎母細(xì)胞瘤患者預(yù)后死亡的單因素［n（%）］Table 3 univariate analysis on prognostic death in patients with Wilms tumor［n（%）］

2.4 影響腎母細(xì)胞瘤患者預(yù)后死亡的多因素分析

經(jīng)非條件多因素logistic 回歸模型分析得，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、預(yù)后不良組織結(jié)構(gòu)、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CXCR4、RAGE 高表達(dá)及RGS4 低表達(dá)是影響腎母細(xì)胞瘤患者預(yù)后死亡的危險(xiǎn)因素（P＜0.01）。見表4。

表4 影響腎母細(xì)胞瘤患者預(yù)后死亡的多因素分析Table 4 Analysis of multiple factors influencing the prognostic death of patients with Wilms tumor

3 討論

腎母細(xì)胞瘤是小兒腎癌中最為常見的一種類型，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，腎母細(xì)胞瘤占小兒惡性腎腫瘤發(fā)病率的5%左右［7］。由于惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是由各種信號(hào)傳導(dǎo)、趨化因子、轉(zhuǎn)錄因子等途徑共同實(shí)現(xiàn)，因此，尋找識(shí)別腎母細(xì)胞瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的特異性標(biāo)志物是近年來研究的熱點(diǎn)［8］。

Cheng 等［9］報(bào)道顯示，CXCR4 為CXCL12 的唯一受體，CXCL12 通過和CXCR4 的N 端特異性結(jié)合，在腫瘤侵襲浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移、介導(dǎo)免疫反應(yīng)、增強(qiáng)腫瘤血管新生等病理生理過程中起到關(guān)鍵作用。國(guó)外已有較多研究表明，CXCR4 表達(dá)異常在乳癌、前列腺癌、腎癌的發(fā)生中起到重要作用［10］。RGS4 屬于亞家族的因子，可以調(diào)控G 蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、平衡不同G 蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，參與G 蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)偶聯(lián)功能的調(diào)節(jié)，同時(shí)RGS4 與人體多項(xiàng)生理活動(dòng)有關(guān)［11］。任鵬等［12］研究顯示，RGS4 可作為許多疾病的潛在治療靶點(diǎn)，同時(shí)RGS4 與多種腫瘤的產(chǎn)生、發(fā)展密切相關(guān)。Franklin 等［13］研究顯示，在宮頸鱗癌癌組織中RAGE 存在高表達(dá)情況，RAGE 為宮頸鱗癌的轉(zhuǎn)移、侵襲中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。RAGE是免疫球蛋白受體的一種，在疾病的發(fā)生、發(fā)展中有重要的作用［14］。在正常情況下RAGE 在組織細(xì)胞中處于較低的水平，僅在肺和腦組織中呈高表達(dá)狀態(tài)［15］。目前鮮有關(guān)于CXCR4、RGS4 及RAGE表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系的相關(guān)研究。本組研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組CXCR4、RAGE 高表達(dá)率顯著低于研究組、RGS4 高表達(dá)率高于研究組，且CXCR4、RAGE 高表達(dá)率與腎母細(xì)胞瘤患者的臨床分期、臨床分型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而RGS4 的高表達(dá)率僅與臨床分型有關(guān)，這與相關(guān)研究結(jié)果相符［16-17］。提示CXCR4、RGS4 及RAGE 表達(dá)可能在腎母細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。CXCR4 作為趨化因子亞家族中的一員，可有效阻斷腫瘤新生血管，從而發(fā)揮抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移與生長(zhǎng)的作用。RAGE 可通過活化MAPK、NF-kB 等信號(hào)通路，推動(dòng)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)信號(hào)的進(jìn)一步活化，繼而促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移與生長(zhǎng)。RGS4 可通過失活G 蛋白對(duì)G 蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮抑制作用，從而抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移及侵襲，故推測(cè)在腎母細(xì)胞瘤中RGS4 可能為抑癌因子。本研究通過對(duì)患者預(yù)后進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，CXCR4、RAGE 高表達(dá)及RGS4 低表達(dá)是腎母細(xì)胞瘤患者預(yù)后死亡的危險(xiǎn)因素，提示CXCR4、RGS4 及RAGE在評(píng)估患者預(yù)后情況中具有重要的價(jià)值。然而關(guān)于CXCR4、RGS4 及RAGE 在小兒腎母細(xì)胞瘤組織中具體作用機(jī)制仍需要進(jìn)一步的研究探索。

綜上所述，CXCR4、RGS4 及RAGE 在小兒腎母細(xì)胞瘤組織中表達(dá)異常，并與腎母細(xì)胞瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，臨床上可通過檢測(cè)三者表達(dá)情況對(duì)患者病情進(jìn)展及預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。