三種抗體聯(lián)合C肽檢測(cè)診斷糖尿病分型與評(píng)估病情的應(yīng)用價(jià)值

呂磊 何亞瓊 王玲玲 陳巧艷 周廷棟

糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病，預(yù)計(jì)2030年全國(guó)發(fā)病人數(shù)達(dá)5.52 億，嚴(yán)重危及患者生命安全［1］。根據(jù)糖尿病發(fā)病機(jī)制不同，臨床將其分為1 型糖尿病（Type 1 diabetes mellitus，T1DM）和2 型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus，T2DM），盡管目前T1DM 發(fā)病人數(shù)遠(yuǎn)低于T2DM，但其多見(jiàn)于兒童和青少年，極易引起酮癥酸中毒、腎衰竭，甚至死亡，因此早期診斷和分型對(duì)糖尿病患者后續(xù)治療和預(yù)后尤為重要［2］。相關(guān)研究顯示，自身免疫介導(dǎo)胰島素B 細(xì)胞破壞在糖尿病發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用，明確胰島自身抗體表達(dá)情況有利于糖尿病早期診斷及分型［3］。谷氨酸脫羧酶抗體（Glutamic acid decarboxylase antibody，GAD-Ab）為T(mén)1DM 標(biāo)志性抗體，其與病情程度、治療藥物選擇關(guān)系已有相關(guān)報(bào)道［4］。胰島素自身抗體（Insulin autoantibody，IAA）、胰島細(xì)胞抗體（Islet cell antibody，ICA）、C 肽（C-Peptide，C-P）均屬胰島素B 細(xì)胞自身抗體，多于糖尿病無(wú)癥狀期和發(fā)病后一段時(shí)間內(nèi)檢出。目前關(guān)于糖尿病診斷和分型最佳臨床標(biāo)志物組合尚不清楚，因此本研究聯(lián)合檢測(cè)GAD-Ab、IAA、ICA、C-P 表達(dá)情況，并分析其與糖尿病分型及病情關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2019年4月至2020年10月宿州市第一人民醫(yī)院103 例糖尿病患者作為研究組，男54 例，女49例；年齡（40.03±3.88）歲；病程（7.51±1.05）個(gè)月；其中30 例為1 型糖尿病（T1DM）組，73 例為2 型糖尿病（T2DM 組）；另選取32 例健康體檢者作為對(duì)照組，16例男，16 例女；年齡（38.96±4.42）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合T1DM 診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］，急性起病，癥狀明顯，GAD-Ab陽(yáng)性，首次發(fā)病以酮癥酸中毒入院；②符合T2DM 診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］，起病緩慢，癥狀相對(duì)較輕，GAD-Ab 陰性，無(wú)酮癥酸中毒病史；③空腹血糖（Fasting blood glucose，F(xiàn)BG）≥7.0 mmol/L，餐后2 h 血糖（2 hBG）≥11.1 mmol/L，隨機(jī)血糖（BG）≥11.1 mmol/L，對(duì)照組血脂及血糖均正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他自身免疫系統(tǒng)疾病；重要臟器器質(zhì)性病變；全身急慢性感染；臨床資料欠缺，且依從性差。兩組性別、年齡等資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。研究對(duì)象知曉并簽署同意書(shū)，研究經(jīng)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2 方法

取3 mL 清晨空腹外周靜脈血及餐后2 h 靜脈血，以3 000 r/min 速度離心10 min，取上清液，低溫環(huán)境保存。選用深圳新產(chǎn)業(yè)MAGLUMI-4000 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀測(cè)定血清GAD-Ab、IAA、ICA，試劑盒購(gòu)自深圳新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程有限公司，葡萄糖氧化酶法測(cè)定FBG、2 hBG，高效液相色譜法測(cè)定糖化血紅蛋白（glycated hemoglobin A1c，HbAlc），IMMULITE 分析儀測(cè)定C-P。檢驗(yàn)過(guò)程完全參照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理；計(jì)量資料以（）表示，行t檢驗(yàn)，多組間比較用單因素方差分析，兩兩比較用SNK-q 檢驗(yàn)；繪制受試者工作特征（Receiver operating characteristic，ROC）曲線及曲線下面積（Areaunder the ROC curve，AUC）分析鑒別診斷價(jià)值；Logistic 回歸方程分析影響因素；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組IAA、ICA、GAD-Ab、C-P 表達(dá)水平比較

3 組IAA、ICA、GAD-Ab、C 肽表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。IAA、ICA、GAD-Ab表達(dá)水平比較，T1DM 組＞T2DM 組＞對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。C-P 表達(dá)水平比較，T2DM 組＞T1DM 組＞對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 3 組IAA、ICA、GAD-Ab、C-P 表達(dá)水平比較（±s）Table 1 Comparison of the expression levels of IAA，ICA，and GAD-Ab in the 2 groups（±s）

表1 3 組IAA、ICA、GAD-Ab、C-P 表達(dá)水平比較（±s）Table 1 Comparison of the expression levels of IAA，ICA，and GAD-Ab in the 2 groups（±s）

組別T1DM 組T2DM 組對(duì)照組F 值P 值n 30 73 32 IAA（IU/mL）9.17±3.05 5.39±1.35 4.10±1.27 64.885＜0.001 ICA（IU/mL）13.45±4.17 10.82±3.09 7.25±2.14 29.993＜0.001 GAD-Ab（IU/mL）28.47±7.06 13.59±4.02 7.85±2.19 171.971＜0.001 C-P（μg/L）0.37±0.12 0.69±0.23 0.18±0.09 94.612＜0.001

2.2 IAA、ICA、GAD-Ab、C-P 表達(dá)水平與糖尿病關(guān)系的Logistic 回歸分析

以本研究納入糖尿病患者為因變量（否=0，是=1），將IAA、ICA、GAD-Ab、C-P 表達(dá)水平作為自變量，納入Logistic 回歸分析模型，采用輸入回歸納入?yún)?shù)，結(jié)果顯示，IAA、ICA、GAD-Ab、C 肽表達(dá)水平為糖尿病發(fā)病影響因素，表達(dá)水平越高，糖尿病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)越高（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 IAA、ICA、GAD-Ab、C-P 表達(dá)水平與糖尿病關(guān)系Table 2 Relationship between the expression levels of IAA，ICA，GAD-Ab and diabetes

2.3 IAA、ICA、GAD-Ab、C-P 表達(dá)水平對(duì)T2DM的鑒別診斷價(jià)值

IAA、ICA、GAD-Ab、C-P 聯(lián)合檢測(cè)T2DM 的AUC 為0.918（95%CI：0.848～0.963），優(yōu)于IAA、ICA、GAD-Ab 單一檢測(cè)AUC（P＜0.05）。見(jiàn)表3，圖1。

表3 IAA、ICA、GAD-Ab、C 肽表達(dá)水平對(duì)T2DM 的鑒別診斷價(jià)值Table 3 The differential diagnosis value of IAA，ICA，GAD-Ab expression levels in T2DM

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curve

2.4 IAA、ICA、GAD-Ab、C-P 聯(lián)合診斷陽(yáng)性與陰性患者血糖水平

IAA、ICA、GAD-Ab、C-P 聯(lián)合診斷陽(yáng)性患者FBG、2 hBG、HbAlc 水平高于陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 IAA、ICA、GAD-Ab、C-P 聯(lián)合診斷陽(yáng)性與陰性患者血糖水平（±s）Table 4 Blood glucose levels of patients with positive and negative combined diagnosis of IAA，ICA，and GAD-Ab（±s）

表4 IAA、ICA、GAD-Ab、C-P 聯(lián)合診斷陽(yáng)性與陰性患者血糖水平（±s）Table 4 Blood glucose levels of patients with positive and negative combined diagnosis of IAA，ICA，and GAD-Ab（±s）

聯(lián)合診斷陽(yáng)性陰性t 值P 值n 71 32 FBG（mmol/L）7.87±1.24 7.15±1.09 2.827 0.006 2 hBG（mmol/L）13.49±2.86 10.54±3.01 4.766 0.000 HbAlc（%）10.12±2.30 8.06±1.47 4.650 0.000

3 討論

糖尿病是代謝性疾病，表現(xiàn)為血糖升高、糖代謝紊亂，若未積極處理，可導(dǎo)致機(jī)體各種組織尤其是心臟、眼、腎、神經(jīng)等出現(xiàn)慢性損害及功能性障礙，危及患者身心健康。糖尿病包含T1DM 和T2DM 兩種類(lèi)型，以往研究指出，不同類(lèi)型糖尿病發(fā)病機(jī)制及治療方式均不同，早期準(zhǔn)確鑒別糖尿病分型對(duì)確定治療方案，提升治療效果具有重要價(jià)值［7］。

谷氨酸脫羧酶（Glutamic acid decarboxylase，GAD）是非神經(jīng)組織合成酶，現(xiàn)有資料證實(shí)，其水平在T1DM 發(fā)病前數(shù)年甚至10 余年即可升高，具有敏感性高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，被認(rèn)為是T1DM 患者胰島B 細(xì)胞免疫破壞特異標(biāo)記［8］。GAD-Ab 是GAD 最早出現(xiàn)抗體，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，單一GAD-Ab 陽(yáng)性對(duì)胰島素B 細(xì)胞功能具有預(yù)測(cè)價(jià)值［9］。進(jìn)一步研究表明，初診T1DM 患者血清中約70% 可檢出GAD-Ab，明顯高于T2DM 患者及正常人，可能與T1DM 發(fā)病后有持續(xù)少量胰島B 細(xì)胞再生或與B細(xì)胞抗原結(jié)構(gòu)功能相似外源性蛋白有關(guān)［10］。T1DM為遺傳易感個(gè)體通過(guò)自身抗原介導(dǎo)的免疫反應(yīng)所致胰島素B 細(xì)胞破壞自身免疫疾病，GAD 是該免疫反應(yīng)關(guān)鍵始動(dòng)靶抗原，可抑制其所致特異性自身免疫反應(yīng)，誘發(fā)免疫耐受，為臨床準(zhǔn)確區(qū)分T1DM和T2DM 提供依據(jù)。Logistic 回歸分析模型顯示，GAD-Ab 表達(dá)水平為糖尿病發(fā)病影響因素，可見(jiàn)GAD-Ab 在糖尿病發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。

ICA 為胰島B 細(xì)胞胞漿抗體，當(dāng)胰島細(xì)胞抗體和胰島細(xì)胞表面抗原結(jié)合時(shí)，可引起免疫反應(yīng)，致使胰島細(xì)胞胞漿成分產(chǎn)生細(xì)胞毒效應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞溶解、死亡，最終誘發(fā)糖尿病。大量研究表明，T1DM 患者中約70%存在ICA，但存在時(shí)間較短，僅出現(xiàn)于T1DM 初期［11-12］。目前認(rèn)為ICA 陽(yáng)性預(yù)示胰島B 細(xì)胞自身免疫損害，當(dāng)其持續(xù)陽(yáng)性或高水平時(shí)，對(duì)T1DM 才具有較高預(yù)測(cè)價(jià)值［13］。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，ICA 水平隨糖尿病病程、發(fā)病年齡延長(zhǎng)而降低，診斷價(jià)值隨之降低［14］。ROC 曲線，說(shuō)明單純ICA 檢測(cè)在糖尿病分型鑒別診斷中價(jià)值有限，尚需限定糖尿病患者病程、發(fā)病年齡，尋求最佳臨床標(biāo)志物組合，以最大限度提高糖尿病分型診斷準(zhǔn)確性。

IAA 為胰島素自身免疫損傷標(biāo)志物，測(cè)定其在糖尿病患者和健康體檢者血清中變化發(fā)現(xiàn)，IAA表達(dá)水平比較，T1DM 組者＞T2DM 組＞對(duì)照組，與于建平等［15］研究觀點(diǎn)相近，可能機(jī)制與其結(jié)合胰島素形成抗原抗體復(fù)合物，導(dǎo)致胰島素失去生物活性有關(guān)。進(jìn)一步研究結(jié)果說(shuō)明測(cè)定其水平變化有助于區(qū)分糖尿病類(lèi)型，為臨床確定治療方案提供參考。需注意的是，IAA 雖為糖尿病篩查指標(biāo)之一，但單一鑒別診斷特異性為46.67%，考慮原因與納入對(duì)象年齡過(guò)大有關(guān)，同時(shí)說(shuō)明單項(xiàng)檢測(cè)可能會(huì)導(dǎo)致漏診、誤診風(fēng)險(xiǎn)，聯(lián)合檢測(cè)更具優(yōu)勢(shì)。

C-P 是胰島B 細(xì)胞分泌產(chǎn)物，其幾乎不被肝臟攝取，代謝效率慢，且不受注射胰島素影響，檢測(cè)其水平可更為準(zhǔn)確反映胰島B 細(xì)胞功能。目前，C-P 在T1DM 和T2DM 患者中表達(dá)已有相關(guān)研究［16-17］，但對(duì)比研究較少，本研究結(jié)果提示檢測(cè)C-P 水平可為臨床鑒別糖尿病分型提供有利信息。

糖尿病處于無(wú)癥狀期或發(fā)病后一段時(shí)間內(nèi)可檢出多種血清胰島素抗體（IAA、ICA、GAD-Ab）及C-P，聯(lián)合檢測(cè)其水平變化有助于評(píng)估糖尿病進(jìn)程，鑒別糖尿病分型。本研究結(jié)果提示IAA、ICA、GAD-Ab 聯(lián)合檢測(cè)有可能為糖尿病病情評(píng)估及治療提供新思路。但目前任何血清胰島素抗體組合均未達(dá)到100%檢出率，新抗體類(lèi)型有待發(fā)現(xiàn)，檢測(cè)方法有待完善。

綜上所述，GAD-Ab、IAA、ICA、C-P 聯(lián)合檢測(cè)有利于正確鑒別T1DM 和T2DM，評(píng)估糖尿病病情變化，為糖尿病防治提供科學(xué)指導(dǎo)。