外周血miR-183、miR-27b-3p聯合智能染色胃鏡早期診斷胃癌的價值

郭佳念 徐揚志 謝婷婷 賈琳

胃癌是常見消化道惡性腫瘤，據統計，我國胃癌發病率、死亡率僅次于肺癌，居惡性腫瘤第2位［1］。早期胃癌術后5年生存率可達90%，但由于胃癌早期表現不明顯，多數患者診斷時已屬腫瘤進展期［2］。胃鏡檢查是公認胃癌診斷“金標準”，而智能染色胃鏡的應用使胃癌早期診斷率得到顯著提高［3］。但胃鏡檢查屬侵入性操作，大多數患者無法接受反復診斷，且對操作者要求較高，對胃癌早期診斷價值有限［4］。因此，尋找簡便、快速且具有較高敏感度與特異度的胃癌早期診斷指標，是胃癌防治相關研究的重點之一。微小RNA（micro RNA，miRNA）是一類非編碼小RNA，參與生物體生長、發育調節及多種疾病發生、發展。研究顯示，胃癌中miR-183、miR-27b-3p 顯著異常表達，可能成為胃癌早期診斷生物標志物［5-6］?；诖耍狙芯繃L試分析外周血miR-183、miR-27b-3p 聯合智能染色胃鏡在胃癌早期診斷中的價值。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取廣州醫科大學附屬第二醫院2018年1月至2021年1月胃癌患者78 例作為研究組，另選擇胃良性疾病患者39 例作為對照組。納入標準：均經胃鏡活檢確診；入組時未進行任何放化療、內分泌治療等；肝腎功能正常；患者及家屬知情同意。排除標準：合并其他惡性腫瘤；近期使用抗生素、胃黏膜保護劑、抑酸藥；哺乳或妊娠期女性；精神異常，無法配合研究。研究組女31例，男47 例，年齡平均（46.85±7.94）歲，TNM 分期：Ⅰ期29 例、Ⅱ期49 例。對照組女17 例，男22 例，年齡平均（48.02±8.35）歲。兩組年齡、性別差異無統計學意義（P＞0.05），且本研究經本院倫理委員會審批通過。

1.2 方法

①智能染色胃鏡檢查：檢查前10 min 服用泡劑，在清醒狀態下行智能染色胃鏡檢查，若檢查中未發現明顯病變，在胃體、胃竇、胃底部，將變焦調整為0～9 檔，觀察胃小凹并拍照，若發現黏膜糜爛、潰瘍、色澤異常，以清水反復清洗，再通過電子染色檢查獲取照片，在染色的情況下進行活檢，部分病灶需手動調大變焦，觀察病變情況，完成活檢后以清水徹底沖洗。胃鏡活檢組織經甲醛固定后，行石蠟包埋、切片和蘇木精-伊紅染色，行病理診斷。②外周血miR-183、miR-27b-3p 及胃蛋白酶原檢測：治療前取空腹靜脈血5 mL，離心（3 000 r/min，5 min，離心半徑5 cm），取血清，加入RNA 酶混勻，裂解（酚-氯仿法），提取總RNA，逆轉錄為cDNA，行實時定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR），反應條件：95℃10 min；95℃10 s，60℃1 min，40 個循環，采用2-ΔΔct法計算miR-183、miR-27b-3p 水平；以酶聯免疫吸附法檢測胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）、PGⅠ/PGⅡ比值（PGR），必歐瀚生物技術公司試劑盒。

1.3 觀察指標

①兩組智能染色胃鏡檢查結果。②兩組智能染色胃鏡檢查陽性率、外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原水平。③研究組智能染色胃鏡檢查與外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原相關性。④研究組外周血miR-183、miR-27b-3p 與胃蛋白酶原相關性。⑤智能染色胃鏡檢查、外周血miR-183、miR-27b-3p 對胃癌早期診斷價值。⑥智能染色胃鏡檢查、外周血miR-183、miR-27b-3p 聯合對胃癌早期診斷價值。

1.4 統計學方法

采用統計學軟件SPSS 22.0 處理數據，計數資料以n（%）描述，行χ2檢驗；計量資料以（）描述，兩組間用t檢驗；采用Spearman、Pearson 分析相關性；診斷價值采用受試者工作特征（ROC）曲線，獲取AUC，聯合預測實施Logistic 二元回歸擬合，返回預測概率logit（p），將其作為獨立檢驗變量。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組智能染色胃鏡檢查結果

研究組經智能染色胃鏡檢查顯示，胃竇可見多個淺表性潰瘍，周圍黏膜呈明顯充血水腫狀態。對照組以慢性萎縮性胃炎為例，智能染色胃鏡檢查顯示，胃竇前壁隆起，中央凹陷。見圖1。

圖1 智能染色胃鏡圖（×20）Figure 1 Intelligent staining gastroscopy（×20）

2.2 智能染色胃鏡檢查陽性率、外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原水平

研究組智能染色胃鏡檢查陽性率、外周血miR-183 相對表達量高于對照組，miR-27b-3p 相對表達量、血清PGⅠ、PGR 低于對照組（P＜0.05），兩組血清PGⅡ差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原水平比較（±s）Table 1 Comparison of the positive rate of peripheral blood miR-183，miR-27b-3p，and pepsinogen levels between 2 groups（±s）

表1 兩組外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原水平比較（±s）Table 1 Comparison of the positive rate of peripheral blood miR-183，miR-27b-3p，and pepsinogen levels between 2 groups（±s）

組別研究組對照組χ2/t 值P 值例數78 39智能染色胃鏡檢查陽性率50（64.10）6（15.38）24.729＜0.001 miR-183 相對表達量4.72±1.85 0.94±0.46 12.543＜0.001 miR-27b-3p 相對表達量（×10-2）1.88±0.62 5.31±2.04 13.688＜0.001 PGⅠ（μg/L）68.14±22.65 135.28±43.18 10.052＜0.001 PGⅡ（μg/L）24.51±6.29 23.26±5.37 1.062 0.291 PGR 2.78±1.01 5.82±1.75 11.906＜0.001

2.3 研究組智能染色胃鏡檢查與外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原相關性

Spearman 相關性分析，研究組智能染色胃鏡檢查與外周血miR-183 相對表達量呈正相關，與miR-27b-3p 相對表達量、血清PGⅠ、PGR 呈負相關（P＜0.05）。見表2。

表2 研究組智能染色胃鏡檢查與外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原相關性Table 2 The correlation between smart staining gastroscopy and peripheral blood miR-183，miR-27b-3p，and pepsinogen in the study group

2.4 智能染色胃鏡檢查、外周血miR-183、miR-27b-3p 對胃癌早期診斷價值

ROC 曲線分析，智能染色胃鏡檢查、外周血miR-183、miR-27b-3p 早期診斷胃癌的AUC 分別為0.744、0.860、0.845，聯合診斷的AUC 為0.963，95%CI 為0.911～0.989，診斷敏感度為85.90%，特異度為97.44%，顯著高于單獨診斷（P＜0.05）。見表3、圖2。

圖2 ROC 曲線分析結果Figure 2 ROC curve analysis results

表3 智能染色胃鏡檢查、外周血miR-183、miR-27b-3p 對胃癌的早期診斷價值Table 3 The value of intelligent staining gastroscopy，peripheral blood miR-183，miR-27b-3p in the diagnosis of early gastric cancer

3 討論

早期胃癌通常指病灶局限且深度未達到粘膜下層的胃癌，研究指出，早期胃癌患者5年生存率可達85%～100%，而晚期胃癌患者5年生存率僅10%～20%［7］。因此，早期診斷、及時治療是提高患者生存率的關鍵。

目前，胃鏡活檢仍是胃癌最主要診斷方法。研究發現，早期胃癌病灶區顏色變化與血管密度、解剖結構相關，常表現出正常血管網被新生血管取代，呈現胃小凹細小化、模糊不清、變平甚至消失，解剖結構及血管大小不整、排列紊亂［8］。智能染色胃鏡可使用同一根胃鏡觀察，發現疑似病灶后切換至智能染色，可通過“色調變化”的多通道多顏色進行比較，有效顯示病灶區界線，對病灶內細微血管及腺管形態進行觀察，顯著提高胃癌早期診斷率。本研究結果提示智能染色胃鏡對胃癌診斷具有重要價值。但胃鏡檢查對技術要求較高，且侵入性操作給患者帶來較大不適感，無法反復診斷，極易導致診斷結果偏差［9］。

研究顯示，miRNA 通過發揮癌基因或抑癌基因作用，調節惡性腫瘤發生、發展［10］。研究證實，胰腺癌、胃癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤中均存在miRNA 表達失調［11］。miRNA 譜的特異性為惡性腫瘤診治提供了新思路。miR-183 屬保守進化的miRNA 族，位于第7 對染色體，在惡性腫瘤中多發揮原癌基因作用。孫穎等［12］研究顯示，胃癌患者血清miR-183 水平上調，且與病理特征及患者預后相關，可能成為胃癌診斷及預后評估的分子標志。miR-27b-3p 屬miR-23b/27b/24-1 簇，位于9 號染色體，在口腔癌、前列腺癌、非小細胞肺癌等惡性腫瘤中發揮抑癌基因的作用［13］。本研究結果發現胃癌患者外周血miR-183 相對表達量明顯升高，miR-27b-3p 相對表達量明顯降低，推測胃癌中miR-183 可能發揮原癌基因的作用，miR-27b-3p 可能發揮抑癌基因的作用，通過控制分化、凋亡基因參與胃癌發生。

大量研究證實，胃蛋白酶原在胃粘膜病變發生、發展中發揮重要作用，是胃部疾病和胃癌篩查的重要指標［14-15］。胃蛋白酶原是胃蛋白酶的無活性前體，可分為PGⅠ、PGⅡ兩種亞群，研究指出，檢測PGⅠ、PGR 可發揮胃底腺黏膜“血清學活檢”的作用，對胃癌早期診斷具有重要價值［16］。本研究數據顯示，智能染色胃鏡檢查、外周血miR-183、miR-27b-3p均與血清PGⅠ、PGR 相關，進一步顯示了二者在胃癌早期診斷中的應用價值。此外，智能染色胃鏡檢查與外周血miR-183 相對表達量呈正相關，與miR-27b-3p 相對表達量呈負相關。本研究創新性采用智能染色胃鏡檢查，結果提示臨床可同時進行智能染色胃鏡檢查及外周血miR-183、miR-27b-3p檢測，為胃癌診斷提供更全面、可靠的參考信息。

綜上可知，外周血miR-183、miR-27b-3p 聯合智能染色胃鏡可提高胃癌早期診斷價值，實現早期診療。目前，miR-183、miR-27b-3p 調控胃癌的分子機制尚不明確，相關靶基因及信號通路是后續研究重點。