ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀檢測(cè)系統(tǒng)的性能驗(yàn)證

逯世林，劉建立，劉偉，韓曉莉，關(guān)坤萍

(山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，山西 太原 030001)

為了保證檢測(cè)系統(tǒng)的完整性、準(zhǔn)確性，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，本研究參照美國(guó)臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)制定的相關(guān)指南文件、中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T 406-2012)、全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程等，根據(jù)ISO15189：2012《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室—質(zhì)量和能力的要求》對(duì)ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀檢測(cè)凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)的精密度、正確度、線性范圍、可比性、攜帶污染率(CR)及參考區(qū)間等主要性能指標(biāo)進(jìn)行了驗(yàn)證與評(píng)價(jià)，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

沃芬公司生產(chǎn)的ACL-TOP700CTS，ACL-TOP700(對(duì)照儀器)全自動(dòng)凝血分析儀，原裝配套試劑及質(zhì)控品。

1.2 儀器和項(xiàng)目校準(zhǔn)

驗(yàn)證前，儀器生產(chǎn)廠家對(duì)ACL-TOP700CTS和ACL-TOP700全自動(dòng)凝血分析儀及PT，APTT，F(xiàn)IB進(jìn)行了校準(zhǔn)。

1.3 標(biāo)本選取與處理

選取我院住院患者40 例和健康體檢者20 例，采集空腹靜脈血2.7 mL，置于枸櫞酸鈉抗凝管(1∶9)中，顛倒混勻，在采集后1 h內(nèi)離心并分離血漿，備用。

1.4 驗(yàn)證方法

按照美國(guó)臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)制定的相關(guān)指南文件及衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)PT，APTT，F(xiàn)IB檢測(cè)的性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證。

1.4.2 日間精密度驗(yàn)證

參照CLSI EP15-A2文件，使用正常和異常兩個(gè)濃度水平的質(zhì)控品。室內(nèi)質(zhì)控項(xiàng)目在檢測(cè)當(dāng)天至少進(jìn)行一次室內(nèi)質(zhì)控，若有失控?cái)?shù)據(jù)須剔除，且必須查找原因，糾正失控結(jié)果。將本月在控?cái)?shù)據(jù)導(dǎo)出計(jì)算變異系數(shù)。本研究使用ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀上的實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)代替。

1.4.3 線性范圍驗(yàn)證

參照CLSI EP6-A[2]文件，選取一份FIB測(cè)定結(jié)果接近檢測(cè)范圍上限的高值血漿樣本(H)，再選取一份FIB測(cè)定結(jié)果接近檢測(cè)范圍下限的低值血漿樣本(L)，將H和L樣本按4L，3L+1H，2L+2H，1L+3H，4H關(guān)系各自配制混合，形成5份評(píng)價(jià)樣本。將每份評(píng)價(jià)樣本在ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀上重復(fù)測(cè)定3次，分別計(jì)算均值，將均值作為每一份評(píng)價(jià)樣本的實(shí)測(cè)值；4L和4H兩份標(biāo)本的理論值等同于各自的實(shí)測(cè)值，3L+1H，2L+2H，1L+3H三份評(píng)價(jià)樣本的理論值分別以4L和4H的理論值為基礎(chǔ)，按對(duì)應(yīng)配制混合稀釋度計(jì)算得到各份評(píng)價(jià)樣本理論值。將實(shí)測(cè)值與理論值作線性回歸，計(jì)算方程y=ax+b，驗(yàn)證線性范圍。要求a值在(1±0.05)范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r≥0.975。

1.4.4 正確度驗(yàn)證

參照CLSI EP15-A2文件，選取10份檢測(cè)結(jié)果在參考區(qū)間范圍內(nèi)的臨床樣本，將每份樣本在ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀各重復(fù)測(cè)定兩次，計(jì)算20次測(cè)定結(jié)果的總均值，在ACL-TOP700(對(duì)照儀器)全自動(dòng)凝血分析儀上各測(cè)定1次，計(jì)算總均值。以對(duì)照儀器的測(cè)定總均值為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算偏倚，按照臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析的質(zhì)量要求，F(xiàn)IB的偏倚應(yīng)≤10%、PT的偏倚應(yīng)≤7.5%、APTT的偏倚應(yīng)≤7.5%。

1.4.5 可比性驗(yàn)證

課后教師可以通過兩種形式輔導(dǎo)答疑：第一，通過微課網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)，教師要及時(shí)回答學(xué)生在平臺(tái)上提出的問題，可以逐一回答，也可以統(tǒng)一回答，目的是讓學(xué)生及時(shí)糾正自己的錯(cuò)誤。第二，教師通過批改學(xué)生的作業(yè)發(fā)現(xiàn)問題，及時(shí)給學(xué)生反饋信息，同時(shí)根據(jù)學(xué)生的反饋信息及時(shí)調(diào)整修改完善課前預(yù)習(xí)資源庫，還可以將難題、重點(diǎn)題及易錯(cuò)題等題的解題過程及思路制成微視頻，為學(xué)生課后進(jìn)一步的學(xué)習(xí)創(chuàng)造條件，在微課中還可以對(duì)試題舉一反三，從不同角度進(jìn)行解析，使學(xué)生觸類旁通，融會(huì)貫通，這樣可以滿足不同層次學(xué)生課后拓展學(xué)習(xí)的需要。

選取20份臨床患者標(biāo)本(正常和異常濃度各占50%)，分別在ACL-TOP700CTS和ACL-TOP700全自動(dòng)凝血分析儀上進(jìn)行檢測(cè)。本研究以ACL-TOP700全自動(dòng)凝血分析儀為對(duì)照儀器，以其測(cè)定結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算相對(duì)偏差。每個(gè)項(xiàng)目至少有80%的相對(duì)偏差≤1/2允許總誤差(臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求)。

1.4.6 攜帶污染率驗(yàn)證

樣本濃度攜帶污染率(CR)驗(yàn)證：根據(jù)凝血分析儀行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(YY/T0659-2017)，選取1份高濃度FIB樣本，連續(xù)測(cè)定3次，將測(cè)定值分別記錄為H1，H2和H3；再取低濃度FIB樣本，連續(xù)測(cè)定3次，將測(cè)定值分別記錄為L(zhǎng)1，L2，L3(高濃度樣本的濃度必須大于低濃度樣本的2倍)。按公式CR1=∣(L1-L3)∣/(H3-L3)×100%計(jì)算攜帶污染率。項(xiàng)目攜帶污染率驗(yàn)證：取1份正常血漿標(biāo)本連續(xù)測(cè)定PT 3次(j1，j2，j3)后，立即連續(xù)測(cè)定FIB(A1，A2，A3)3次(血漿FIB濃度要求3～4 g/L)，再測(cè)定PT 1次(j4)。根據(jù)下面公式計(jì)算攜帶污染率，即CR2=[(j1+j2+j3)/3-j4]/(j1+j2+j3)/3×100%。如果(j1+j2+j3)/3-j4≤0，則CR為0。FIB的攜帶污染率應(yīng)≤10%。

1.4.7 參考區(qū)間驗(yàn)證

參照CLSI C28-A2[3]文件，選取我院20 例符合要求的健康體檢者的血漿標(biāo)本進(jìn)行小樣本驗(yàn)證，同批分別測(cè)定PT，APTT和FIB，將20個(gè)測(cè)定值與需驗(yàn)證的參考區(qū)間比較，若落在參考限外的測(cè)定值不超過2個(gè)，則驗(yàn)證通過。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Excel 2007進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.1 批內(nèi)精密度驗(yàn)證

ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀檢測(cè)PT，APTT，F(xiàn)IB的批內(nèi)精密度測(cè)定結(jié)果顯示，各指標(biāo)的變異系數(shù)(CV)均符合標(biāo)準(zhǔn)(見表1)。

表1 PT和APTT及FIB批內(nèi)精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.2 日間精密度驗(yàn)證

ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀檢測(cè)PT，APTT和FIB的日間精密度結(jié)果見表2。結(jié)果表明，各項(xiàng)目的變異系數(shù)均符合標(biāo)準(zhǔn)。

表2 PT和APTT及FIB日間精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.3 線性范圍驗(yàn)證

5個(gè)水平的FIB實(shí)測(cè)均值與理論值之間線性關(guān)系良好，F(xiàn)IB線性范圍為0.73～5.74 g/L，a值為0.984 9，r為0.996 6，R2為0.993 3，表明該儀器的檢測(cè)結(jié)果FIB達(dá)到線性要求(見圖1)。

圖1 ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀FIB線性驗(yàn)證

2.4 正確度驗(yàn)證

以參加國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)臨檢中心室間質(zhì)評(píng)的ACL-TOP700全自動(dòng)凝血分析儀為對(duì)照儀器，分別計(jì)算PT，APTT，F(xiàn)IB的偏倚，偏倚均低于判斷標(biāo)準(zhǔn)，滿足臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析的質(zhì)量要求(見表3)。

表3 PT和APTT及FIB正確度驗(yàn)證結(jié)果

2.5 可比性驗(yàn)證

ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀與ACL-TOP700全自動(dòng)凝血分析儀相比，選取并測(cè)定血漿樣本PT，APTT，F(xiàn)IB的結(jié)果偏差符合血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析的質(zhì)量要求，符合率均為100%(≥80%)。

2.6 攜帶污染率驗(yàn)證

樣本濃度攜帶污染率驗(yàn)證：先取1份高濃度FIB樣本，用ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀連續(xù)測(cè)定3次，H1，H2和H3測(cè)定值分別為4.18 g/L，4.18 g/L和4.12 g/L；再取低濃度FIB樣本，連續(xù)測(cè)定3次，L1，L2和L3測(cè)定值分別為1.52g/L，1.57 g/L和1.56 g/L，按公式CR1=∣(L1-L3)∣/(H3-L3)×100%，計(jì)算出攜帶污染率為1.56%。項(xiàng)目攜帶污染率驗(yàn)證：首先取1份正常血漿標(biāo)本，連續(xù)測(cè)定PT 3次，j1，j2和j3測(cè)定值分別為14.60 s，14.80 s和14.70 s，隨后立即連續(xù)測(cè)定FIB 3次，A1，A2，A3測(cè)定值分別為3.48 g/L，3.48 g/L和3.48 g/L，最后再測(cè)定PT 1次，j4測(cè)定值為14.40 s。根據(jù)公式CR2=[(j1+j2+j3)/3-j4]/(j1+j2+j3)/3×100%，計(jì)算攜帶污染率為2.04%。樣本濃度和項(xiàng)目攜帶污染率均符合判斷標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.7 參考區(qū)間驗(yàn)證

選取我院20 例健康體檢者的血漿標(biāo)本，分別在ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀上測(cè)定PT，APTT和FIB，各項(xiàng)目測(cè)定值均落在對(duì)應(yīng)參考區(qū)間內(nèi)，說明驗(yàn)證結(jié)果符合要求。

3 討 論

實(shí)驗(yàn)室須通過適當(dāng)?shù)姆椒▽W(xué)驗(yàn)證以確保各項(xiàng)參數(shù)符合臨床使用要求，這是國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)頒布的《三級(jí)綜合醫(yī)院評(píng)審標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施細(xì)則(2018年版)》中的明確要求。精密度是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室儀器性能評(píng)價(jià)的一個(gè)重要指標(biāo)，是指在規(guī)定的條件下，獨(dú)立檢測(cè)結(jié)果間的一致程度[4]，是其他性能指標(biāo)的基礎(chǔ)[5]。通過批內(nèi)精密度和日間精密度的測(cè)定來表明所測(cè)儀器的檢測(cè)系統(tǒng)整體性能是否達(dá)到要求。本研究PT，APTT，F(xiàn)IB三個(gè)參數(shù)試驗(yàn)結(jié)果顯示，批內(nèi)精密度為0.70%～1.92%，日間精密度為1.50%～6.70%，遠(yuǎn)小于CLSI EP15-A2判斷標(biāo)準(zhǔn)，表明ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀精密度良好。FIB的5個(gè)水平實(shí)測(cè)均值與理論值之間線性關(guān)系良好，線性范圍為0.73～5.74 g/L，覆蓋了廠家聲明的線性范圍(0.80～5.0 g/L)，a值為0.984 9，r為0.996 6，表明該儀器檢測(cè)參數(shù)FIB線性良好。ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀正確度評(píng)價(jià)是以ACL-TOP700全自動(dòng)凝血分析儀為對(duì)照儀器，分別在ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀上測(cè)定并計(jì)算PT，APTT，F(xiàn)IB三項(xiàng)的偏倚，偏倚為-1.44%～2.93%，均滿足臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析的質(zhì)量要求。ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀的可比性驗(yàn)證和參考區(qū)間驗(yàn)證均符合判斷標(biāo)準(zhǔn)要求。攜帶污染率是一個(gè)具體量化的指標(biāo)[6]，其值越小，說明儀器檢測(cè)樣本過程中的交叉污染越小。臨床檢驗(yàn)工作中需要對(duì)多個(gè)樣本進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)，無法完全避免樣本間的交叉污染，為了有效監(jiān)測(cè)交叉污染造成的攜帶污染，對(duì)攜帶污染率的監(jiān)測(cè)尤為重要。ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀樣本濃度污染率和項(xiàng)目攜帶污染率驗(yàn)證結(jié)果分別為1.56%和2.04%，說明該儀器PT，APTT和FIB攜帶污染率極低，在測(cè)定各項(xiàng)目高值血漿標(biāo)本時(shí)，對(duì)低值血漿標(biāo)本無明顯攜帶污染。

綜合上述各項(xiàng)驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果表明ACL-TOP700CTS全自動(dòng)凝血分析儀檢測(cè)PT，APTT和FIB的精密度、正確度、線性及攜帶污染率、參考區(qū)間驗(yàn)證、檢測(cè)系統(tǒng)間比對(duì)等性能指標(biāo)均達(dá)到檢測(cè)目標(biāo)，符合ISO 15189的質(zhì)量要求，該機(jī)性能穩(wěn)定、良好，能滿足臨床需要。