谷精草與兩種混淆品的鑒別及其中槲皮素含量的測定

劉 燕，金 卓

（1.無錫市中醫醫院，江蘇 無錫 214000 ；2.江蘇省無錫藥品檢驗所，江蘇 無錫 214028）

《中國藥典》2015 年版收載的谷精草為谷精草科植物谷精草的干燥帶花莖的頭狀花序[1]，而我國南方地區常以其同科屬植物華南谷精草和毛谷精草的干燥頭狀花序入藥。這兩種谷精草的混淆品多被稱為“谷精珠”。谷精草、華南谷精草和毛谷精草均具有疏散風熱，退翳明目的功效。谷精草在《開寶本草》中被首次記載[2]。明代《本草綱目》[3]中也有關于谷精草的記載。谷精草屬植物較多，但其花序較小，因此鑒別起來較為困難。近年來有學者[4-9]對谷精草類中藥材進行了外觀性狀的研究。華南谷精草和毛谷精草作為谷精珠均收錄在《四川省中藥材標準（2010 年版）》和《湖北省中藥飲片炮制規范（2009 年版）》中。華南谷精草和毛谷精草屬于近緣，二者同為大型的谷精草，在性狀上極為相似。我國中藥市場上時常會出現三種谷精草混用的情況。目前我國現有的文獻僅對谷精草的性狀進行了描述，很少有關于三種谷精草色譜行為等方面的報道。本文主要是對這三種谷精草進行鑒別，并比較三種谷精草中槲皮素的含量。

1 材料、試劑及儀器

谷精草樣品，編號為YP-1、YP-2、YP-3 ；華南谷精草樣品，編號為YP-4、YP-5、YP-6 ；毛谷精草樣品，編號為YP-7、YP-8、YP-9。甲醇為色譜純，乙醇、甲苯、丙酮、磷酸、鹽酸為分析純，水為蒸餾水。梅特勒電子天平XS205，卡瑪薄層自動點樣儀，Agilent1260 高效液相色譜儀，Cary100 紫外可見分光光度計。

2 方法與結果

2.1 鑒別方法

采用薄層色譜法和紫外光譜法對三種谷精草進行鑒別。

2.2 薄層色譜法

分別取三種谷精草樣品粉末各1g，加入乙醇30mL，進行30 min的超聲處理，濾過后將濾液蒸干，在殘渣中加1mL的乙醇使之溶解，即制得供試品溶液。按照《中國藥典》2015 年版四部通則0502 中的相關規定對供試品溶液進行薄層色譜檢測，方法是：吸取上述三種谷精草供試品溶液各5μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以甲苯-丙酮（10:0.6）為展開劑展開，取出后晾干，置于紫外光燈（波長為365nm）下檢視。檢測的結果顯示，谷精草與華南谷精草的薄層色譜行為比較相似，兩者與毛谷精草的薄層色譜行為存在明顯差異。詳見圖1。

圖1 三種谷精草的薄層色譜圖

2.3 紫外光譜法

取谷精草粉末1g，加入30 mL的乙醇，進行30 min的超聲處理，濾過后將濾液蒸干，在殘渣中加入乙醇使之溶解。將溶液轉移至100mL的量瓶中，加入乙醇定容至刻度，搖勻，即制得供試品溶液。取華南谷精草粉末3g，加入30 mL的乙醇，進行30 min的超聲處理，濾過后將濾液蒸干，在殘渣中加入乙醇使之溶解。將溶液轉移至100mL的量瓶中，加入乙醇定容至刻度，搖勻，即制得供試品溶液。取毛谷精草粉末0.3g，加入30 mL的乙醇，進行30 min的超聲處理，濾過后將濾液蒸干，在殘渣中加入乙醇使之溶解。將溶液轉移至100mL的量瓶中，加入乙醇定容至刻度，搖勻，即制得供試品溶液。采用紫外光譜法在波長為220～450nm的范圍內掃描三種供試品溶液，得到其紫外吸收光譜。結果顯示，谷精草在330.00nm和261.00nm 波長處出現最大吸收峰，華南谷精草在279.00nm 波長處出現最大吸收峰，毛谷精草在272.00nm和332.00 nm 波長處出現最大吸收峰（詳見圖2、圖3和圖4）。這說明，采用紫外光譜法可有效地區分鑒別三種谷精草。

圖2 谷精草的紫外光譜圖

圖3 華南谷精草的紫外光譜圖

圖4 毛谷精草的紫外光譜圖

2.4 三種谷精草中槲皮素含量的測定

2.4.1 色譜條件色譜柱：C18，流動相：甲醇-0.4% 磷酸溶液（50:50），流速：1.0mL/min，柱溫：30℃，檢測波長：360nm，進樣量：10μL。

2.4.2 對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品3mg，置于100mL的量瓶中，加入甲醇-25% 鹽酸溶液（4:1）的混合溶液進行溶解并定容至刻度，搖勻，即制得對照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備精密稱取三種谷精草樣品粉末各2g，分別置于具塞錐形瓶中，加入甲醇25mL，密塞后進行20 min的超聲處理（功率為250W，頻率為33kHz），放冷后搖勻，進行濾過處理。精密量取續濾液10mL，置于100mL的錐形瓶中，加入甲醇10 mL、25%的鹽酸溶液5mL，搖勻后置于水浴中加熱回流30 min。迅速冷卻至室溫，轉移至50mL的量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻后進行濾過處理，取續濾液，即制得供試品溶液。

2.4.4 方法學考察 1）線性關系考察。分別取槲皮素對照品溶液1mL、2mL、5mL、10mL、25mL，置于25mL的量瓶中，加入甲醇-25% 鹽酸溶液（4:1）的混合溶液定容至刻度，搖勻，制得對照品溶液。分別精密吸取上述對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀中，記錄其峰面積。以對照品濃度（μg/mL）為橫坐標，以峰面積為縱坐標，進行線性回歸分析，得到回歸方程為y=42.873x-0.2445，r=0.9998。這表明，槲皮素在1.2～30μg/mL 范圍內濃度與峰面積呈良好的線性關系；在選定條件下，槲皮素的最低檢出濃度為0.84μg/mL。2）重復性試驗。分別取同一批的谷精草樣品（YP-1）各2g，制成5 份供試品溶液，采用高效液相色譜法測定其中槲皮素的含量。結果表明，5 份供試品溶液中槲皮素的平均含量為20.6μg/g，相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）為0.96%。3）回收率試驗。采取加樣回收法，取已知含量的同一批次的谷精草樣品（YP-1）1 g，共取6 份，分別加入槲皮素對照品溶液（濃度為30μg/mL）0.7mL，按“2.6.3”項下的方法制備成供試品溶液。精密吸取上述供試品溶液10μL，注入液相色譜儀中進行檢測，計算平均回收率和RSD。結果顯示，供試品溶液中槲皮素的平均回收率為98.14%，RSD 為1.56%。

2.4.5 三種谷精草中槲皮素的含量分別取三種谷精草粉末2g，按“2.6.3”項下的方法制備成供試品溶液，注入液相色譜儀中測定其中槲皮素的含量。結果顯示，毛谷精草中槲皮素的含量高于谷精草和華南谷精草，谷精草中槲皮素的含量高于華南谷精草。三種谷精草中槲皮素含量的測定結果見表1。槲皮素對照品及三種谷精草中槲皮素含量的高效液相色譜圖見圖5～圖8。

圖8 毛谷精草中槲皮素含量的高效液相色譜圖

表1 三種谷精草中槲皮素含量的測定結果（μg/g）

圖5 槲皮素對照品中槲皮素含量的高效液相色譜圖

圖6 谷精草中槲皮素含量的高效液相色譜圖

圖7 華南谷精草中槲皮素含量的高效液相色譜圖

3 討論

華南谷精草和毛谷精草并非《中國藥典》中規定的谷精草來源，但在中藥市場上仍有將二者作為谷精草銷售的情況。本研究結果可作為區別谷精草和華南谷精草、毛谷精草的參考依據。根據本文的研究結果，建議在谷精草的藥典標準中可以考慮增加薄層色譜法和紫外光譜法作為鑒別谷精草、華南谷精草、毛谷精草的方法。在采用薄層色譜法和紫外光譜法對谷精草中槲皮素的含量進行測定方面，有研究對不同色譜柱〔Waters XSelect CSH C18 液相色譜柱（4.6mm×250mm，5 μm）、資生堂Capcell PAK C18液相色譜柱（4.6mm×250 mm，5 μm）、AgilentZORBAX Extend C18 液相色譜柱（4.6mm×250 mm，5 μm）〕及不同柱溫（30℃、35℃、40℃）進行了考察，結果發現槲皮素的峰形良好。

綜上所述，谷精草、華南谷精草、毛谷精草在薄層色譜及紫外光譜上存在明顯的區別，通過進行薄層色譜和紫外光譜檢測可對三者進行有效的鑒別。毛谷精草和谷精草中槲皮素的含量較高，華南谷精草中槲皮素的含量較低。