獸藥中非法添加物檢測(cè)及風(fēng)險(xiǎn)防范技術(shù)研究

顧進(jìn)華,張秀英,汪 霞,范 強(qiáng),于曉輝,韓寧寧,趙 暉,龔旭昊,高 光

(中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081)

獸藥處方外添加其他化學(xué)物質(zhì)或藥物屬于非法添加，極易造成不知情用藥或者濫用藥物，存在嚴(yán)重的動(dòng)物源性食品獸藥殘留和耐藥性等生物安全風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，此類(lèi)行為也侵害到合法獸藥生產(chǎn)企業(yè)的正當(dāng)利益，極大地?cái)_亂獸藥市場(chǎng)秩序。

2009年以前，對(duì)于非法添加，僅依據(jù)國(guó)家獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)結(jié)果，難以給予嚴(yán)厲查處和打擊。為達(dá)到提前預(yù)警，向主動(dòng)保障轉(zhuǎn)變的目的，中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所牽頭開(kāi)展獸藥制劑中非法添加物的篩查與確認(rèn)技術(shù)研究，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公布施行了系列防范非法添加的檢測(cè)方法和通用方法，并據(jù)此開(kāi)展禁用藥物和非法添加物監(jiān)督檢查，為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)發(fā)揮了重要作用。

繼續(xù)開(kāi)拓思路，深入研究獸藥中非法添加物檢測(cè)方法，梳理現(xiàn)有檢測(cè)方法的內(nèi)在聯(lián)系，提升快速篩查技術(shù)和手段，探索建立新檢測(cè)方法，對(duì)于打擊非法添加行為，減少非法添加風(fēng)險(xiǎn)具有重要意義。

1 獸藥中非法添加規(guī)律及成因分析

1.1 獸藥中非法添加規(guī)律及特點(diǎn) 2008年，獸藥檢驗(yàn)人員在監(jiān)督抽檢中發(fā)現(xiàn)處方外添加其他化合物的現(xiàn)象。獸藥散劑和注射液是非法添加的重災(zāi)區(qū)，其次是抗菌類(lèi)獸藥的可溶性粉劑。

添加方式多樣：(1)中藥中添加化學(xué)藥品。(2)化學(xué)藥品以同類(lèi)藥物替代標(biāo)稱(chēng)藥物。(3)一種制劑添加多種藥物。

添加藥物種類(lèi)繁多：(1)添加處方外獸藥，常見(jiàn)的有對(duì)乙酰氨基酚、安乃近等解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物；氟喹諾酮類(lèi)、磺胺類(lèi)等抗菌藥物； 茶堿等鎮(zhèn)咳平喘類(lèi)藥物等。(2)添加違禁藥品及人用藥如β-受體激動(dòng)劑、氯霉素類(lèi)、硝基呋喃類(lèi)藥物[1]。

1.2 獸藥標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充和完善 2005年以前歷版《中國(guó)獸藥典》對(duì)“摻入或污染的外來(lái)物質(zhì)”的檢驗(yàn)沒(méi)有明確的要求和具體檢測(cè)方法。2010年版《中國(guó)獸藥典》開(kāi)始有所考慮；2015年版規(guī)定“任何違反獸藥GMP或有未經(jīng)批準(zhǔn)添加物質(zhì)所生產(chǎn)的獸藥，即使符合《中國(guó)獸藥典》或按照《中國(guó)獸藥典》沒(méi)有檢出其添加物質(zhì)或相關(guān)雜質(zhì)，亦不能認(rèn)為其符合規(guī)定。”2020年版《中國(guó)獸藥典》延續(xù)以上表述[2]。系列“獸藥處方外非法添加物檢測(cè)方法”是獸藥典質(zhì)量控制方法的重要補(bǔ)充。

1.3 獸藥中非法添加成因分析 獸藥中的非法添加，主要是冒用合法標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)，標(biāo)稱(chēng)安全用藥成分，隱瞞添加其他藥物成分或化合物，有的自認(rèn)為處方合理但未能獲得研發(fā)數(shù)據(jù)，審批未通過(guò)。對(duì)利潤(rùn)的追求，以及逃避?chē)?guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的僥幸，是獸藥中非法添加的基本成因。

1.3.1 西藥的合并使用 部分西藥的臨床合用屬于合理用藥，但由于生產(chǎn)工藝、安全性等問(wèn)題，很多臨床合用品種并不適合制成復(fù)方制劑。復(fù)方制劑的研制需要多方數(shù)據(jù)支持，企圖走捷徑的想法容易導(dǎo)致非法添加的發(fā)生，特別是抗菌藥品種。

1.3.2 中西復(fù)方制劑的應(yīng)用 中西復(fù)方制劑在發(fā)揮中西藥物協(xié)同作用、減少藥物用量、降低毒性，以及實(shí)現(xiàn)標(biāo)本兼治等方面具有一定意義，但很多未經(jīng)充分研究的中西復(fù)方制劑淪為處方外非法添加[3]。

2 獸藥中非法添加物檢測(cè)方法及標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)分析

2.1 現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì) 截止2021年1月，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布處方外非法添加物檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)的公告/文件共23個(gè)，發(fā)布標(biāo)準(zhǔn)82個(gè)。歷年非法添加物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布情況見(jiàn)圖1。

圖1 非法添加物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布情況Fig 1 Release of standards for the detection of illegal additives

經(jīng)過(guò)修訂，現(xiàn)行有效檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)51個(gè)，檢測(cè)非法添加目標(biāo)物132種，篩查紫外光譜圖庫(kù)153種和非特定物質(zhì)。現(xiàn)行有效檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。

表1 現(xiàn)行有效獸藥非法添加物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)[4-14]Tab 1 Current effective standards for the detection of illegal additives in veterinary drugs

續(xù)上表

2.2 現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)對(duì)象和目標(biāo)物質(zhì) 獸藥非法添加物檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)對(duì)象和目標(biāo)物質(zhì)，從單個(gè)制劑檢測(cè)向一類(lèi)制劑檢測(cè)發(fā)展，從檢測(cè)單個(gè)目標(biāo)化合物檢測(cè)向一類(lèi)目標(biāo)化合物擴(kuò)增，標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)從“XX制劑非法添加X(jué)X品種”到“獸藥中非法添加X(jué)X類(lèi)物質(zhì)”轉(zhuǎn)變。出現(xiàn)了獸藥中非特定非法添加物質(zhì)檢查方法。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)涉及73種目標(biāo)獸藥制劑、2個(gè)獸藥通用檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)、1個(gè)中獸藥散劑檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。其中6個(gè)兼顧中藥和化藥制劑檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)；26個(gè)專(zhuān)門(mén)用于化藥制劑的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，主要用于注射液、可溶性粉、粉劑、預(yù)混劑(如氟喹諾酮類(lèi)制劑、氟苯尼考制劑)；19個(gè)專(zhuān)門(mén)用于中藥制劑的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，其中9個(gè)用于注射液(主要是魚(yú)腥草注射液、柴胡注射液、黃芪多糖注射液)，7個(gè)用于中藥散劑，以及顆粒劑、口服液等。有關(guān)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2 檢測(cè)非法添加物有關(guān)制劑標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)表Tab 2 Statistical table of target preparations in thedetection standard of illegal additives

檢測(cè)目標(biāo)藥物(物質(zhì))，除非特定物質(zhì)以外，包括84種(140個(gè)次)，以及紫外光譜圖庫(kù)涵蓋的153種目標(biāo)物。在添加物品種類(lèi)別上，主要是解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物(12項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn))，氟喹諾酮類(lèi)藥物(5項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn))，β-受體激動(dòng)劑(2項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn))，以及磺胺類(lèi)、抗生素類(lèi)、抗病毒類(lèi)，其中，對(duì)乙酰氨基酚、安乃近、氧氟沙星、諾氟沙星、乙酰甲喹、安替比林、氨基比林、恩諾沙星、磺胺間甲氧嘧啶、甲氧芐啶、喹乙醇都是重點(diǎn)關(guān)注對(duì)象。有關(guān)數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

表3 檢測(cè)非法添加目標(biāo)藥物(物質(zhì))關(guān)注度統(tǒng)計(jì)表Tab 3 Statistical table of target drugs(substances)in the detection standard of illegal additives

2.3 現(xiàn)有獸藥非法添加物檢測(cè)方法 目前獸藥非法添加物檢測(cè)方法主要應(yīng)用高效液相色譜法，或結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜法、高分辨質(zhì)譜法；以及顯微鏡檢查法、薄層色譜法。

現(xiàn)行有效的51個(gè)非法添加物檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)中，應(yīng)用高效液相色譜-二極管陣列法40項(xiàng)，超高效液相色譜法-二極管陣列法1項(xiàng)，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法10項(xiàng)，高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜法1項(xiàng)，薄層色譜法2項(xiàng)；顯微鏡檢查法4項(xiàng)。

2.3.1 同時(shí)測(cè)定多種非法添加獸藥的方法 同時(shí)測(cè)定多種非法添加獸藥的方法可以有效提高檢測(cè)效率,如“獸藥制劑中非法添加磺胺類(lèi)及喹諾酮類(lèi)25種化合物檢查方法”同時(shí)測(cè)定25種化合物、“獸藥制劑中非法添加磺胺類(lèi)藥物檢查方法”能將5種磺胺類(lèi)化合物從9種沙星類(lèi)化合物和中藥中分離出來(lái)。

2.3.2 檢測(cè)方法適用性的拓展 從2016年開(kāi)始，包括2448號(hào)公告發(fā)布的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，增加了“用于其他制劑中某種藥物(物質(zhì))檢查時(shí)，需進(jìn)行空白試驗(yàn)和檢測(cè)限測(cè)定”內(nèi)容，擴(kuò)大了檢測(cè)方法的適用性。

2.3.3 獸藥非法添加物目標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)的建立 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2019年公告169號(hào)公布適用于獸藥及其原料與輔料中紫外光譜圖庫(kù)中所列非法添加藥物篩查的檢測(cè)方法“獸藥中非法添加藥物快速篩查法(液相色譜-二極管陣列法)”，其數(shù)據(jù)庫(kù)涵蓋150余種化合物，300余張光譜圖，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的溶液濃度、色譜條件、色譜圖及其保留時(shí)間等信息。獸藥非法添加物數(shù)據(jù)庫(kù)的建立為快速篩查打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

3 獸藥非法添加物檢測(cè)方法提升方向

隨著發(fā)展，仍然存在新的非法添加可能，需要繼續(xù)開(kāi)展處方外非法添加物風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)檢測(cè)技術(shù)研究，提升檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性，持續(xù)遏制非法添加風(fēng)險(xiǎn)。

3.1 篩查與確證技術(shù)并重 定性篩查技術(shù)是快速判斷獸藥是否被非法添加的重要手段，是指示采用何種方法進(jìn)行進(jìn)一步確證的關(guān)鍵步驟。要充分利用顯微鑒別方法、薄層色譜法、高效液相色譜-二級(jí)管陣列法、膠體金免疫層析法、質(zhì)譜法建立篩查方法。

確證與定量檢測(cè)方法是最終判定獸藥非法添加情況的技術(shù)手段，具有法定效力。要進(jìn)一步推廣應(yīng)用高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[15]等。

3.2 進(jìn)一步擴(kuò)大檢測(cè)方法適用性 梳理現(xiàn)有獸藥非法添加物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，針對(duì)檢測(cè)目標(biāo)化合物，特別是高頻非法添加物(如：對(duì)乙酰氨基酚、安乃近、氧氟沙星、諾氟沙星、乙酰甲喹、安替比林、氨基比林、恩諾沙星、磺胺間甲氧嘧啶、甲氧芐啶、喹乙醇)，修訂整合有關(guān)檢測(cè)方法，建立操作簡(jiǎn)便、適用范圍更廣的通用型檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步增強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)適用性。

3.3 加強(qiáng)高效、高通量檢測(cè)技術(shù)研究 利用新的技術(shù)手段建立新方法，提升快速篩查和確證技術(shù)[15]。

建立質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)，提升篩查效率。將高分辨質(zhì)譜法運(yùn)用到獸藥非法添加物檢查中，利用高分辨質(zhì)譜法，建立高通量篩查和確證方法，建立質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)，可以克服現(xiàn)有法定方法不能篩查檢測(cè)無(wú)紫外吸收化合物的缺陷。

探索建立拉曼光譜檢測(cè)方法。拉曼光譜是采用散射光譜進(jìn)行分析并應(yīng)用于分子結(jié)構(gòu)研究的一種方法，因其高通量無(wú)損、譜圖特征強(qiáng)、穿透力強(qiáng)，可進(jìn)行原位、無(wú)損分析[15]。將顯微拉曼光譜成像技術(shù)[16]運(yùn)用在獸藥非法添加物篩查中，可實(shí)現(xiàn)快速無(wú)損篩查，提高初篩效率。

值得研究運(yùn)用的方法還有：微生物管碟法、近紅外光譜法、離子遷移色譜法等[17]。

3.4 拓展非法添加物檢測(cè)品種范圍 針對(duì)非法添加新情況，如中藥制劑中添加處方外中藥成分[18]、疫苗中非法添加抗菌藥物、漁藥和水產(chǎn)養(yǎng)殖投入品中非法添加藥物等，添加方式更為隱蔽。亟需開(kāi)展中藥制劑中的中藥類(lèi)抗菌成分、疫苗中可能添加的抗菌藥物含量進(jìn)行監(jiān)測(cè)；開(kāi)展?jié)O藥和水產(chǎn)養(yǎng)殖投入品中非法添加物的檢查研究。不斷拓展檢查品種范圍，嚴(yán)密防范非法添加風(fēng)險(xiǎn)。

4 獸藥中非法添加風(fēng)險(xiǎn)防范與思考

4.1 加強(qiáng)檢查與宣傳 切實(shí)按照農(nóng)業(yè)部獸藥質(zhì)量監(jiān)督抽檢要求，組織好有獸藥中非法添加物篩查能力的省級(jí)獸藥監(jiān)察所開(kāi)展前期篩查工作，提高獸藥中非法添加物檢測(cè)針對(duì)性和工作效率[19]。開(kāi)展宣傳教育，引導(dǎo)合法合規(guī)生產(chǎn)獸藥。

4.2 疏堵結(jié)合，降低非法添加風(fēng)險(xiǎn) 獸藥被非法添加其他藥物(物質(zhì))是一個(gè)復(fù)雜的問(wèn)題，在嚴(yán)格執(zhí)行檢測(cè)和監(jiān)控的同時(shí)，也要考慮疏堵結(jié)合，引導(dǎo)開(kāi)展中西藥復(fù)方、化藥復(fù)方制劑應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，提煉安全有效獸藥組方，在生產(chǎn)工藝合理，質(zhì)量可控的前提下，提升復(fù)方制劑研究和應(yīng)用水平。