不同妊娠期HPV感染孕婦血清miRNA-34a表達情況及與母嬰結局的關系

羅婕妤 (湛江市第二人民醫院婦產科，廣東 湛江 524003)

人乳頭瘤病毒(Human Papilloma Virus,HPV)是一種球形DNA病毒，隸屬于乳多空病毒科-乳頭瘤空泡病毒A屬，可穿透人體表皮及黏膜上皮細胞，引發各類良惡性病變，以尋常疣、生殖器疣、鼻咽癌、子宮頸癌前病變及宮頸癌等多見[1]。此外，妊娠期HPV感染也較為多見，可使孕婦本身、胎兒及新生兒產生不良結局，引起學者們關注[2]。宮頸分泌物基因芯片HPV DNA分型檢測是目前孕婦HPV篩查的主要方式，是一種侵入性檢查方式，部分孕婦對此持懷疑態度，不愿意進行該項檢查，造成漏診，威脅母嬰健康[3]。因此，尋找一種安全、有效的檢測方法及指標顯得十分重要。微小RNA(microRNA,miRNA)是一種長約22 nt的非編碼RNA，廣泛分布于從病毒到人類的各種生物中，主要通過與信使RNA(mRNA)結合發揮作用從而參與疾病的發生發展，可在人血清中豐富、穩定表達，大部分研究提示血清miRNA檢測是目前臨床(包括良惡性疾病及孕期檢測等)新起的一種無創檢查方式，前景可觀[4]。有研究顯示miRNA-34a在HPV持續感染型宮頸癌中異常表達，提示miRNA-34a可能與HPV感染相關[5]。但關于其與HPV感染孕婦的報道較為少見。本研究對HPV陰性和HPV陽性不同妊娠期孕婦血清miRNA-34a表達進行探討。現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2016年3月～2018年3月于本院產檢進行HPV篩查的320例孕婦作為研究對象，根據HPV檢測結果不同將其分為HPV陽性組(n=120)和HPV陰性組(n=200)。納入標準：①B超顯示活胎，單個妊娠；②均行宮頸分泌物基因芯片HPV DNA分型檢測者；③臨床資料完整且依從性良好者。排除標準：①患妊娠期合并癥或并發癥者；②合并宮頸上皮內瘤變疾病或宮頸癌者；③有不良妊娠結局或新生兒結局者；④人工受孕者；⑤有精神病病史或家族史者。HPV陽性組：平均年齡(31.34±5.62)歲；產婦類型：初產婦74例，經產婦46例；妊娠期：早期49例，中期52期，晚期19例；HPV陰性組：平均年齡(30.94±5.49)歲；產婦類型：初產婦120例，經產婦80例；妊娠期：早期78例，中期84期，晚期38例；兩組在年齡、產婦類型及妊娠期等臨床資料上比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。同時選取年齡匹配的50例健康非孕女性作為健康對照組。所有研究對象均簽署知情同意書，本次研究經過本院醫學倫理委員會批準同意。

廣義的教育大數據是指來源于日常教育活動中學生們的行為以及學習數據。而狹義的教育大數據指的是學生在線學習平臺、管理系統以及課程管理平臺等。

1.2方法

1.2.1HPV檢測[6]：①標本收集：囑孕婦平躺取截石位，以窺陰器暴露宮頸，用無菌棉簽擦去宮頸口分泌物，用HPV專用刷在宮頸管內順時輕柔旋轉5圈并停留1min進行取樣，后將置入專用管中保存及運送；②基因芯片HPV DNA分型檢測：本研究用廣東凱普生物科技股份有限公司HPV分型檢測試劑盒對分泌物進行DNA提取、擴增及導流雜交，最后獲得檢測結果，共有21種基因型，清晰可見的藍紫色圖點被認為陽性，根據條膜HPV分布圖判斷HPV感染基因型。

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1.2.2血清miRNA-34a檢測[7]：①標本收集：采集5 ml空腹靜脈血于黃色血清管中，輕柔混勻，4 000 r/min離心5 min，留取血清于EP管，并于-80℃冰箱中保存待檢測；②血清miRNA-34a檢測：本研究分別用北京天根生化科技公司總RNA提取試劑盒和美國Thermo Fisher Scientific公司逆轉錄試劑盒+實時熒光定量聚合酶鏈式反應(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)試劑盒對血清標本進行RNA提取、cDNA合成及FQ-PCR檢測，以2-ΔΔCt法表示miRNA-34a相對表達水平。

2 結果

2.5HPV陽性組新生兒不良結局與血清miRNA-34a的關系:HPV陽性組新生兒均出生，其中早產者和呼吸窘迫綜合征者分別為6例和8例，其血清miRNA-34a分別為4.92±0.83和5.13±0.98；非早產者和非呼吸窘迫綜合征者分別為114例和112例，其血清miRNA-34a分別為4.02±0.27和3.75±0.62；早產者和呼吸窘迫綜合征者血清miRNA-34a分別高于非早產者和非呼吸窘迫綜合征者，且差異有統計學意義(t=6.829、P=0.000；t=5.829、P=0.000)。

那陣子，在我按市專家的處方每天上、下午到小區的西醫診所各點一組頭孢后，我的癥狀明顯減輕了。其中最顯著的例子就是晚上能睡個安穩覺了。雖說睡夢中還是難免不時地咳上幾聲，但絕不會咳醒。這還是老婆告訴我的。正因如此，市專家囑我半月后回市醫院復診，我都沒去，而是聽從了小區西醫診所中那位小護士的建議，停止滴流后繼續口服頭孢及化痰藥。

圖1 不同組別血清miRNA-34a比較

2.4影響HPV感染孕婦妊娠不良結局的多因素Logistic回歸分析：經多因素Logistic回歸分析得知，HPV高危型、HPV高危型種數及血清miRNA-34a是導致HPV感染孕婦妊娠不良結局發生的關鍵因素(P=0.014；P=0.001；P=0.000)。見表1。

圖2 HPV陽性組不同妊娠期孕婦血清miRNA-34a比較

2.3HPV陽性組孕婦妊娠結局與血清miRNA-34a的關系：HPV陽性組中剖宮產者30例、產后出血者9例、胎膜早破者8例和產褥感染者4例，其血清miRNA-34a分別為5.37±0.91、5.17±0.69、5.07±1.31和5.35±0.67；順產者90例、產后未出血者111例、無胎膜早破者112例和無產褥感染者116例，其血清miRNA-34a分別為3.85±0.57、4.02±0.72、4.12±0.34和3.88±0.55；剖宮產者、產后出血者、胎膜早破者和產褥感染者血清miRNA-34a分別高于順產者、產后未出血者、無胎膜早破者和無產褥感染者，且差異有統計學意義(t=9.349、P=0.000；t=4.621、P=0.000；t=5.657、P=0.000；t=5.224、P=0.000)。

1.3隨訪：對320例孕婦進行隨訪直至其分娩后1個月，記錄孕婦分娩方式、產后并發癥及新生兒不良結局發生情況。所有孕婦均在訪，無失訪。

2.2HPV陽性組不同妊娠期孕婦血清miRNA-34a比較：HPV陽性組中早期妊娠、中期妊娠和晚期妊娠孕婦血清miRNA-34a分別為4.61±0.75、4.59±0.72和4.73±0.65，三者比較差異無統計學意義(F=0.246,P=0.782)。見圖2。

表1 影響HPV感染孕婦妊娠不良結局的多因素Logistic回歸分析

2.1不同組別血清miRNA-34a比較：HPV陽性組、HPV陰性組和健康對照組血清miRNA-34a分別為4.58±0.74、1.09±0.44和0.98±0.26，三組比較差異有統計學意義(F=1744.049,P=0.000)。見圖1。

2.6影響HPV感染孕婦新生兒結局的多因素Logistic回歸分析：經多因素Logistic回歸分析得知，HPV高危型種數和血清miRNA-34a是導致HPV感染新生兒不良結局發生的關鍵因素(P=0.000；P=0.027)。見表2。

表2 影響HPV感染孕婦新生兒結局的多因素Logistic回歸分析

3 討論

與其他女性相比，妊娠期女性更容易被HPV感染，這是因為孕婦雌孕激素明顯升高，其他內分泌激素也隨之改變，機體免疫力有所下降，皮膚及黏膜固有免疫和細胞免疫均被破壞，HPV侵襲入機體[8]。此外，有研究發現機體雌孕激素、人絨毛膜促性腺激素、催乳素及腎上腺素等免疫抑制激素上升，HPV感染妊娠期女性后宮頸相關病變進程加快，因此明確是否存在妊娠期HPV感染對孕婦產后預后十分重要[9]。宮頸分泌物基因芯片HPV DNA分型檢測是目前診斷HPV感染的主要方法，受標本本身、運送及保存等多種因素影響敏感性和特異性并非十分理想，因此尋找有效血液學指標進行聯合檢測迫在眉睫[10]。與mRNA比較，miRNA更為穩定，既可耐受長期保存和反復凍融等物理因素，又可耐受核糖核酸酶等生物因素，為其成為臨床疾病檢測的重要指標提供理論依據[11]。miRNA-34家族在哺乳動物中廣泛存在，包括miRNA-34a、miRNA-34b和miRNA-34c三個成員，均有高度保守性[12]。目前關于miRNA-34a研究較多且多與腫瘤相關，有學者發現miRNA-34a在診斷乳腺癌中敏感性和特異性均較高，且從細胞水平肯定了其在乳腺癌中的治療前景[13]。陳貝貝等則在通過對60例HPV感染者宮頸脫落細胞研究發現miRNA-34a與HPV持續感染密切相關[5]，肯定了其作為HPV持續感染在宮頸癌早期篩查和臨床診療的探討價值。

貴州省平塘縣水稻田75%以上常年發生水稻稻縱卷葉螟和稻飛虱，發生程度在3級以上，危害重的年份稻縱卷葉螟、稻飛虱和福壽螺發生程度達5級。如2008年稻飛虱、稻縱卷葉螟均為5級發生，福壽螺為3級發生；2009年水稻白背飛虱為5級發生、稻縱卷葉螟第3代為5級發生，第4代為3級發生，福壽螺為5級發生；2010年水稻白背飛虱為4級發生、稻縱卷葉螟第3代為4級發生，第4代為3級發生，福壽螺為4級發生；2011年稻飛虱為4級發生、稻縱卷葉螟為3級發生。害蟲的嚴重發生導致全縣水稻年損失量在300萬公斤以上，大發生年份全縣水稻減產達20%～30%。

本研究中，選取120例HPV感染孕婦和200例無HPV感染孕婦作為研究對象，探討 miRNA-34a在孕婦HPV感染中的診斷價值，發現HPV陽性組血清miRNA-34a明顯高于HPV陰性組，提示血清miRNA-34a在孕婦HPV感染鑒別診斷中的臨床價值，此外，本研究還選取50例健康非孕女性作為對照以排除女性因受孕導致血清miRNA-34a干擾。本研究還發現HPV陽性組中早期妊娠、中期妊娠和晚期妊娠三者孕婦血清miRNA-34a比較，差異無統計學意義(P>0.05)，提示血清miRNA-34a與HPV感染孕婦妊娠期無明顯相關，可能與樣本量及分布情況相關，可后續擴大樣本量、優化分布情況繼續探討。此外，本研究還發現HPV感染孕婦發生妊娠不良結局者和新生兒不良結局者血清miRNA-34a均明顯高于無上述情況發生者，提示血清miRNA-34a在HPV感染孕婦妊娠結局和新生兒結局預測中的臨床價值。最后，本研究經多因素Logistic回歸分析發現HPV高危型種數和血清miRNA-34a是導致HPV感染孕婦母嬰不良結局的關鍵因素，再次肯定血清miRNA-34a在HPV感染孕婦診斷及預后估測中的價值，并提示臨床工作者應明確HPV感染孕婦HPV分型情況，對HPV高危型者多予關注，警惕不良結局發生或在不良結局發生時及時處理，減少傷害。

綜上所述，血清miRNA-34a在HPV感染孕婦中明顯升高，與妊娠期無明顯關系，是導致妊娠不良結局和新生兒不良結局發生的關鍵因素，有一定臨床指導價值。