高效液相色譜法測定蛋制品中蘇丹紅含量

◎ 陳 潔

（寧德市食品藥品檢驗檢測中心，福建 寧德 352100）

蘇丹紅又名蘇丹，是一類人工合成的工業染料，有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ號4種[1-2]。該染料具有致癌性和致突變性，我國嚴令禁止將其用于食品加工中[3]。經蘇丹紅染色后的食品色澤鮮艷且穩定，不易掉色，因此一些無良商家違法將該染料添加至如辣椒粉、辣椒油、紅豆腐、紅心禽蛋等食品中。

GB/T 19681—2005利用高效液相色譜測定蘇丹紅含量，樣品經中性氧化鋁柱凈化，操作過程不僅煩瑣，且回收率不高。目前，主要采用液相色譜法[4-7]、液相色譜-串聯質譜法[8-12]、毛細管電泳法[13-14]、免疫分析法[15-17]以及各種電化學法[18-21]測定食品中蘇丹紅染料的含量。以上幾種檢測方法中，高效液相色譜儀價格相對便宜，操作簡單，且精密度和準確度高，使用比較普及。因此本研究以市售咸蛋、松花蛋為對象，利用蘇丹紅的親脂性，用強極性的有機溶劑作為提取液，旨在建立一種前處理簡單、快速、高效的食品中蘇丹紅染料含量的HPLC-DAD分析檢測方法，進一步完善蘇丹紅染料檢測體系，為食品中蘇丹紅染料的監督檢驗和殘留監控提供技術參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

標準物質：蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ（濃度：100 μg·mL-1，壇墨質檢-國家標準物質中心）。乙腈、丙酮，色譜純；醋酸銨，分析純；實驗用水：一級水。實驗所用蛋制品（皮蛋、咸鴨蛋）為市售。

1.2 儀器與設備

1260高效液相色譜儀，安捷倫科技（中國）有限公司；SQP電子天平，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；TDL-5-A高速離心機，上海安亭科學儀器廠；WP-UP-YJ-20S超純水機，四川沃特爾水處理設備有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 標準溶液配制

分別準確移取蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 4種標準品各1.0 mL，丙酮定容至10 mL，得到10 μg·mL-1的混合標準溶液。移取適量混合標準溶液，用乙腈稀釋成濃度為0.1～5.0 μg·mL-1系列標準工作溶液。

1.3.2 樣品前處理

準確稱取2 g（精確到0.001 g）樣品至50 mL具塞離心管中，加入提取液（90%丙酮水溶液）10.0 mL浸泡過夜。取出，超聲 30 min，8 000 r·min-1離心5 min。上清液經0.45 μm有機濾膜過濾后上機測定。

1.3.3 色譜條件

色譜柱為Sepax Bio-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），A流動相為0.02 mol·L-1醋酸銨水溶液（每L 0.02 mol·L-1醋酸銨水溶液添加6 mL 1‰（V/V）醋酸水溶液），B流動相為乙腈，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長480 nm，進樣量10 μL，柱溫40 ℃，梯度洗脫程序見表1。

表1 流動相洗脫梯度表

2 結果與分析

2.1 色譜條件優化

將染料蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ混合標準溶液（濃度為10 μg·mL-1）進 樣。在相同洗 脫 條 件 下，對 比 以0.02 mol·L-1醋酸銨和 0.02 mol·L-1醋酸銨水溶液（每L 0.02 mol·L-1醋酸銨水溶液添加6 mL 1‰（V/V）醋酸水溶液）作為流動相時目標物的洗脫效果。結果表明，以 0.02 mol·L-1醋酸銨水溶液（每 L 0.02 mol·L-1醋酸銨水溶液添加6 mL 1‰（V/V）醋酸水溶液）作為流動相時，可達到理想的分離效果，色譜圖見圖1。

圖1 蘇丹紅Ⅰ~Ⅳ標準品溶液的色譜圖

2.2 線性范圍及檢出限

配制目標物混合系列標準工作溶液（濃度為0.1 μg·mL-1、0.2 μg·mL-1、0.5 μg·mL-1、1.0 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1和 5.0 μg·mL-1）， 并 在 1.3.3 色 譜 條件下上機測試，繪制4種目標物工作曲線。根據GB/T 27417—2017標準驗證，本方法對于2.0 g樣品，定容至 10 mL，檢出限為 10 μg·kg-1，定量限為 30 μg·kg-1。

繪制目標物標準曲線。橫坐標為目標物濃度（X，μg·mL-1），縱坐標為相應的峰面積（Y），得到線性方程相關系數r2≥0.999 92，線性關系良好。具體見表2。

表2 蘇丹紅Ⅰ~Ⅳ的線性方程、線性范圍及相關系數表

2.3 加標回收率及精密度

在空白樣品（咸蛋及松花蛋）中添加3種不同濃度的標準混合溶液，按照上述1.3.2樣品前處理方法及1.3.3色譜條件進行6水平測定。回收率為89.1%～100.5%，相對標準偏差（RSD）為0.88%～1.4%，滿足GB/T 27404—2008的質控要求，結果見表3。

表3 蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的平均回收率和相對標準偏差表（n=6）

2.4 樣品測定

運用本研究建立的實驗方法，對市售的咸蛋、松花蛋各30批次進行分析檢測，結果顯示蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ含量均低于檢出限（10 μg·kg-1）。

3 結論與討論

隨著經濟和生活條件的改善，全社會對食品安全關注度也在不斷提升。而一些不法商家在利益的驅動下，總能“推陳出新”地與科技斗智斗勇，在食品加工過程中添加禁用添加劑或濫用限用的添加劑，威脅人們“舌尖上的安全”。

蘇丹紅在極性強的溶劑中有很好的溶解性，因此本研究以90%丙酮水溶液作為提取劑，采用高效液相法同時測定市售咸蛋、松花蛋中4種蘇丹紅染料的含量，大大提高了前處理效率，精密度好、回收率高，滿足檢測要求，為進一步完善蘇丹紅染料檢測體系提供了理論參考。

此次研究對市售咸蛋、松花蛋各30份樣品進行了測定，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ含量均低于檢出限（10 μg·kg-1）。表明在法律和相關部門的監管下，添加劑違規使用的情況有所好轉，但仍需要持續關注和監測。同時，提醒消費者應盡量減少購買顏色過分鮮艷的商品，發現有問題的商品應及時向有關部門舉報，全民共治，營造全社會食品安全宣傳的良好氛圍。