分光光度法測定不同食品基質中氰化物的方法驗證

◎ 許 萍，王春華，劉曉丹，馬金龍，于寶平

（1.上海城建職業學院，上海 201415；2.通標標準技術服務（上海）有限公司，上海 200233；3.中檢科（上海）測試技術有限公司，上海 201206）

氰化物分為有機氰化物和無機氰化物，均屬于高毒性化合物[1]。氰化物是具有極高活性的小分子物質，在細菌、真菌、節肢動物、脊椎動物和植物中均能自然產生[2]。日常生活中常見的糧食類食品，例如木薯、玉米、小麥、豆類等都有天然氰化物的存在。在使用糧食作為釀酒原料時，氰化物會被帶入成品酒中。因此，針對糧食和蒸餾酒及其配制酒，氰化物的安全風險必須得到重視。

為了控制糧食和蒸餾酒及其配制酒的氰化物風險，國內外監管機構規定了詳細的限量要求。歐盟于2007年發布通報，規定直接食用的杏仁中氫氰酸不得大于20 mg·kg-1。日本對水果、蔬菜、豆類谷物、小麥粉等食品的氰化物含量（以氫氰酸計）作出不同限量的具體規定[3]。我國是蒸餾酒生產、消費大國，因此加強對蒸餾酒及其配制酒的氰化物監管非常重要。在《食品安全國家標準 蒸餾酒及其配制酒》（GB 2757—2012）中明確規定氰化物（按100%酒精度）不大于8.0 mg·L-1。

目前氰化物的測試方法較多，主要有分光光度法、氣相色譜法、離子色譜法[4]和滴定法等。我國測試標準以GB 5009.36—2016為主，包括分光光度法、氣相色譜法和定性法。分光光度法儀器成本低，并且操作簡便、可靠性好[5]，適合不同規模的實驗室，應用較廣泛。本文參照GB 5009.36—2016分光光度法，對不同食品基質中氰化物進行測試，驗證了方法的線性關系、精密度、回收率，建立了可靠的測試能力。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

瓦里安Cary 100 Scan型紫外分光光度計；梅特勒-托利多ME 204E電子天平。

異煙酸、吡唑酮（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）、N-二甲基甲酰胺、氯胺T（有效氯含量≥11%）、水中氰標準溶液（50 mg·L-1，中國計量科學研究院）。

樣品為市售木薯粉、市售高粱酒。

1.2 氰標準使用液的配制

配制濃度為1 g·L-1的氫氧化鈉溶液，用氫氧化鈉溶液將水中氰標準溶液稀釋50倍，得到濃度為1 μg·mL-1的氰標準使用液。

1.3 實驗方法

1.3.1 木薯粉氰化物含量測定

稱取試樣于蒸餾裝置，加水、乙酸鋅溶液、酒石酸，用氫氧化鈉溶液收集餾液。吸取樣液及0.0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL和5.0 mL氰標準使用液（相當于0.0 μg、0.1 μg、0.2 μg、0.5 μg、1.0 μg、2.0 μg、4.0 μg和5.0 μg氫氰酸）。分別加入氫氧化鈉溶液和酚酞指示液，用乙酸調至紅色消失，加磷酸鹽緩沖溶液，加溫至37 ℃，加入氯胺T溶液，放置5 min，加入5 mL異煙酸-吡唑酮溶液，加水后于40 ℃放置40 min，用2 cm比色杯于波長638 nm處測吸光度。

1.3.2 高粱酒氰化物含量測定

吸取試樣，加氫氧化鈉溶液，放置10 min。吸取0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL和2.0 mL氰標準使用液（相當于0 μg、0.5 μg、1.0 μg、1.5 μg和2.0 μg氫氰酸），加入氫氧化鈉溶液。加入酚酞指示劑，用乙酸溶液調至紅色褪去，用氫氧化鈉溶液調至近紅色，加磷酸鹽緩沖溶液、氯胺T溶液，放置3 min，加入2 mL異煙酸-吡唑酮溶液，加水稀釋，30 ℃放置30 min，用1 cm比色杯于波長638 nm處測吸光度。

2 結果與分析

2.1 線性關系

實驗結果顯示，分光光度法線性良好。木薯粉的標準曲線為y=6.514 03x+0.040 49，高粱酒標準曲線為y=0.144 28x+0.000 44，相關系數均為0.999。符合GB/T 27417—2017的要求，相關系數不低于0.99。

2.2 精密度和加標回收率

2.2.1 木薯粉

在稱取的10 g木薯粉中加標3水平，相當于加標0.5 μg/10 g、1 μg/10 g、5 μg/10 g 樣品，測定氰化物含量結果見表1。表1中加標前后氰化物含量的精密度最高7.4%，均不大于10%。結果顯示分光光度計法測試木薯粉精密度高、再現性好。精密度符合GB 5009.36—2016的要求，重復性條件下獲得的2次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的10%。表1中3個加標水平最低回收率為80.3%，最高回收率達93.2%。回收率符合GB/T 27404—2008的要求，被測組分含量為0.1～1 mg·kg-1時回收率范圍在80%～110%。

表1 木薯粉精密度和加標回收率表

2.2.2 高粱酒

在吸取的1.0 mL樣品中兩水平加標，相當于加標1 μg·mL-1、2 μg·mL-1樣品，測定氰化物含量結果見表2。從表2可以看出，加標后測定氰化物含量的精密度最高3.8%，不大于10%。結果顯示分光光度計法測試高粱酒精密度高、再現性好。精密度符合GB 5009.36—2016的要求，重復性條件下獲得的2次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的10%。表2中兩個加標水平最低回收率為90.0%，最高回收率達96.4%。回收率符合GB/T 27404—2008的要求，被測組分含量為1～100 mg·kg-1時回收率范圍在90%~110%。

表2 高粱酒精密度和加標回收率表

3 結論

本文參照GB 5009.36—2016分光光度法，對不同食品基質中氰化物進行測試，驗證了不同食品基質的測試精密度和回收率，均得到了符合要求的測試結果。①分光光度法操作簡單，有利于測試人員的培訓。②通過本文的方法驗證實驗可以看出分光光度法精密度高、重現性好，有利于實驗室質量控制。③本文分光光度法適用于不同基質，木薯粉和高粱酒的方法驗證結果均符合國家標準的要求。此外，對于顏色較深的或者混濁的蒸餾酒及其配制酒樣品，需要蒸餾預處理，預處理方法可參考糧食類樣品的蒸餾方法。④木薯粉和高粱酒的回收率均符合國家標準要求。本文分光光度法準確度高，結果可信。

綜上所述，分光光度法可用于實驗室檢測糧食類食品和蒸餾酒及其配制酒，均達到檢測的質量控制要求。