小型血站核酸檢測實驗室HBV DNA項目室內質量控制方法分析

和向蓮

【摘要】目的：對小型血站核酸檢測實驗室乙型肝炎病毒（HBV）DNA項目檢測的室內質量控制方法進行分析和探討。方法：以我站2018年6月1日至2021年5月31日期間收集的20464份無償獻血者血液標本，所有標本經酶聯免疫吸附試驗檢測后均呈現為非反應性，分241批次進行乙型肝炎病毒（HBV）DNA測定。將HBV DNA陽性質控品、試劑盒陽性對照為反應性，將試劑盒陰性對照為陰性，且內標陽性為實驗在控。記錄前3個月20批次的檢測數據，以其為依據對陽性質控品循環域值（Ct）、陽性對照Ct值、內標Ct均值以及標準差進行計算。再進一步繪制Levey-Jenning質控圖，采用Westgard多規則質控方法判斷。對標本總數、混樣反應性、拆分反應性次數進行統計，并最終計算混檢陽性率、拆分陽性率、拆出率等總體質量監控指標。結果：本次研究所有批次的實驗均在控。其中，陽性質控品Ct值在第21批次、內標Ct均值在第30批次發生13s失控。共檢測標本241批次，混檢陽性率、拆分陽性率和拆出率分別為0.34‰、0.29‰、85.17%。結論：對于小型血站血液篩查檢測而言，在使用HBV DNA陽性質控品判定作為實驗在控基礎的同時，還可進一步對陽性質控品、試劑盒陽性對照Ct值以及內標Ct均值的Levey-Jenning質控圖和總體監控指標進行回顧性分析，以此實現更加有效的HBV DNA項目檢測質量控制。

【關鍵詞】小型血站核酸檢測實驗室;HBV DNA;室內質量控制

【中圖分類號】R44 ? 【文獻標識碼】A ? 【文章編號】2026-5328（2021）09--01

室內質量控制是我國醫療衛生行業對于血站核酸檢測的強制性要求，是保證檢測結果準確性和有效性的前提所在[1]。目前，我國血站關于血液篩查核酸檢測的質量控制尚未建立起統一的質控方案[2]。本次研究結合本血站的基本情況，分析探討了小型血站核酸檢測實驗室HBV DNA項目室內質量控制方法。現報告如下。

1.資料與方法

1.1一般資料

本次研究標本共計20464份，分241批次檢測，均為2018年6月1日至2021年5月31日期間收集的，經酶聯免疫吸附試驗檢測后均呈現為非反應性的無償獻血者血液標本。

1.2方法

本次研究所用試劑盒、儀器如下：

HBV DNA陽性質控品，北京康徹思坦公司生產，規格為1.0mL/支，濃度為200IU/mL;

含陰、陽性對照的HBV、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒（I型）核酸檢測試劑盒，上海科華公司生產;

ABI7500實時熒光PCR擴增儀，美國ABI公司生產;

MicrolabSTAR全自動樣本處理儀，瑞士HAMILTON公司生產。

在8份標本混檢模式下，嚴格依據試劑盒說明書的各項步驟對每批次核酸進行檢測。每批實驗中均包括陽性質控品、陽性對照、陰性對照各1個。若檢測結果顯示，HBV DNA陽性質控品、試劑盒陽性對照呈現為反應性，試劑盒陰性對照呈現為陰性，且內標顯示為陽性，則認為該批實驗在控。

1.3觀察指標

統計每批次實驗的陽性質控品Ct值、陽性對照Ct值、內標Ct均值，以前20次數據為基準，用Excel軟件繪制Levey-Jenning質控圖。

使用Westgard多規則質控方法根據Levey-Jenning質控圖進行判斷，得到回顧性分析結果。

對3年內所有檢測標本的混檢陽性率、拆分陽性率以及拆出率進行計算。

2.結果

2.1實驗在控判定結果

在3年的檢測中，所得到的各個批次檢測數據顯示，所有實驗HBV DNA陽性質控品、試劑盒陽性對照以及陰性對照均滿足反應性或者陰性的判定規則，且內標顯示為陽性，據此認為本次研究中的各個批次實驗均在控。

2.2回顧性分析結果

所有結果均服從正態分布，計算得到的實驗累積均值、標準差、變異系數如表1所示。

整合前20次實驗批次數據，繪制Levey-Jenning質控圖，使用Westgard多規則質控方法進行質量控制判斷。數據顯示，陽性質控品在第1、10、20批次發生了12s警告，第21批次發生13s失控，第23批次違背41s規則。陽性對照在第15、20、24、29批次發生12s警告。內標Ct均值在第25批次發生12s警告，第30批次發生13s失控。

2.3總體監控指標分析結果

在3年的檢測時間內，累及檢測20464份標本，HBV DNA混樣反應性共7次，拆分反應性6次。20464份標本的總體監控指標分析結果如表2所示。

3.討論

在本次研究中，我們選擇了濃度為200IU/mL的質控品，并設立了質控品和陽性對照，目的在于排除假陰性和假陽性[3]。本次研究數據顯示，各項結果均服從正態分布，遂進一步繪制Levey-Jenning質控圖進行質量控制，并用Westgard多規則質控方法進行判斷，將12s作為警告規則。研究數據顯示，實驗中發生的12s警告，按Westgard規則依次檢驗，均未發生失控。陽性質控品、內標Ct均值分別在第21批次、30批次違背13s規則，分析其原因，考慮與質控品復融時間不夠、上樣前混勻不充分有關[4]，但同時該批實驗結果的陰、陽性對照和質控品有效，因此檢測結果可接受。在總體監控指標方面，研究數據顯示混檢陽性率為0.34‰、拆分陽性率為0.29‰、拆出率為85.71%%，表明整個核酸檢測過程具有較高的穩定性、污染風險低[5]。

綜上所述，在小型血站血液篩查檢測中，通過計算分析陽性質控品循環域值（Ct）、陽性對照Ct值、內標Ct均值繪制Levey-Jenning質控圖，再進一步進行總體監控指標統計分析觀察實驗的有效性和穩定性的方式，可實現對小型血站HBV DNA檢測的有效質量控制、保證檢測效果與效率。

參考文獻：

[1] 劉春蘭，姜敏娜，宋雷. 血站核酸檢測實驗室質量監測指標分析[J]. 國際檢驗醫學雜志，2021，42（15）：1902-1905.

[2] 胡紅梅. 血站核酸檢測工作如何控制質量[J]. 東方藥膳，2021（5）：3.

[3] 張龍穆，袁欣，楊忠思. 核酸混樣檢測中假反應性的原因分析和質量控制[J]. 世界最新醫學信息文摘（連續型電子期刊），2021，21（6）：38-40.

[4] 劉鋒，孫昂，吳曉晉，等. 酶免聯合核酸檢測技術對岳陽地區近4年無償獻血人群檢測結果分析[J]. 現代醫藥衛生，2021，37（10）：1705-1708.

[5] 張燕，方建華，葛文超，等. 河南省18家血站2017～2019年HIV/HBV/HCV核酸單獨陽性結果趨勢性分析[J]. 中國輸血雜志，2021，34（1）：68-72.