鴨疫里氏桿菌與沙門氏菌感染的診斷

文│李媛（廣西壯族自治區北海市動物疫病預防控制中心）

筆者對鴨疫里氏桿菌病與沙門氏桿菌混合感染的診斷展開討論，分析了前驅期和明顯期的臨床癥狀，通過細菌學檢驗方法確定病原菌，結合對鴨疫里氏桿菌和沙門氏桿菌兩種藥敏實驗，為養鴨戶推薦敏感藥物防治，減少經濟損失。

一、發病情況

2019年3月廣西壯族自治區北海市海城區高德鎮某一養鴨場，存欄40多日齡番鴨1600只，50多日齡半番鴨1500只，在20日齡免疫禽流感疫苗，均在25～30日齡開始發病死亡，一天死亡3～4只，連續十幾天。臨床癥狀為40多日齡番鴨難以站穩，站立時搖晃，前仰后合，倒地翻滾，不易爬起，張口呼吸，糞便稀薄帶氣泡呈黃綠色，一天內死亡；50多日齡半番鴨難以站穩，站立時搖頭擺尾，運動失調，張口呼吸，排綠色水樣稀糞，一天內死亡。

二、流行病學調查

1.臨床癥狀和解剖病變。在前驅期，表現為精神沉郁，采食量顯著減少，對飼料的積極性顯著降低；在明顯期，出現張口呼吸和腹瀉、可視黏膜蒼白以及神經癥狀，一旦發病一天內死亡。解剖番鴨可見脾高度腫大，腎稍腫，直腸內容物呈綠色水樣；半番鴨可見心肌有橫紋和白斑，肝稍腫、腎稍腫，直腸內容物呈綠色水樣。

2.病毒學檢驗。剪取病料（心臟、肝、脾、肺和氣管），置研磨管研磨后，8000轉/分鐘離心2分鐘，取上清200微升抽提RNA，分別用禽流感、新城疫、細小病毒、圓環病毒和呼腸弧病毒的核酸熒光PCR檢測試劑盒進行擴增，結果顯示全部為陰性。

3.細菌學檢驗。病料涂片染色鏡檢。取番鴨高度腫大的脾涂片，革蘭氏染色，鏡檢可見少量革蘭氏陰性細小桿菌。

鴨疫里氏桿菌分離培養鑒定。無菌操作，用接種環各自穿透挑取番鴨和半番鴨的腦，在巧克力色平板上劃線，置燭缸37℃厭氧條件培養。結果顯示，14小時后每條劃線處長出幾個無色透明露珠狀菌落，挑取單個菌落的一半涂片，革蘭氏染色鏡檢，見紅色兩極著色的細小短桿菌，初步判定為鴨疫里氏桿菌；無菌操作，挑取該菌落的另一半做純培養，置燭缸37℃厭氧培養20小時，用生理鹽水洗下純培養菌苔菌落，用接種針蘸取菌液接種生化管，置燭缸37℃厭氧條件培養24～72小時。結果顯示，不發酵葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、麥芽糖、阿拉伯糖、山梨醇、甘露醇和肌醇、MR-VP試驗、硝酸鹽還原、硫化氫產生和尿素分解均為陰性，確診為鴨疫里氏桿菌。同時選擇正常死亡鴨腦作為對照，結果顯示正常鴨腦培養24小時無菌落，培養至72小時仍無菌落。

沙門氏菌分離鑒定。無菌操作，用接種環穿透挑取番鴨高度腫大的脾在麥康凱平板上劃線，置37℃培養24小時。結果顯示在每條劃線處長出幾個白色菌落，麥康凱平板由紅色變為黃色，挑取單個菌落的一半涂片，革蘭氏染色鏡檢，可見紅色細小短桿菌，初步確定為沙門氏菌。挑取菌落另一半做純培養，37℃培養20小時，用生理鹽水洗下純培養菌苔菌落，用接種針蘸取菌液接生化管，置37℃培養24～72小時。結果顯示，發酵葡萄糖、麥芽糖、甘露醇和肌醇、不發酵乳糖和蔗糖、MR-VP試驗、硝酸鹽還原、硫化氫產生和尿素分解均為陽性，診斷為沙門氏菌。

4.藥敏試驗。用一次性注射器吸取巧克力色平板上的菌液，分別注入2個TSA平板和2個巧克力色平板中；用一次性注射器吸取麥康凱平板上的菌液，注入4個新的麥康凱平板中，因培養基較干，靜置片刻，待稍吸收，吸取多余菌液，平鋪藥敏紙片，做好標記。

鴨疫里氏桿菌20種藥物敏感實驗結果顯示，抑菌圈直徑20毫米以上的有：米諾環素、林可霉素、羅紅霉素和慶大霉素；抑菌圈直徑15～20毫米的有：諾氟沙星、復方新諾明和甲氧芐啶；其他可用藥物有：丁胺卡那、左氧氟沙星、紅霉素、環丙沙星、阿莫西林、氟苯尼考、恩諾沙星、多西環素、克林霉素、頭孢氨芐，以上10種藥敏紙片分布在兩個巧克力色平板上，均無菌落生長。

沙門氏菌18種藥物敏感實驗結果顯示，抑菌圈直徑：氟苯尼考（23毫米）；大觀霉素、諾氟沙星和復方新諾明（各19毫米）；左氧氟沙星（17毫米）、丁胺卡那（16毫米）、慶大霉素和恩諾沙星（各15毫米）；新霉素、頭孢氨芐、多西環素、米諾沙星（10～14毫米）、環丙沙星（不規則無法測量）；無抑菌圈的是林可霉素、羅紅霉素、紅霉素、阿莫西林、克林霉素。

綜合上述結果，選擇對兩種細菌均敏感的藥物，首選氟苯尼考；其次諾氟沙星和復方新諾明；再次為左氧氟沙星、丁胺卡那和恩諾沙星。采取聯合、輪換和交叉等用藥形式，按療程投藥，以減小細菌產生耐藥性的概率。

三、防治

1.環境條件差是誘發鴨疫里氏桿菌與沙門氏菌病的重要原因。建議養殖場每日消毒鴨圈，保持地面干燥，舍內通風良好，避免過度擁擠，補充維生素和微量元素，提高免疫力，減少應激，實施全進全出制度。由于該養殖場不具備自繁自養的條件，建議養殖場盡量保持鴨苗來源單一，同時加強鴨苗運輸工具的消毒。

2.鴨疫里氏桿菌和沙門氏菌均易產生耐藥性，應及時根據藥敏試驗結果篩選高敏藥物，按照說明書進行給藥，避免超量或濫用抗生素，每個療程在4天以上，可有良好效果。

3.鴨疫里氏桿菌和沙門氏菌血清型較多，各型之間缺乏交叉保護作用，使用疫苗的血清型只有和本場流行株一致才能達到預防目的。加強血清型的監測工作是解決該病的關鍵，為研制合適的單價、多價或二聯疫苗提供依據。

四、小結

1.本病例為不同日齡番鴨與半番鴨混合飼養，出現相似的臨床癥狀，但僅從番鴨中分離到鴨疫里氏桿菌和沙門氏菌，究其原因可能與半番鴨抵抗力強且日齡較大有關，也可能與養殖場當日飼喂土霉素有關。

2.從臨床癥狀看，該養殖場所感染的鴨疫里氏桿菌與沙門氏菌均為慢性病例，發病率不高，解剖也無典型的“三周炎”病變，仍需實驗室檢驗進行確診；因沒有免疫接種與血清型對應的疫苗，當日發病即有死亡現象，因此應及時做藥敏實驗，篩選高敏藥物，盡早預防。

3.鴨疫里氏桿菌藥敏試驗可用TSA和巧克力色平板，用巧克力色平板難以測量抑菌圈直徑；因條件所限，本次實驗所用菌液未用麥氏比濁管，菌液濃度未知，藥敏試驗水平有待進一步提高。