肺心病患者肺部感染的病原菌分布特征及IL-6基因-572C/G多態性的研究

肖月梅 董錦華 于波

(1.榆林市第二醫院呼吸內科，陜西 榆林 719000；2.寶雞市陳倉醫院內科，陜西 寶雞 721300)

慢性肺源性心臟病簡稱肺心病，患者由于病程長，導致肺臟結構和生理功能退行性改變，呼吸道免疫防御功能及機體抵抗力下降，易并發肺部感染[1]。近年來，由于抗生素的大范圍應用，耐藥菌株逐年增多，增加肺部感染的治療難度。研究[2]發現，IL-6基因多態性影響血清IL-6水平，與慢性阻塞性肺疾病、肺結核等肺部感染性疾病以及全身炎性反應綜合征的發生發展有關。其中臨床上研究最多的是IL-6基因-572C/G多態性，但其在肺心病合并肺部感染患者中的研究鮮有發表。本研究主要探討肺心病患者肺部感染的病原菌分布特征，分析IL-6基因-572C/G多態性與肺部感染的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 2018年1月至2019年4月我院收治的肺心病住院患者80例作為研究對象。根據是否合并肺部感染，將患者分為肺部感染組31例和非感染組49例。其中肺部感染組男20例、女11例，年齡42～83歲，平均(58.3±3.5)歲，病程7～24年，平均(10.6±3.4)年。非感染組男31例、女18例，年齡44～82歲，平均(58.1±3.7)歲，病程8～23年，平均(10.4±3.2)年。納入患者病情均符合中華醫學會呼吸病學分會(2011年)制定的肺心病診斷標準[3]，肺部感染診斷參照美國胸科學會與感染病學會2005年制定的《醫院獲得性肺炎治療指南》[4]。已排除患有腫瘤、呼吸道以外部位感染、合并其他嚴重內科疾病的患者。兩組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。患者及家屬均知情同意。

1.2方法 兩組均抽取5 mL空腹外周靜脈血，置于含EDTA 的抗凝管中，置于-80℃保存待檢。患者晨起使用加入3%雙氧水的生理鹽水漱口后，用力咳痰，取痰液樣本置于無菌容器保存。取部分痰液樣本，行細菌接種及分離培養，操作按照《全國臨床檢驗操作規程》(第3版)進行，采用Phoenix TM全自動微生物鑒定系統(BD公司)進行細菌鑒定，采用紙片擴散法(K-B法)行藥敏試驗，參照美國臨床試驗標準研究所(2016版)判定標準。取部分血液樣本，離心取上清，采用Elisa法檢測血清IL-6水平，試劑盒購自美國RD工程有限公司。取部分血液樣本，使用人全血DNA 提取試劑盒提取全血基因組，試劑盒購自無錫百泰克生物技術有限公司。IL-6基因-572C/G多態性采用PCR-RFLP檢測。取5μL PCR擴增產物，過柱純化，37℃MbiI內切酶消化4 h，反應結束后行2%瓊脂糖凝膠電泳，根據電泳結果判斷基因型。PCR擴增條件見表1。

表1 PCR擴增條件

1.3統計學方法 采用SPSS 22.0統計學軟件進行數據分析，采用WH0NET5.6軟件行細菌耐藥分析，正態計量數據用(Mean±SD)表示，行t檢驗，計數資料采用n，%，行χ2檢驗，采用Hardy-Weinberg平衡檢驗基因多態性頻率分布，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1肺部感染病原菌分布及構成比 31例肺心病合并肺部感染患者共檢出病原菌46株，其中，革蘭陰性菌32株(69.57%)，主要為銅綠假單胞菌；革蘭陽性菌14株(30.43%)，主要為金黃色葡萄球菌。見表2。

表2 肺部感染病原菌分布及構成比[n(%)]

2.2主要病原菌對常用抗菌藥物的耐藥性分析銅綠假單胞菌對左氧氟沙星最耐藥、對亞胺培南最敏感，金黃色葡萄球菌對青霉素G最耐藥、對萬古霉素最敏感。見表3。

表3 主要病原菌對常用抗菌藥物的耐藥性分析(n,%)

2.3血清IL-6水平比較 肺部感染組的血清IL-6水平(291.35±86.42)ng/L顯著高于非感染組的(106.28±61.89)ng/L(t=11.152，P<0.05)。

2.4IL-6基因-572C/G位點基因型分布比較 經Hardy-Weinberg平衡檢驗，兩組群體基因遺傳平衡，樣本資料具有群體代表性(P=0.734、0.691)。兩組的CC、CG、GG基因型頻率比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 IL-6基因-572C/G位點基因型分布比較[n(%)]

2.5IL-6基因-572C/G位點基因型頻率分布比較 的C/G等位基因頻率分別66.13%(41例)、33.87%(21例)，與非感染組的65.31%(64例)、34.69%(34例)比較差異無統計學意義(χ2=0.011，P>0.05)。

3 討 論

肺心病患者由于病程持續時間長，呼吸道黏膜防御功能下降，導致全身系統發生退行性病變，機體抵抗力下降，易發生肺部感染[5]。本研究中，31例肺部感染組共檢出病原菌46株，其中，革蘭陰性菌32株(69.57%)，主要為銅綠假單胞菌；革蘭陽性菌14株(30.43%)，主要為金黃色葡萄球菌；銅綠假單胞菌對左氧氟沙星最耐藥、對亞胺培南最敏感，金黃色葡萄球菌對青霉素G最耐藥、對萬古霉素最敏感。細菌產生抗生素耐藥性的主要機理為誘導產生修飾酶，改變抗生素靶位及胞漿膜通透性，傳播耐藥基因等。抗生素使用頻率增加是細菌產生耐藥性的主要原因[6]。肺心病患者由于自身抵抗力下降，易發反復感染，抗生素使用頻繁，容易產生耐藥菌。因此，肺心病患者并發肺部感染時，盡快進行病原學診斷，根據藥敏結果選擇敏感抗生素治療，不僅能保證療效，還有助于減少耐藥菌的產生幾率。

IL-6是由活化的單核細胞、成纖維細胞等分泌的一類細胞因子，具有刺激淋巴細胞增殖、巨核細胞分化，促進B細胞分泌免疫球蛋白的功能[7]。IL-6在炎癥急性期作為非特異性炎癥因子參與肺部炎癥反應過程。細菌進入肺部后，其分泌的內毒素激活肺部上皮細胞、巨噬細胞及淋巴細胞，使IL-1β、IL-6、TNF-α分泌增加[8]。本研究中，肺部感染組的血清IL-6水平顯著高于非感染組(P<0.05)，提示IL-6在肺炎感染的發生發展中發揮重要作用。

研究單個基因多態性對肺部感染的影響，易受外界環境、樣本納入方式及數量、基因突變頻率低等外界因素影響[9]。此外，位于第7號染色體上的IL-6基因，全長5kb，具有5個外顯子及4個內含子，IL-6基因多態性存在區域主要集中于啟動子區，包括-174 G/C、-373 AnTn、-572 G/C、-597 G/A[10]。上述4個多態性位點都可能是基因結合序列，一旦發生基因突變，均會影響IL-6基因調控和表達，與多種疾病患者體內的IL-6水平特征性升高有關[11]。本研究中，肺部感染組的CC、CG、GG基因型頻率和C/G等位基因頻率與非感染組比較，差異無統計學意義(P>0.05)，提示IL-6水平上升可能與IL-6 基因啟動子區其他位點，以及肺部感染加劇患者體內水平炎癥反應，導致IL-6大量分泌有關。研究[12]發現，除了IL-6基因-572位點C/G多態性之外，-174位點多態性也與炎癥性疾病易感性有關。因此，本研究具有一定局限性，下一步應增加樣本量，聯合相關基因同時分析，進一步驗證研究。

綜上所述，本院肺心病合并肺部感染以革蘭陰性菌為主，對抗菌藥物表現不同程度耐藥性，應結合藥敏試驗結果選擇抗菌藥物治療。IL-6基因啟動子區-572C/G基因多態性可能與肺心病患者肺部感染易感性無關。