梅毒螺旋體顆粒凝集試驗聯合酶聯免疫吸附法在梅毒檢測中的應用價值

陳洪清，梁梅芳，梁麗霞，蘇曉梅，伍肇欣

（肇慶市第一人民醫院檢驗科，廣東肇慶 526000）

梅毒是一種因感染梅毒螺旋體所引起的慢性、系統性疾病，其被列為乙類傳染病。因其病程長，若不及時治療不僅會對患者身體健康產生危害，也會對他人的生命安全產生威脅，故而加強對梅毒患者的早期診治十分重要。實驗室檢查是診斷梅毒疾病的有效手段，特別是血清學檢查方法，梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）與酶聯免疫吸附法（ELISA）是較為常見的血清學檢查手段。ELISA具有操作方便、靈敏度高及價格低廉等優勢，目前被廣泛應用，但仍存在一定的假陰性和假陽性，可導致漏診、誤診[1]。TPPA應用基因工程技術，能吸附已知抗體或抗原與其相應載體表面，后通過酶標記抗原抗體反應，利用洗滌法洗掉液相中游離成分，通過對底物進行觀察并得出結果，診斷效能高，但兩種診斷方法的靈敏度不同，可引起結果不一致，在低濃度樣本中更為明顯[2]。基于此，本研究對比了TPPA聯合ELISA與單獨檢測梅毒的診斷效能和應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2020年1月至12月于肇慶市第一人民醫院進行血清學檢測的800例疑似梅毒患者的臨床資料，其中499例確診為梅毒患者納入梅毒組，梅毒組患者中男性317例，女性182例；年齡20～59 歲，平均（35.45±3.70）歲；病程 9 個月 ～ 2 年，平均（1.06±0.12）年。診斷標準：參照《2015年美國疾病控制中心性傳播疾病診斷和治療指南（續）：梅毒的診斷和治療指南》[3]中的相關診斷標準。納入標準：符合上述診斷標準，且經鍍銀染色檢測呈陽性者；均接受TPPA、ELISA檢測者；臨床資料完整者等。排除標準：近期未接受過相關治療者；心、肝、腎等器官嚴重受損者；合并嚴重精神障礙疾病者等。剩余301例非梅毒者為非梅毒組，非梅毒組中男性180例，女性121例；年齡23～62歲，平均（40.29±5.11）歲。研究在肇慶市第一人民醫院醫學倫理委員會審核批準下實施。

1.2 方法 所有受檢者檢測當天空腹、前1 d晚上10：00后禁食，于無菌條件下采集受檢者外周靜脈血5 mL，置于無抗凝劑采血管中，以4 500 r/min離心10 min處理，收集血清。ELISA檢測：使用ELISA試劑盒，將待測樣本對應微孔板按序編號，設陰性對照3孔、陽性對照2孔和標準空白對照1孔，37 ℃孵育1 h，洗板5次，之后于每孔加入酶標試劑100 μL，空白孔除外，繼續孵育0.5 h，再次洗板5次后每孔加入顯色劑A、B液各50 μL，震勻后，在37 ℃環境下顯色30 min，每孔加終止液50 μL，通過酶標儀波長450 nm讀取數值。TPPA檢測：使用TPPA試劑盒，用微量滴管將血清稀釋液滴入微量反應板第1孔中，共計4滴（100 μL），第一孔用微量移液管取2 μL樣本加入，混勻一段時間后取出25 μL，后依次同上操作，從第1孔，稀釋至第4孔，用試劑盒所提供的滴管于第3孔滴入1滴25 μL未致敏粒子，第4孔加入致敏粒子25 μL，用平板混合器以不會導致微量反應板內容物濺出的強度混合30 s，加蓋后于室溫（15～30 ℃）下水平靜置，2 h后觀察反應現象。

1.3 觀察指標 ①分析ELISA檢測梅毒的結果。②分析TPPA檢測梅毒的結果。③分析ELISA聯合TPPA檢測梅毒的結果。④分析兩種檢測方法對梅毒的診斷效能，包括靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值。其中靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%，特異度=真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100%，陽性預測值=真陽性例數/（真陽性例數+假陽性例數）×100%，陰性預測值=真陰性例數/（假陰性例數+真陰性例數）×100%。

1.4 統計學分析 文中數據應用SPSS 23.0統計軟件進行分析處理，計數資料用[ 例(%)]表示，行χ2檢驗。以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ELISA檢測梅毒的結果 ELISA檢測梅毒患者457例，非梅毒者343例，其中真陽性439例，真陰性283例，見表1。

2.2 TPPA檢測梅毒的結果 TPPA檢測梅毒患者492例，非梅毒者308例，其中真陽性452例，真陰性261例，見表2。

2.3 ELISA聯合TPPA檢測梅毒的結果 ELISA聯合TPPA檢測梅毒患者482例，非梅毒者318例，其中真陽性476例，真陰性295例，見表3。

表3 ELISA聯合TPPA檢測梅毒的結果(例)

2.4 兩種檢測方法單獨與聯合檢測對梅毒的診斷效能 ELISA聯合TPPA檢測梅毒的靈敏度、特異度、陰性預測值均顯著高于ELISA、TPPA單獨檢測，陽性預測值高于TPPA單獨檢測，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表 4。

表4 兩種檢測方法單獨與聯合檢測對梅毒的診斷效能(%)

3 討論

梅毒對人體產生的危害較大，若未能及時發現和診治，在感染后1～2年內具有強烈的傳染性，患者的精液、乳汁和唾液中均有梅毒螺旋體的存在，其會造成血管塌陷，引發一系列血管炎癥、潰瘍等病變，對人體系統器官造成嚴重損傷，且這種損傷是不可逆的。該疾病具有病程長、臨床表現復雜、多樣性等特點，診斷難度較大。血清學檢查方法為其主要檢測手段，有甲苯胺紅不加熱血清反應素試驗、TPPA、ELISA、化學發光等，選擇合適的檢測方法能避免漏診，有助于臨床診治[4]。

ELISA檢測操作簡單、成本低，結果清晰易判讀，且資料易儲存整理，其在大量疑似梅毒標本篩查中有顯著優勢。但值得注意的是，ELISA主要檢測的是梅毒免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）混合抗體，而梅毒患者經有效治療后，即便是患者治愈后，IgG抗體也會長期伴隨甚至出現終身的陽性，無法得知梅毒是否處于活動狀態；另外ELISA受所用的標記抗原、純度和抗原種類、檢測步驟等因素的影響，很有可能會出現一定的假陽性或假陰性[5]。可見，單一應用ELISA方法檢測梅毒，很有可能會出現誤診或漏診的情況，需結合其他檢測方法來彌補不足[6]。TPPA通過將梅毒螺旋體毒株制備成抗原，能與致敏粒子進行有效結合，產生凝聚狀顆粒，靈敏度高，且其不受生物因素的影響，但試劑較貴，步驟復雜，且只能通過肉眼觀察評價結果，原始數據無法保存[7]。將兩種檢測方法進行有效結合，可提升檢測靈敏度，可先以ELISA展開檢測，若結果為陽性，進一步以TPPA展開檢測，以提升診斷準確率[8]。本研究中，ELISA聯合TPPA檢測梅毒的靈敏度、特異度、陰性預測值均顯著高于ELISA、TPPA單獨檢測，陽性預測值高于TPPA單獨檢測，表明兩種方法聯合檢測可提高梅毒檢測的診斷效能，在最大程度上減少誤診、漏診。

綜上，ELISA操作簡單、快捷，適用于大量疑似梅毒篩查中，聯合TPPA檢測能提高診斷效能，更好地為患者后期治療提供有利的診斷依據，推廣應用價值較高。