NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)分析

李 娟 張智超 劉洪福 申小平

1.貴陽市疾病預(yù)防控制中心皮防科，貴州貴陽 550002；2.贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院普外科，江西贛州 341000；3.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科，貴州貴陽 550002

皮膚鱗狀細(xì)胞癌簡稱鱗癌，是臨床上最常見的非黑色素瘤皮膚癌之一。多發(fā)生在顏面、耳部、下唇和手背等曝光部位的皮膚[1-3]。目前皮膚鱗癌治療方法有手術(shù)治療、放療、化療，但常常出現(xiàn)復(fù)發(fā)和耐藥情況，嚴(yán)重影響患者的身心健康。從分子角度了解皮膚鱗癌發(fā)生發(fā)展對皮膚鱗癌有效治療具有重要意義。NF-κB即增強(qiáng)型核因子激活B 細(xì)胞輕鏈κ，是一種控制轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞因子產(chǎn)生和細(xì)胞存活的蛋白質(zhì)復(fù)合物[4-5]。NF-κB 在調(diào)節(jié)機(jī)體對感染的免疫應(yīng)答中起著關(guān)鍵作用[6-7]。本研究選擇貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院和贛南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的50 例皮膚鱗狀細(xì)胞癌患者組織病理切片作為癌組織組，相對應(yīng)癌旁組織作為癌旁組，探討NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院和贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2018年1月—2019年12月收治的50 例皮膚鱗狀細(xì)胞癌患者組織病理切片作為癌組織組，相應(yīng)癌旁組織作為癌旁組織組。50 例患者中，男28 例，女22 例；年齡24～77 歲，平均（52.34±5.24）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理診斷為皮膚鱗狀細(xì)胞癌；②所有標(biāo)本均有完整的臨床資料；③簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤患者；②肝腎功能和心肺功能嚴(yán)重異常的患者；③精神病患者；④孕婦或哺乳期婦女；⑤術(shù)前放療或化療者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 主要材料 NF-κB p65 鼠抗人多克隆抗體（圣克魯斯公司）；PV-9000 免疫組織化學(xué)染色試劑盒（北京中山金橋有限公司）；NF-κb p65 Rabbit polyAb（10745-1-AP，Proteintech）；辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG（H+L）（ZB-2301，中杉金橋）；DAB 顯色試劑盒（CW0125，CWBIO）；中性樹脂（CW0136，CWBIO）；蘇木素染色（AR1180-1，博生德生物）等。

1.2.2 免疫組織化學(xué)檢測 進(jìn)行石蠟切片預(yù)處理準(zhǔn)備（烤片、脫蠟、水化）、切片抗原修復(fù)、消除內(nèi)源性過氧化物酶、非特異性封閉、免疫反應(yīng)，最后進(jìn)行顯色復(fù)染，先是DAB 顯色5～10 min，在顯微鏡下掌握染色程度，PBS 或自來水沖洗1 min 之后蘇木精復(fù)染3 min，鹽酸酒精分化，返藍(lán)；再自來水沖洗1 min，脫水、透明、封片、鏡檢。免疫組織化學(xué)檢測流程見圖1。染色結(jié)果說明：目的蛋白棕色，細(xì)胞核藍(lán)紫色。

圖1 免疫組織化學(xué)檢測流程

1.2.3 陽性表達(dá)的測定 切片采用雙盲法，由醫(yī)院兩名有經(jīng)驗(yàn)的病理學(xué)專家獨(dú)立觀察。在400×高倍顯微鏡下，每個切片隨機(jī)抽取10 個視野，觀察陽性細(xì)胞百分率和細(xì)胞染色強(qiáng)度。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察兩組NF-κB p65 蛋白的表達(dá)差異，分析NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)與患者性別、年齡、疾病臨床分期和分化程度之間的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；計數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組NF-κB p65 蛋白表達(dá)陽性率的比較

癌組織組NF-κB p65 蛋白表達(dá)的陽性率為70.00%（35/50），高于癌旁組織組的16.00%（8/50），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 患者不同性別、年齡情況下NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)情況的比較

患者不同性別、年齡情況下的NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

表1 患者不同性別、年齡情況下NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.3 患者不同疾病臨床分期和分化程度下NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)情況的比較

Ⅲ～Ⅳ期患者的NF-κB p65 蛋白表達(dá)陽性率高于Ⅰ～Ⅱ期患者，低分化患者的NF-κB p65 蛋白表達(dá)陽性率高于高中分化患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

表2 患者不同疾病臨床分期和分化程度下NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)情況的比較

3 討論

皮膚鱗狀細(xì)胞癌是皮膚科的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率有逐年上升的趨勢，特別是在特殊環(huán)境或特殊職業(yè)的人群中[2]。皮膚鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病原因尚不清楚，其發(fā)生可能與以下因素有關(guān)：①紫外線照射和日常暴露；②化學(xué)致癌物刺激；③輻射、電離輻射；④其他因素，如病毒致癌物、遺傳等。該疾病容易被患者忽視，如果不能進(jìn)行有效治療并任其發(fā)展，將導(dǎo)致腫瘤惡化和轉(zhuǎn)移，最終危及生命[8-9]。研究發(fā)現(xiàn)，皮膚鱗狀細(xì)胞癌與癌基因、抑癌基因、生長因子、細(xì)胞因子和微環(huán)境等因素有關(guān)[2]。作為多種細(xì)胞因子NF-κB 在皮膚鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中也起著重要作用，但其作用機(jī)制尚不清楚[10-11]。

NF-κB 是一種具有多向轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能的蛋白質(zhì)。NF-κB 與其他轉(zhuǎn)錄因子共同作用，形成復(fù)雜的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，并以這個網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行抗凋亡、細(xì)胞增殖和免疫激活的參與作用，這一過程使其在免疫和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[12-14]。當(dāng)NF-κB 結(jié)合位點(diǎn)受到免疫和其他激活因子刺激時，IκB 通過細(xì)胞膜被激活，磷酸化為IκB，然后與泛素結(jié)合[15-16]。高表達(dá)的NF-κB與鱗狀細(xì)胞癌的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，可作為臨床診斷的分子標(biāo)記鱗狀細(xì)胞癌。在皮膚鱗狀細(xì)胞癌早期，由于NF-κB 的快速增加促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖或增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞與下游分子的競爭能力，臨床檢測的NF-κB 表達(dá)量明顯高于正常皮膚[17-18]。

本研究結(jié)果顯示，癌組織組的NF-κB p65 蛋白表達(dá)陽性率高于癌旁組織組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。患者不同性別、年齡情況下的NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。Ⅲ～Ⅳ期患者的NF-κB p65 蛋白表達(dá)陽性率高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。低分化患者的NF-κB p65 蛋白表達(dá)陽性率高于高中分化患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。可見臨床分期越高，NF-κB p65 蛋白陽性率越高；分化程度越低，NF-κB p65 蛋白陽性率越高。

NF-κB 中最常見的異源二聚體由p50 和p65兩個亞基組成。癌組織組NF-κB p65 蛋白陽性表達(dá)率高于癌旁組，提示皮膚癌組織組織中NF-κB p65蛋白高表達(dá)；且臨床Ⅲ～Ⅳ期皮膚癌組織組織中NF-κB p65 陽性表達(dá)率高于Ⅰ～Ⅱ期皮膚癌組織組織，提示隨著皮膚鱗狀細(xì)胞癌臨床分期的發(fā)展，NF-κB p65 陽性表達(dá)率明顯增高。NF-κB p65 在低分化皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的陽性表達(dá)率高于高、中分化皮膚鱗癌，說明NF-κB p65 的陽性表達(dá)隨皮膚鱗狀細(xì)胞癌分化程度的升高而降低。NF-κP65 蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中高表達(dá)，且隨著疾病的加重表達(dá)增強(qiáng)，與相關(guān)研究結(jié)果[19-21]類似，認(rèn)為其可作為判斷病程和治療的新指標(biāo)，具有重要的研究意義，值得臨床參考。

綜上所述，NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)高于在癌旁正常組織，且皮膚鱗狀細(xì)胞癌的分期越高，則NF-κB p65 蛋白表達(dá)越高；皮膚鱗狀細(xì)胞癌的分化程度越低，則NF-κB p65 蛋白表達(dá)越高。而NF-κB p65 蛋白表達(dá)和患者的年齡、性別之間無明顯的關(guān)系。