動(dòng)物源性食品中β-受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

張 蕾，馮騰壘，曹 楠，高慶輝，林文秀，張 瓊

（1.石家莊市畜產(chǎn)品和獸藥飼料質(zhì)量檢測(cè)中心 050041；2. 石家莊市農(nóng)業(yè)行政綜合執(zhí)法支隊(duì) 050000）

β-受體激動(dòng)劑具有類似腎上腺素的功能，俗稱瘦肉精，其母核為苯乙醇胺類結(jié)構(gòu)，根據(jù)取代基不同，可分為苯酚類和苯胺類，其基本化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示。

圖1 β-受體激動(dòng)劑基本結(jié)構(gòu)

β-受體激動(dòng)劑在醫(yī)學(xué)上具有興奮呼吸道平滑肌、降低微血管通透性的作用，因此常被用于治療支氣管疾病。該類化合物還能夠增加動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)含量及瘦肉率，提高飼料的利用率，因此常被一些不法商家用于畜牧行業(yè)中，但其性質(zhì)穩(wěn)定，在動(dòng)物源性食品中代謝困難，容易聚積。當(dāng)人體食入含有β-受體激動(dòng)劑的動(dòng)物源性食品后，會(huì)造成人體神經(jīng)系統(tǒng)損傷，因此該類化合物被嚴(yán)禁用于動(dòng)物飼養(yǎng)過(guò)程中。目前常用的檢測(cè)方法有液相-質(zhì)譜聯(lián)用法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)、表面增強(qiáng)拉曼光譜等，本文綜述了β-受體激動(dòng)劑常用檢測(cè)方法，以其能夠?yàn)槲磥?lái)動(dòng)物源性食品中該類化合物的殘留檢測(cè)提供依據(jù)。

1 液相-質(zhì)譜聯(lián)用法

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)化合物具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，常被用于檢測(cè)畜產(chǎn)品中的β-受體激動(dòng)劑類。劉新輝等在前處理過(guò)程采用酸水解法，并利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UHPLC-MS)檢測(cè)畜產(chǎn)品中β-受體激動(dòng)劑類物質(zhì)，檢測(cè)限達(dá)到0.43～0.50μg/kg，回收率為80.2%～106.0%，且與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法相比，靈敏度高，前處理操作簡(jiǎn)單。羅輝泰等利用具有混合分離功能的新型色譜柱，結(jié)合同位素稀釋法，建立了高效液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)法，可同時(shí)檢測(cè)豬肉中26種β-受體激動(dòng)劑，檢測(cè)限達(dá)到0.03～0.1μg/kg，定量限為0.1～1.0μg/kg。郭平等在豬尿樣品中測(cè)定β-受體激動(dòng)劑時(shí)，前處理采用乙酸銨緩沖液和β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶進(jìn)行酶解，并經(jīng)陽(yáng)離子固相萃取柱凈化后，建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法(UHPLC-MS /MS)檢測(cè)豬尿液品中22種β-受體激動(dòng)劑的方法，由于該試驗(yàn)過(guò)程優(yōu)化了前處理過(guò)程中酶解過(guò)程和固相萃取柱的淋洗方式，提高了抗干擾能力與方法靈敏度。

2 高效液相色譜法

高效液相色譜法(HPLC)是以液體作為流動(dòng)相，并結(jié)合高壓輸液系統(tǒng)將具有不同極性的流動(dòng)相泵入含有色譜柱中，在柱內(nèi)利用各成分在兩相系統(tǒng)中吸附能力不同，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)化合物與雜質(zhì)分子的分離檢測(cè)。李娜等以甲醇-磷酸二氫鈉混合液作為流動(dòng)相，用高效液相色譜結(jié)合紫外檢測(cè)器，測(cè)定豬肉及血清中的鹽酸克倫特羅含量，檢測(cè)限為1.8μg/kg，加標(biāo)回收率為87.4%～99.2%。朱曉艾等采用C18為色譜柱，用乙腈：0.02mol/L乙酸銨溶液(0.1%甲酸)=25：75作為流動(dòng)相，建立了高效液相色譜法檢測(cè)豬肉中鹽酸克倫特羅的檢測(cè)方法，檢測(cè)限達(dá)到25μg/kg，回收率在88.55%～94.03%。張群等對(duì)樣品前處理方法和色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，延長(zhǎng)超聲提取時(shí)間，利用C18固相萃取柱凈化，以甲醇∶磷酸二氫鈉=40∶60作為流動(dòng)相，結(jié)合反相高效液相色譜建立了鮮肉中鹽酸克倫特羅的殘留檢測(cè)方法，檢測(cè)限達(dá)到0.01 μg/mL，加標(biāo)回收率在75%～82.5%之間。

3 酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)

酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)(ELISA)是指以酶為標(biāo)記物，以抗原和抗體之間的特異性結(jié)合為基礎(chǔ)的一種分析方法，其特點(diǎn)是靈敏度高、操作簡(jiǎn)便，適用于大批量樣品中β-受體激動(dòng)劑的殘留檢測(cè)。孫明君等利用ELISA方法建立了進(jìn)出口食用動(dòng)物與飼料中的鹽酸克倫特羅的殘留檢測(cè)方法，該試驗(yàn)了確立了包被抗原的最適質(zhì)量濃度以及抗體的最佳稀釋度，檢測(cè)限達(dá)到0.05ng/mL，加標(biāo)回收率為94.52%。

4 表面增強(qiáng)拉曼光譜

拉曼光譜屬于分子振動(dòng)光譜，可以反映分子的特征結(jié)構(gòu)，且利用拉曼光譜進(jìn)行檢測(cè)具有分析時(shí)間短、前處理過(guò)程簡(jiǎn)單、損耗少等特點(diǎn)，但是直接用常規(guī)拉曼光譜儀進(jìn)行檢測(cè)，目標(biāo)物檢測(cè)限難以達(dá)到要求。因此，在應(yīng)用時(shí)常加入表面增強(qiáng)劑，以增強(qiáng)化合物的散射信號(hào)。甘盛等以銀納米顆粒溶膠作為表面信號(hào)增強(qiáng)劑，利用拉曼光譜技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)硫酸特布他林、鹽酸班布特羅、鹽酸氯丙那林等3種β-受體激動(dòng)劑的定性和定量檢測(cè)；近年來(lái)，表面增強(qiáng)拉曼光譜法不僅能用于檢測(cè)動(dòng)物源性食品、動(dòng)物尿液中的β-受體激動(dòng)劑的殘留檢測(cè)，還可用于飼料中β-受體激動(dòng)劑的檢測(cè)分析，但該方法穩(wěn)定性較差，還需進(jìn)一步進(jìn)行探索完善。

5 展望

中國(guó)目前針對(duì)動(dòng)物源性食品中β-受體激動(dòng)劑的殘留檢測(cè)建立了數(shù)量眾多的檢測(cè)中心，但β-受體激動(dòng)劑扔被不法分子作為生長(zhǎng)促進(jìn)劑用于動(dòng)物飼養(yǎng)階段，所以在現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)的基礎(chǔ)上有必要開(kāi)發(fā)靈敏度高、檢測(cè)速度快、準(zhǔn)確性好的分析方法。