CLEC7A在顱內動脈瘤組織和血清中的表達及臨床意義▲

胡瑞婷 黃利強 周夢曉 周少旦 胡瑞光

(1 廣西醫科大學附屬民族醫院神經內科，廣西南寧市 530001；2 廣西醫科大學第一附屬醫院神經內科，廣西南寧市 530021；3 廣西醫科大學附屬民族醫院老年科，廣西南寧市 530001)

顱內動脈瘤(intracranial aneurysm，IAA)是一種顱內動脈管壁上的瘤樣突起，我國成年人IAA的發病率約為7%，IAA破裂可導致嚴重的致殘率和死亡率，因而需要探討其發病機制以采用合理的預防和治療措施應對。研究顯示遺傳因素、血管壁結構、血流動力學因素和分子表達異常等均在動脈瘤的形成中發揮重要作用[1-2]。CLEC7A也稱為Dectin-1，是基因編碼C型凝集素/C型凝集素樣結構域超家族的成員。CLEC7A在多種細胞中發揮調控作用，如CLEC7A激活的漿細胞樣樹突狀細胞可以顯著促進Th2型T細胞應答，而CLEC7A激活的髓樣樹突狀細胞則降低Th2型T細胞應答[3]。在人的肺組織中，過表達CLEC7A可以增強肺上皮細胞對流感嗜血桿菌的促炎免疫應答[4]。在動脈瘤研究方面，有研究顯示CLEC7A過表達與栓塞后動脈瘤的愈合相關[5]。這些研究均提示CLEC7A參與多種細胞的炎癥損傷修復過程。然而，CLEC7A在IAA中的作用尚未清楚。本研究通過分析CLEC7A在IAA組織和血清中的表達水平，探討CLEC7A在IAA發病中的作用。

1 資料與方法

1.1 數據集篩選 在GEO數據庫檢索IAA的數據集，檢索詞“Intracranial Aneurysm”，對檢索到的數據集進行篩選，限定“人類(Homo sapiens)”“組織(tissue)”“基因芯片(Expression profiling by array)”， 樣本數量>10個，最終獲得2個IAA基因芯片結果，分別為GSE75436和GSE54083數據集，其中GSE75436有30個樣本，包括15例IAA血管樣本和15例配對的淺表動脈血管樣本；GSE54083有23個樣本，包括13例IAA血管樣本和10例配對的淺表動脈血管樣本。

1.2 研究對象 收集廣西民族醫院2018年1月至2019年12月收治的IAA患者的血清標本60例，收集患者的年齡、性別、動脈瘤是否破裂等臨床資料。其中40例未發生IAA破裂，20例發生IAA破裂。患者年齡(45.5±7.9)歲，男28例，女32例。IAA的診斷均經影像學或血管造影證實。排除合并有腫瘤、免疫性疾病、外傷以及嚴重肝腎功能不全的患者。另選取正常人的血清標本20例作為對照，年齡(43.6±8.4)歲，男10例，女10例。

1.3 血清CLEC7A檢測 予IAA患者入院后第二天清晨采集靜脈血5 mL，室溫放置2 h后，以3 000 r/min離心10 min，離心結束后吸取血清放入-80 ℃冰箱保存。采用ELISA法檢測CLEC7A水平(ELISA試劑盒購自美國CUSABIO公司，檢測范圍31.25～2 000 pg/mL，檢測靈敏度7.81 g/mL)，檢測流程嚴格按照相應試劑盒說明書進行。

2 結 果

2.1 CLEC7A在IAA組織的表達 對CLEC7A在GSE75436和GSE54083數據集的表達水平進行分析顯示，IAA組織中的CLEC7A表達量高于淺表動脈的表達量(P<0.05)，見表1。進一步分析GSE54083數據集中的CLEC7A表達水平與患者性別和年齡的關系，結果顯示不同性別和年齡段IAA組織中CLEC7A表達水平的比較，差異無統計學意義(均P>0.05)。見表2。

表1 CLEC7A在IAA和正常動脈組織中表達的比較 ()

表2 GSE54083數據集中IAA組織的CLEC7A 表達水平與患者年齡和性別的關系 ()

2.2 CLEC7A在IAA患者血清中的表達 使用ELISA法檢測了CLEC7A在未破裂IAA、破裂IAA患者和健康人血清中的表達水平，單因素方差分析結果顯示血清CLEC7A在上述3組中表達水平差異有統計學意義(F=3.568，P=0.001)，其中在破裂IAA患者的表達水平最高(321.90±12.54)pg/mL，未破裂IAA患者次之(227.68±14.22)pg/mL，健康人最低(174.80±9.29)pg/mL；兩兩比較顯示血清CLEC7A在未破裂IAA、破裂IAA患者的表達水平均顯著高于健康人表達水平(均P<0.05)。

在不同性別方面，血清CLEC7A水平在男性和女性患者的表達差異無統計學意義[(259.51±45.94)vs.(255.86±56.88),t=0.163,P=0.875]；而在年齡方面，年齡高(≥60歲)的患者其血清CLEC7A水平比年齡低(<60歲)的患者明顯升高，差異有統計學意義[(273.46±48.12)vs.(232.38±30.20),t=4.051，P=0.001]。

2.3 血清CLEC7A水平對IAA的診斷價值 以健康人血清作為對照，使用ROC曲線分析血清CLEC7A水平對IAA的診斷價值，結果顯示，血清CLEC7A水平對IAA的診斷靈敏度為0.618，特異度為0.700，AUC值為0.798，最佳截斷值為232.56 pg/mL。結果顯示血清CLEC7A水平對IAA有一定的診斷價值。見圖1。

圖1 血清CLEC7A水平診斷IAA的ROC曲線

3 討 論

隨著影像學技術的發展，臨床上對IAA的檢出率不斷提高。IAA一旦破裂將會導致蛛網膜下腔出血，其中高達35%蛛網膜下腔出血患者的預后不良。目前IAA形成的機制尚不完全清楚，但已有研究報道了數個與IAA發病密切相關的基因，如 KLF2[6]、TNF-α[7]等。近年來，一些新的與IAA發病相關的基因不斷被發現，如Marchese等[8]采用基因芯片技術分析了破裂IAA血管、破裂IAA患者的顳淺動脈血管，以及未破裂IAA血管、未破裂IAA患者的顳淺動脈血管，對照顳淺動脈的基因表達情況，發現金屬蛋白酶抑制劑、一氧化氮及凋亡相關信號通路與IAA破裂相關。Nakaoka等[9]利用微陣列技術檢測破裂IAA血管、未破裂IAA血管和顳淺動脈血管的基因表達水平，發現早期破裂IAA中有430個基因表達升高，617個基因表達降低。這些結果表明基因的改變在IAA的發病過程中發揮重要的作用。

人的CLEC7A基因通過轉錄后可產生8個亞型，2個主要亞型(A、B)和6個次要亞型(C、D、E、F、G、H)。其中只有三個亞型(A、B、E)同時具有完整的CRD結構域和ITAM基序。CLEC7A的細胞內結構域而非配體結合結構域決定著物種特異性配體[10]。CLEC7A能特異性識別可溶性及顆粒性葡聚糖。CLEC7A也可識別CD4和CD8 T淋巴細胞表面的內源性配體，促進T淋巴細胞的增生。目前CLEC7A在真菌感染免疫領域的研究較多，如研究表明CLEC7A是介導固有免疫細胞識別β-葡聚糖的主要受體[11]。CLEC7A還介導了宿主細胞識別并殺死真菌感染的過程。在炎癥反應方面，CLEC7A可以反應性激活mTOR-sonic-hedgehog信號級聯通路，進而刺激脂質代謝酶的表達[12]。這些研究結果提示CLEC7A參與免疫和炎癥性疾病發生。

本研究分析了兩個基因芯片中CLEC7A的表達情況，發現IAA組織中CLEC7A表達水平顯著高于正常組織的CLEC7A表達水平，表明CLEC7A參與了IAA的發病過程，并且CLEC7A高表達可能促進IAA的發病過程。既然CLEC7A在IAA組織中高表達，則其表達也有可能在血清標本中發生改變。因而本文進一步檢測了CLEC7A在IAA患者血清中的表達情況，結果發現與在組織中的表達相似，CLEC7A在IAA患者血清中的表達也明顯升高，且發生破裂IAA患者的CLEC7A表達水平更高，表明CLEC7A表達水平越高，IAA破裂的風險越高。此外，本研究發現了血清CLEC7A表達水平與患者年齡相關，盡管在組織中沒有看到類似結果，我們考慮這與血管組織標本例數較少相關。這些結果提示年齡增大、血管變硬等因素可能導致CLEC7A表達升高，進而共同促進IAA的發生。此外，本研究分析了血清CLEC7A水平對IAA的診斷價值，結果顯示血清CLEC7A水平對IAA的診斷有較高的敏感度和特異度。因此，血清CLEC7A水平可作為IAA的一個輔助診斷指標。

綜上所述，CLEC7A表達水平在IAA組織和血清中均顯著升高，提示CLEC7A與IAA的發病密切相關。血清CLEC7A水平可作為IAA的輔助診斷指標之一。