血漿miR-374a-5p、IL-10水平與急性心肌梗死患者PCI術后冠狀動脈無復流的相關性分析

王燕英，陳海榮，張偉，李名蘭

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是一種較為嚴重心血管類疾病，起病急、病死率高，嚴重威脅患者生命健康[1-3]。目前臨床上治療AMI最有效的方法為經皮冠狀動脈介入治療(percutaneous coronary intervention，PCI)，大大降低了患者的病死率，但PCI術后部分患者心肌得不到有效灌注，即出現冠狀動脈無復流現象，顯著增加了不良心血管事件的發生率，對患者預后造成嚴重影響[4-5]。因此，尋找影響AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流現象發生的相關因素，對預防無復流現象發生，改善患者預后具有重要價值。微小RNA-374a-5p(miR-374a-5p)是一種內源性小分子單鏈RNA，有研究顯示，miR-374a-5p與心血管疾病的發生密切相關[6]。白介素-10(interleukin-10，IL-10)是機體內重要的一種細胞因子，研究顯示，IL-10在維持人體內環境穩定、免疫調節等方面發揮重要作用[7]。然而，有關miR-374a-5p、IL-10對AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流的影響尚不完全清楚。鑒于此，現分析AMI患者血漿miR-374a-5p、IL-10表達及其與PCI術后冠狀動脈無復流的相關性，以期為臨床治療AMI提供參考，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年11月—2021年2月中南大學湘雅醫學院附屬海口醫院全科醫學科和心血管內科首次確診并行PCI的AMI患者300例為研究對象，根據PCI術后患者心肌梗死溶栓治療臨床試驗(TIMI)血流分級[8]分為無復流組(TIMI<2級)46例和復流組(TIMI≥2級)254例。2組患者基線臨床資料比較差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。本研究經醫院倫理委員會批準通過(倫審字2018-093號)，患者及家屬自愿加入本項研究，并簽署知情同意書。

表1 PCI術后無復流組及復流組患者臨床資料比較例(%)]

1.2 病例選擇標準 (1)納入標準：①符合中華醫學會心血管病學分會制定的有關AMI的相關診斷標準[9]；②在本院行PCI治療者；③臨床資料完整者。(2)排除標準：①患有肝腎等功能不全者；②有心力衰竭、風濕性心臟病史者；③患有惡性腫瘤者；④有PCI手術禁忌證者。

1.3 觀測指標與方法 PCI術后清晨抽取患者空腹靜脈血5 ml， 抗凝離心后收集血漿，并置于-70℃冰箱中保存備用。

1.3.1 血漿miR-374a-5p表達檢測：取出待測血漿，用總RNA提取試劑盒(無錫百泰克生物技術有限公司，批號RP2401)并嚴格按照說明書順序提取總RNA，然后經逆轉錄得到cDNA(逆轉錄試劑盒購自北京諾爾賽克科技有限公司，批號K1629)。以上述逆轉錄合成的cDNA為模板，進行實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(qRT-PCR儀購自美國應用生物系統公司，型號StepOne TM)。PCR反應條件為：94℃、3 min，94℃、25 s，60℃、30 s，72℃、20 s，共35個循環。miR-374a-5p及內參U6的引物序列見表2，均由北京寶日醫生物技術有限公司合成。采用2-△△CT法計算血漿miR-374a-5p相對表達水平。

表2 血漿miR-374a-5p引物序列

1.3.2 血漿IL-10表達檢測：采用酶聯免疫吸附法檢測血漿IL-10表達水平，試劑盒購自上海博湖生物科技有限公司，批號BH-H6445，操作步驟按照試劑盒說明書進行。

2 結 果

2.1 血漿miR-374a-5p、IL-10表達比較 無復流組血漿miR-374a-5p表達高于復流組，血漿IL-10表達低于復流組(P<0.05)，見表3。

表3 PCI術后無復流組及復流組患者血漿miR-374a-5p、IL-10表達比較

2.2 血漿miR-374a-5p、IL-10表達的相關性 無復流組患者血漿miR-374a-5p與IL-10表達呈負相關(r=-0.453，P=0.000)。

2.3 血漿miR-374a-5p、IL-10對AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流發生的診斷價值 血漿miR-374a-5p、IL-10診斷AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流的曲線下面積(AUC)為0.847、0.790，截斷值分別為1.15、2.85 pg/ml，此時對應敏感度分別為0.826、0.692，特異度分別為0.803、0.788。血漿miR-374a-5p、IL-10聯合檢測診斷AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流的AUC為0.900，此時對應敏感度和特異度分別為0.914、0.767，見表4和圖1。

表4 血漿miR-374a-5p、IL-10表達水平對AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流的診斷價值

圖1 血漿miR-374a-5p、IL-10表達水平對AMI患者

2.4 AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流發生的影響因素分析 以AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流是否發生為因變量(0=否，1=是)，血漿miR-374a-5p、IL-10表達水平為自變量，采用Logistic回歸分析，結果顯示：血漿IL-10高表達水平是AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流發生的保護因素(P<0.05)；血漿miR-374a-5p高表達水平是AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流發生的獨立危險因素(P<0.05)，見表5。

表5 AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流發生的相關影響因素分析

3 討 論

近年來隨著醫學水平的不斷提高，PCI術成為臨床治療AMI患者較常用且最為有效的治療手段，可提高AMI患者的生存率[10-12]。但研究發現，部分患者術后冠狀動脈血流灌注較少或無血流再灌注，導致患者預后不良[13-14]。因此，探究影響AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流現象發生的相關因素，對提高AMI患者的臨床治療效果、降低PCI術后不良心血管事件的發生率具有重要意義。

miR-374a-5p是由22個核苷酸組成的一種非編碼RNA，其基因定位于人X染色體上[15-16]。其在肥胖、腫瘤、血栓形成、急性心肌梗死等疾病的發生發展中發揮重要作用。紀潤璧等[17]研究發現，miR-374-5p可通過調控人胃組織來源間質干細胞，來促進影響胃癌增殖和遷移的重要分子，進而在胃癌中發揮作用。王曉燕等[6]研究發現，miR-374在急性心肌梗死患者心肌組織中呈高表達，且可通過抑制IL-10的表達誘導患者心肌纖維化。本研究結果顯示，無復流組血漿miR-374a-5p表達水平較復流組高，與上述研究相似，提示血漿miR-374a-5p可能與AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流發生密切相關。

IL-10是一種主要由Th2細胞產生的細胞抑制因子，在抑制Th1細胞應答、調控機體內炎性反應等方面發揮重要作用[18-19]。研究顯示，機體內多種物質可通過調控IL-10參與心血管等疾病的發生發展過程[20-21]。徐夢云等[22]研究發現，對AMI患者PCI術后進行康復訓練，患者IL-10水平升高。本研究結果顯示，無復流組血漿IL-10表達水平較復流組低，與上述研究結果類似，提示血漿IL-10可能參與AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流的發生。劉婧等[23]研究發現，深靜脈血栓患者血清中IL-10表達水平降低，而單個核細胞中miR-374a-5p表達水平升高，miR-374a-5p可能通過抑制IL-10表達進而參與深靜脈血栓的形成。本研究發現，冠狀動脈無復流患者血漿中miR-374a-5p、IL-10表達呈負相關，提示血漿miR-374a-5p可能通過調控IL-10表達，二者共同參與冠狀動脈無復流的發生及發展。本研究ROC曲線分析表明，血漿miR-374a-5p、IL-10均可作為診斷AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流發生的臨床指標，但單獨應用價值有限。因此本研究將二者聯合應用，診斷冠狀動脈無復流的AUC為0.900，提示二者聯合可能有利于更好的評估AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流現象。此外，Logistic回歸分析結果顯示，血漿miR-374a-5p、IL-10表達水平是影響AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流發生的相關因素，提示檢測AMI患者血漿miR-374a-5p、IL-10表達水平可為預測PCI術后冠狀動脈無復流現象發生提供一定的臨床依據。

綜上所述，AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流發生者血漿中miR-374a-5p表達水平升高，IL-10表達水平降低，血漿miR-374a-5p、IL-10水平對AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流現象發生具有一定的臨床診斷價值，提示二者可作為AMI患者PCI術后冠狀動脈無復流現象發生的潛在生物學指標，但二者對冠狀動脈無復流發生的具體作用機制還有待深入研究。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

王燕英：設計研究方案，實施研究過程，論文撰寫；陳海榮：提出研究思路，分析試驗數據，論文審核；張偉：實施研究過程，資料搜集整理，論文修改；李名蘭：進行統計學分析