實時熒光定量PCR核酸檢測在獻血者HIV病毒篩查中的應(yīng)用價值分析

邵長年

【摘要】目的：研究在獻血者人類免疫缺陷病毒（HIV）篩查中通過實時熒光定量PCR核酸檢測的應(yīng)用價值。方法：抽取本站于2019年9月到2020年9月，此期間接受HIV病毒篩查的獻血者共640例，對其血液樣本均采用核酸測定（NAT）與酶聯(lián)免疫吸附劑測定（ELISA）方式，其中核酸檢測采用PCR-實時熒光定量法。結(jié)果：NAT陽性樣本19例，HIV病毒篩查陽性率為2.97%；ELISA陽性樣本15例，HIV病毒篩查陽性率為2.34%；ELISA陽性、NAT陰性標本7例，約占1.09%；ELISA陰性、NAT陽性標本為11例，約占1.72%。ELISA或NAT檢測結(jié)果呈陽性的26例血液樣本進行復(fù)檢，共有23例確認為HIV感染。與ELISA（+）NAT（-）相比，ELISA（-）NAT（+）、ELISA（+）NAT（+）的HIV病毒檢出率更高；且與ELISA（-）NAT（+）相比，ELISA（+）NAT（+）的HIV病毒檢出率更高。結(jié)論：實時熒光定量PCR核酸檢測對于提高HIV病毒篩查準確率，提高臨床輸血安全性等有十分重要的意義。

【關(guān)鍵詞】獻血者；篩查；應(yīng)用價值；HIV病毒；實時熒光定量PCR核酸檢測

[中圖分類號]R440 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2021）11-0153-02

由于異體輸血可能會造成艾滋病等傳染病的傳播，而艾滋病是一種由HIV病毒引發(fā)的感染性疾病，傳染性與致死率較高[1]。而對獻血者血液樣本進行篩查，是降低HIV感染的有效方式，可杜絕由于輸血導(dǎo)致的疾病感染[2]。有相關(guān)報告指出，將實時熒光定量PCR核酸測定應(yīng)用于獻血者HIV病毒篩查中，收效較為理想[3]。可排除HIV病毒陽性血液，降低輸血傳播病毒的風險，使血液使用更加安全。在此次實驗中，對640例接受HIV病毒篩查的獻血者的血液樣本篩查結(jié)果開展對比，旨在探討獻血者HIV病毒通過不同檢測方式的篩查效果及價值，現(xiàn)將此次結(jié)果闡述如后。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本站于2019年9月到2020年9月，此期間接受HIV病毒篩查的獻血者共640例進行觀察研究，獻血者中女性312例、男性328例，年齡20～37歲，平均年齡（26.59±2.42）歲，對其血液樣本均采用NAT測定與ELISA測定方式，其中核酸檢測采用PCR-實時熒光定量法，研究項目均在醫(yī)學(xué)倫理委員會監(jiān)督下進行操作，全部接受HIV病毒篩查的獻血者簽署知情同意書。

1.2方法 獻血者需在清晨空腹抽取5 mL靜脈血，做兩支標本，對標本進行離心處理，時間為10 min，轉(zhuǎn)速為3000r/min，之后將血清放置于具有標記試管中待檢。①實時熒光定量PCR核酸檢測：通過德國GFE試劑盒中的autoX磁珠法病毒核酸提取試劑盒進行HIV病毒核酸提取，后使用HIV病毒篩選試劑盒，取探針混合液（0_C/0-B）與底物混合液（BM）配制HIV PCR反應(yīng)混合液，將其加入96孔PCR反應(yīng)板的擴增反應(yīng)管，取相應(yīng)體積提取的病毒核酸模板和陽性、陰性對照品，放入擴增反應(yīng)管中，關(guān)閉PCR反應(yīng)板，以1500 g離心60 s，然后將其放入熒光定量PCR儀中，進行擴增反應(yīng)與測定，檢測試劑盒有上海源物科技有限公司提供。其中內(nèi)標陽性者，表示該標本為陽性，判為不合格。②ELISA法：采用ELISA法對獻血者抗HIV檢查，主要儀器與試劑包括抗HIV檢測試劑（上海榮盛生物有限公司）。試劑盒內(nèi)附陽性與陰性對照試劑。檢測設(shè)備主要包括SM-3酶標儀、全自動酶聯(lián)免疫分析儀與自動洗板機等，檢測嚴格按照試劑盒操作使用說明進行。具體評判標準：若S/CO≥1，表示該標本為陽性，判為不合格。另外，對于抗HIV檢出陽性者，需重新采集血液樣本經(jīng)由權(quán)威實驗室再次檢測確認。

1.3觀察指標 記錄ELISA和實時熒光定量PCR核酸檢測結(jié)果； 記錄ELISA或NAT檢測陽性者復(fù)檢結(jié)果，隨訪ELISA（+）NAT（-）、ELISA（-）NAT（+）、ELISA（+）NAT（+）血樣。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)納入SPSS23.0軟件分析，計數(shù)資料（ELISA和實時熒光定量PCR核酸檢測結(jié)果、復(fù)檢結(jié)果）用%表示，卡方檢驗，若（P<0.05）則認為有研究意義。

2 結(jié)果

2.1獻血者的ELISA和實時熒光定量PCR核酸檢測結(jié)果 對比640例HIV病毒篩查樣本中，NAT陽性樣本19例，HIV病毒篩查陽性率為2.97%；ELISA陽性樣本15例，HIV病毒篩查陽性率為2.34%；ELISA陽性、NAT陰性標本7例，約占1.09%；ELISA陰性、NAT陽性標本為11例，約占1.72%，如表1所示。

2.2ELISA或NAT檢測陽性者復(fù)檢結(jié)果對比 ELISA或NAT檢測結(jié)果呈陽性的26例血液樣本進行復(fù)檢，共有23例確認為HIV感染。與ELISA（+）NAT（-）相比，ELISA（-） NAT（+）、ELISA（+）NAT（+）的HIV病毒檢出率更高；且與ELISA（-）NAT（+）相比，ELISA（+）NAT（+）的HIV病毒檢出率更高，如表2所示。

3 討論

輸血作為救治患者的多用手段之一，可用于術(shù)中出血量較大的患者，在臨床相關(guān)疾病的治療中具有廣泛的應(yīng)用價值[4]。艾滋病等輸血相關(guān)傳染病的控制與預(yù)防已經(jīng)成為社會關(guān)注焦點，艾滋病作為由HIV病毒引發(fā)的感染性疾病，將嚴重威脅人類的健康。而對獻血者血液樣本進行篩查，是降低HIV感染的重要途經(jīng)，可降低疾病醫(yī)源性傳播率[5]。

既往，臨床主要采用ELISA法進行HIV病毒篩查，該檢測方式具有操作簡單、成本低廉等優(yōu)點，且結(jié)果便于讀取、保存，用于傳染疾病標志物的檢測具有較為理想的效果。但該檢測方式可受到多種因素影響，檢驗數(shù)據(jù)不夠準確。隨著信息技術(shù)的進一步發(fā)展，實時熒光定量PCR核酸測定逐漸運用于HIV病毒篩查中，其作為一種體外模擬自然DNA復(fù)制過程的技術(shù)，通過加熱變性、退火、延伸等反應(yīng)步驟不斷循環(huán)，完成DNA擴增放大，并應(yīng)用熒光信號累積實現(xiàn)整個PCR進程實時監(jiān)測，有利于縮短病毒檢測窗口期，降輸血風險[6]。在此次實驗中，ELISA陽性、NAT陰性標本7（1.09%）例；ELISA陰性、NAT陽性標本為11（1.72%）例，對ELISA或NAT檢測結(jié)果呈陽性的26例血液樣本進行復(fù)檢，共有23例確認為HIV感染。與ELISA（+）NAT（-）相比，ELISA（-）NAT（+）、ELISA（+） NAT（+）的HIV病毒檢出率更高；且與ELISA（-）NAT（+）相比，ELISA（+）NAT（+）的HIV病毒檢出率更高，提示實時熒光定量PCR核酸測定的應(yīng)用效果更佳，具有方便、簡單、價格便宜等優(yōu)點，有利于排除HIV病毒陽性血液，降低輸血傳播HIV病毒的風險，使血液使用更加安全。

研究結(jié)果表示，實時熒光定量PCR核酸檢測對于提高HIV病毒篩查準確率，提高臨床輸血安全性等有十分重要的意義。值得將其普及推廣于臨床診斷工作中。

參考文獻

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[5] 楊曉輝， 溫蘭. 一種國產(chǎn)人類免疫缺陷病毒1型核酸定量檢測試劑盒的性能評價[J]. 安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志， 2019， 25（04）： 17-19， 37.

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