支氣管灌洗液miRNA-21、膜聯蛋白Ⅱ檢測對周圍型肺癌患者的診斷效能評估

梁曉君，詹忠明，袁育珺，朱鈺力，歐陽良良

(江西省九江學院附屬醫院檢驗科，江西 九江 332000)

周圍型肺癌是臨床常見的惡性腫瘤，其病灶位于三級支氣管以下、呼吸性細支氣管以上。由于周圍型肺癌較隱蔽，不易被發現，且發現時已晚。盡管現代診療水平不斷上升，但周圍型肺癌的長期生存時間與過去20年相比并無明顯改善。提高肺癌生存期的關鍵手段是早期診斷，miRNA-21異常高表達與多種惡性腫瘤的發生發展密切相關，而腫瘤標志物即膜聯蛋白Ⅱ(Annexin Ⅱ)在肺癌的發生發展及侵襲轉移中發揮著重要作用。所以本研究通過檢測周圍型肺癌患者支氣管灌洗液(BALF)及血清中miRNA-21和膜聯蛋白Ⅱ新型有潛力的腫瘤標記物的表達水平，旨在分析測定腫瘤標志物時BALF標本miRNA-21和膜聯蛋白Ⅱ水平變化對于周圍型肺癌患者及良性肺部病變患者的相關性分析，并進一步探討其對周圍型肺癌患者早期診斷及病情評估的價值，為臨床醫生提供了新的思路和方法。現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：將2018年3月～2019年3月到我院呼吸內科住院及門診進行支氣管鏡檢的患者和到我院進行體檢的健康者作為研究對象。其中存在周圍型肺癌患者38例，將其設為周圍型肺癌組，存在肺良性病變44例，將其設為良性病變組，還有健康體檢者50例，將其設為對照組。周圍型肺癌組男20例，女18例，年齡25～69歲，平均(46.05±12.05)歲；良性病變組男23例，女21例，年齡24～70歲，平均(45.63±11.64)歲]；對照組男23例，女27例，年齡21～64歲，平均(41.63±11.64)歲。本次研究經過本院醫學倫理委員會同意。

1.2納入與排除標準

1.2.1納入標準：①經纖維支氣管鏡、肺活檢或外科手術確診，有明確的組織學依據[1]；②資料完整；③采樣前未接受化療和放療等抗腫瘤治療[2]；④無外傷、骨折、原發性高血壓、糖尿病、冠心病、動脈粥樣硬化等疾病。

1.2.2排除標準：①合并嚴重的其他腫瘤疾病的患者；②合并嚴重的血液疾病的患者[3]；③嚴重的器質性病變；④精神障礙、意識障礙、無法進行正常溝通和交流的患者。

1.3方法：所有研究對象入院之后采集清晨空腹靜脈血5 ml，其中3 ml進行離心處理(4 000 r/min,20 min)，去除上清液之后，將其放置在無菌小塑料瓶之內，放置在-20 ℃的冰箱當中保存，待檢測。另外選擇2ml加入含有7.5%的EDTA二鈉40 μl(抗凝)與抑肽酶40 μl(抑酶)試管當中混合均勻，然后進行離心處理(4 000 r/min,20 min)，取上清液放置在無菌小塑料瓶當中，同樣放置在-20 ℃的冰箱當中保存，待檢測。

支氣管灌洗術以及相關標本的處理，支氣管灌洗術按照ZavalaDC等方法來進行，同時應用纖維支氣管鏡進行操作，將纖維支氣管鏡遠端楔在腫瘤或者其他病變所在段的支氣管開口部位，如病變完全阻塞段支氣管開口，則在鄰近病灶上方支氣管開口部位進行沖洗。良性病變組患者，若胸片沒有明顯異常，則需要對左中葉和左舌葉段進行沖洗，將纖維支氣管鏡楔入，通過37 ℃的滅菌生理鹽水分次注入，每次注入20 ml，共注入5次進行灌洗。然后通過13.3 kPa的負壓吸引。支氣管灌洗平均回收率為47.39%(39%～67%)，支氣管肺泡灌洗經過雙層紗布過濾之后裝入塑料試管中，進行離心處理(4 000 r/min,20 min)，將上清液放置在-20 ℃的冰箱當中等待檢測。另外選擇支氣管灌洗沉淀物涂片檢查癌細胞，支氣管灌洗術操作結束之后再進行活檢、刷檢。

通過westernblot檢測患者肺癌細胞系當中的Annexin Ⅱ水平，通過紫外分光光度計測定miRNA-21水平。

1.4觀察指標：比較三組研究對象的miRNA-21、Annexin Ⅱ水平。

2 結果

周圍型肺癌組的miRNA-21、Annexin Ⅱ水平明顯比良性病變組和對照組高，良性病變組的相關水平明顯高于對照組，相互比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 三組研究對象的CTFRA21-1、Annexin Ⅱ水平比較

3 討論

近些年來開展的支氣管肺泡灌洗(BALF)作為肺部疾病新的檢查手段在臨床上廣泛應用。有研究表明，從腫瘤原發病變部位獲取標本檢測腫瘤標志物，其敏感性高于血清學檢測，如對肺癌組織分泌至肺泡中的物質進行檢測，其診斷敏感性高于血液標本，可對周圍型肺癌的診斷起輔助作用[4]。

通過本文的研究可以得出，周圍型肺癌組的miRNA-21、Annexin Ⅱ水平明顯比良性病變組和對照組高，良性病變組的相關水平明顯高于對照組。由此說明肺癌患者和肺部良性病變患者的miRNA-21、Annexin Ⅱ水平相比存在差異，可為臨床對患者的病情診斷提供科學參考。而miRNAs可以對反義鏈豐富的靶基因進行調控，從而影響惡性腫瘤的發生發展。這提示miRNA 分子在腫瘤發生發展中具有潛在的重要作用。結果提示miRNA-21在包括周圍型肺癌在內的多種腫瘤侵襲轉移中具有重要的作用。Annexin Ⅱ屬于一種腫瘤標志物，在肺癌的發生發展及侵襲轉移中發揮著重要作用。臨床認為Annexin Ⅱ在多種疾病以及癌癥中均有異常表達且與癌細胞的侵襲轉移等生物學行為以及預后密切相關[5]。所以在對肺癌的診斷中將BALF中Annexin Ⅱ作為腫瘤標記物的檢測具有更高的敏感度，將來可作為一種理想的針對周圍型肺癌診斷的腫瘤標記物。

綜上所述，經過支氣管灌洗液、miRNA-21、膜聯蛋白Ⅱ檢測疑似肺癌患者有助于對肺癌患者進行評估，可以鑒別肺癌和良性病變，是有效的診斷策略。