牧場消毒后病原菌篩查及建議*

楊文剛，周玉東，盛 濤*，張九歌

（1.新疆兵團第七師胡楊河市畜牧獸醫(yī)站，新疆 奎屯 833200；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院）

面對當(dāng)前嚴(yán)峻的動物疫病防控形勢，消毒能有效殺滅病原體，切斷動物疫病傳播途徑。但在實際的養(yǎng)殖生產(chǎn)中，養(yǎng)殖場一味地開展消毒工作，往往忽略消毒后病原菌的存在狀況，極易造成疫病的傳播。本研究選取新疆奎屯墾區(qū)2 個規(guī)模奶牛養(yǎng)殖場，通過采集牧場消毒通道、犢牛舍、產(chǎn)房、擠奶廳、養(yǎng)殖圈舍等消毒后環(huán)境樣品，以實驗室PCR 檢測為手段[1]，篩查消毒后牧場飼養(yǎng)環(huán)境中存在的感染病原菌，為牧場降低疫病傳播風(fēng)險，有效開展消毒工作提供參考。

1 檢測情況

1.1 檢測樣品

2020 年12 月17～21 日，按牧場消毒程序消毒后，采集檢測2個集約化牧場環(huán)境樣共41例樣品。

1.2 儀器與試劑

熒光定量PCR 儀（Gentier 96E）、牛奶致病菌DNA 提取試劑盒（深圳易瑞，批號：20090801，規(guī)格50T）、16聯(lián)牛乳房炎病原菌核酸檢測試劑盒（深圳易瑞，批號：20072001，規(guī)格50份/盒）和1.5 mL離心管。

1.3 實驗方法

1.3.1樣本DNA提取

采用牛奶致病菌提取試劑盒提取DNA，依照說明書操作進(jìn)行提取。

1.3.2熒光PCR檢測

采用16聯(lián)牛乳房炎病原菌核酸檢測試劑盒，依照說明書操作進(jìn)行檢測。

2 檢測結(jié)果

經(jīng)檢測，整體檢測過程陰/陽對照結(jié)果符合試劑盒要求，根據(jù)PCR實驗文件Text結(jié)果文檔導(dǎo)出Excel格式結(jié)果，使用軟件分析數(shù)據(jù)后結(jié)果見表1和表2。

表1 集約化1牧場17例樣本統(tǒng)計

表2 集約化2牧場24例樣本統(tǒng)計

檢測結(jié)果表明：集約化1 牧場17 例樣本中共檢出酵母菌12例，腸球菌屬10例，大腸桿菌9例，葡萄球菌屬8 例，化膿隱秘桿菌6 例，β -內(nèi)酰胺酶抗性基因4例，金黃色葡萄球菌1例，牛支原體1例；集約化2牧場24例樣本中共檢出酵母菌9例，大腸桿菌9例，葡萄球菌屬6 例，腸球菌屬6 例，β-內(nèi)酰胺酶抗性基因4例，化膿隱秘桿菌2例。

3 結(jié)果分析

根據(jù)檢測結(jié)果可知，2 個牧場感染類環(huán)境型病原菌主要集中在犢牛舍、產(chǎn)房和奶牛舍，其中：集約化1牧場犢牛舍和產(chǎn)房感染葡萄球菌、大腸桿菌、腸球菌屬和化膿隱秘桿菌較為嚴(yán)重，奶牛舍感染腸球菌屬、大腸桿菌屬和化膿隱秘桿菌較重，奶廳也有葡萄球菌、大腸桿菌屬和化膿隱秘桿菌污染；集約化2牧場犢牛舍和奶牛舍感染大腸桿菌和腸球菌屬較為嚴(yán)重，產(chǎn)房感染葡萄球菌屬較重。

葡萄球菌屬革蘭氏陽性球菌，可通過多種途徑侵入機體，引起化膿性感染。大腸桿菌是短桿菌，革蘭陰性，對幼畜（禽）常引起嚴(yán)重腹瀉和敗血癥。化膿隱秘桿菌是一種兼性厭氧菌，引起牛的流產(chǎn)和乳腺炎等疾病。腸球菌屬革蘭氏陽性，無鞭毛，無芽孢，兼性厭氧，家畜最常見的是本屬菌所致的尿道感染[2]。2 個牧場的多個飼養(yǎng)環(huán)境均有葡萄球菌、大腸桿菌屬、化膿隱秘桿菌和腸球菌屬感染，與前期對這2個牧場抽檢奶牛乳房炎致病菌樣品檢測結(jié)果基本相符，與當(dāng)前2個牧場高發(fā)的犢牛腹瀉和奶牛乳房炎有直接關(guān)聯(lián)性。

4 結(jié)論

牧場各環(huán)境樣品檢測結(jié)果顯示，按牧場消毒程序消毒后的2 個牧場均存在多種病原菌，且以感染類環(huán)境型病原菌：葡萄球菌屬、大腸桿菌、化膿隱秘桿菌等為主，表明牧場原消毒程序消毒效果不理想，這也是犢牛舍、產(chǎn)房、奶牛舍發(fā)生犢牛腹瀉和奶牛乳房炎的主要原因之一。

5 建議

5.1 加強牧場管理

根據(jù)實驗室檢測結(jié)果可知目前牧場感染的主要菌群種類，針對以環(huán)境型病原菌為主的飼養(yǎng)環(huán)境，這2個牧場同屬一個公司管理，在牧場關(guān)鍵消毒點的把控需要加強，以避免犢牛腹瀉和奶牛乳房炎持續(xù)發(fā)病的情況發(fā)生。建議牧場建立一套牧場消毒技術(shù)規(guī)范和效果評價體系，對消毒環(huán)境進(jìn)行科學(xué)的評價，指導(dǎo)牧場各飼養(yǎng)環(huán)境有效開展消毒工作，為牧場健康高效養(yǎng)殖發(fā)展提供保障。

5.2 加強牧場消毒工作，規(guī)范消毒程序

針對牧場飼養(yǎng)環(huán)境存在的致病病原菌，牧場需通過消毒液藥敏實驗，篩選對病原菌較為敏感的消毒劑，如選擇酚類、醛類、鹵素類等，尤其在冬季，液體類消毒液受氣溫影響較大，宜選用堿類與固體粉質(zhì)類2種以上消毒藥品交替使用，可有效加強對環(huán)境的消毒效果，不僅可以防止消毒藥品濫用，降低病原體耐受性，而且可有效防控疫病傳播，降低獸藥的使用及因疫病死淘的經(jīng)濟損失。