皮膚惡性腫瘤中P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表達(dá)情況及相關(guān)性研究

楊 靜，蔡 梅

（昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院皮膚科，云南 昆明 650101）

皮膚惡性腫瘤是一類累及表皮、皮膚附屬器或黑色素細(xì)胞等成分的疾病，主要包括基底細(xì)胞癌（basal cell carcinoma,BCC）、鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma,SCC）、皮膚惡性黑素瘤（cutaneous malignant melanoma,CMM）等。隨著環(huán)境及生活方式的改變國內(nèi)外皮膚惡性腫瘤的發(fā)病人數(shù)均出現(xiàn)了逐年增加的趨勢[1-3]，成為備受世界關(guān)注的公共衛(wèi)生問題。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素參與的復(fù)雜過程，相關(guān)研究表明其主要原因可能是惡性腫瘤細(xì)胞的無限增殖與細(xì)胞凋亡障礙，即細(xì)胞增殖與細(xì)胞凋亡失衡所致，而細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)系統(tǒng)的紊亂又是細(xì)胞增殖凋亡失衡的主要原因[4]，皮膚惡性腫瘤作為最常見的腫瘤之一，其發(fā)生發(fā)展也與細(xì)胞凋亡有關(guān)，從該方面研究皮膚惡性腫瘤具有重要意義。本研究通過檢測皮膚惡性腫瘤組織組織液中的腫瘤凋亡蛋白（P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3）的表達(dá)量及彼此的相關(guān)性，以期為后續(xù)深入研究細(xì)胞凋亡機(jī)制在皮膚惡性腫瘤的作用提供依據(jù)，為皮膚惡性腫瘤的診治提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般材料 病例為2018年12月至2020年12月期間在昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院皮膚科行皮膚外科手術(shù)并進(jìn)行了病損組織病理學(xué)活檢且取得患者知情同意的41例患者。41例病例中病理學(xué)活檢診斷為皮膚惡性腫瘤的共25例（BCC10例、SCC10例、CMM10例），男性13例（52.00%），女性12例（48.00%）；年齡（25～93）歲，平均年齡（62.15±14.50）歲；診斷為皮膚良性腫瘤的8例（瘢痕疙瘩），男性4例（50.00%），女性4例（50.00%），平均 年齡（59.07±10.30）歲；診斷為非皮膚腫瘤的8例（表皮囊腫），男性4例（50.00%），女性4例（50.00%），平均年齡（60.23±6.41）歲。把組織病理學(xué)檢查診斷為皮膚惡性腫瘤的設(shè)為實(shí)驗(yàn)組，診斷為皮膚良性腫瘤的設(shè)為良性對照組，診斷為非皮膚腫瘤的設(shè)為正常對照組。三組患者年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 不同組間人口學(xué)資料比較（±s）

表1 不同組間人口學(xué)資料比較（±s）

注：*為Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，△為卡方檢驗(yàn)。

變量 實(shí)驗(yàn)組（n=25）良性對照組（n=8）正常對照組（n=8）檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量 P年齡（歲）62.15±14.5059.07±10.3060.23±6.41 1.031* 0.597性別（例）男性 13（52.00） 4（50.00） 4（50.00） 0.016△0.992女性 12（48.00） 4（50.00） 4（50.00）

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 病例行手術(shù)切除病損組織后將組織平均分為2份，一份立即倒入4%福爾馬林溶液固定進(jìn)行常規(guī)組織病理學(xué)檢查；另一份即時(shí)裝入-70℃超低溫冰箱保存，待病例全部收集完后每一份標(biāo)本取50mg充分研磨制備成組織勻漿行ELISA檢測腫瘤凋亡蛋白P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表達(dá)量。P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3 ELISA檢 測試劑盒購自美國基因公司，酶標(biāo)儀為BIO-RAD model 550（美國）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3的測定數(shù)據(jù)以（±s）表示，根據(jù)分組采用方差分析比較組間差異，兩兩比較使用SNK法。實(shí)驗(yàn)組內(nèi)P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達(dá)相關(guān)性使用Pearson相關(guān)性分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)均為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同組間P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達(dá)差異 實(shí)驗(yàn)組患者組織勻漿中P53、Survivin、Bcl-2含量明顯高于良性對照組及正常對照組，Bax及Caspase-3含量低于良性對照組及正常對照組，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。良性對照組與正常對照組間P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3的含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同組間P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)差異（±s，pg/ml）

表2 不同組間P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)差異（±s，pg/ml）

注：*為與實(shí)驗(yàn)組比較P＜0.05，#為P＜0.05。

組別 例數(shù) P53 Survivin Bcl-2 Bax Caspase-3實(shí)驗(yàn)組 25 4 924.25±327.20 2 405.76±410.09 409.05±59.30 17.04±1.59 158.85±17.02良性對照組 8 4 536.95±306.92* 1 941.84±204.57* 289.96±35.86* 21.88±2.03* 175.74±10.64*正常對照組 8 4 247.28±458.22* 1 892.57±228.70* 327.40±55.75* 20.78±2.92* 176.66±16.36*F— 6.598 15.017 12.563 12.488 3.437 P—＜0.001# ＜0.001# ＜0.001# ＜0.001# 0.018#

2.2 實(shí)驗(yàn)組不同腫瘤P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達(dá)差異 實(shí)驗(yàn)組的25例病例中，按照疾病診斷分為BCC組（10例），SCC組（10例）及CMM組（5例），CMM組的Survivin、Bcl-2含量高于BCC組及SCC組，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而BCC組及SCC組的Survivin、Bcl-2含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，三組間的P53、Bax、Caspase-3含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。

表3 實(shí)驗(yàn)組不同腫瘤P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達(dá)差異（±s，pg/ml）

表3 實(shí)驗(yàn)組不同腫瘤P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達(dá)差異（±s，pg/ml）

注：*為與BCC組比較P＜0.05，△為與SCC組比較P＜0.05，#為P＜0.05。

組別 例數(shù) P53 Survivin Bcl-2 Bax Caspase-3 BCC 10 4 823.53±244.52 2 154.75±318.57 383.97±52.27 17.55±1.82 153.20±18.67 SCC 10 4 958.14±413.54 2 389.65±341.53 404.75±62.43 17.10±1.42 162.58±14.33 CMM 5 5 056.91±269.87 2 939.98±58.06*△ 467.79±15.79*△ 15.86±0.93 162.71±18.96 F—0.933 11.462 4.303 2.062 0.912 P—0.408 ＜0.001# 0.026# 0.151 0.416

2.3 實(shí)驗(yàn)組P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達(dá)相關(guān)性 實(shí)驗(yàn)組的P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)均無相關(guān)性，P＞0.05。

3 討論

細(xì)胞凋亡是一種由凋亡相關(guān)蛋白調(diào)控的程序化死亡，根據(jù)細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制將細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白分為促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白，當(dāng)細(xì)胞抗凋亡程序被激活和（或）促凋亡程序受抑制，該細(xì)胞將不能凋亡而長期存活，相關(guān)研究表明細(xì)胞凋亡與腫瘤發(fā)生關(guān)系密切[5]。本研究納入的P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3均為重要的細(xì)胞凋亡調(diào)控蛋白。

P53蛋白是重要的凋亡調(diào)蛋白，分為野生型和突變型，野生型P53蛋白是目前最為明確的腫瘤抑制蛋白，但同時(shí)在超過50%的惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)P53基因發(fā)生突變，并導(dǎo)致該基因產(chǎn)生的P53蛋白失去了對細(xì)胞生長、凋亡和DNA修復(fù)的調(diào)控作用，因而突變型P53蛋白也被視作抗凋亡蛋白，在腫瘤組織中呈現(xiàn)出高表達(dá)，且表達(dá)量越高腫瘤惡性增殖能力越強(qiáng)[6-7]，本研究發(fā)現(xiàn)與對照組相比P53蛋白在皮膚惡性腫瘤組呈現(xiàn)出高表達(dá)，與前述觀點(diǎn)一致；但在皮膚惡性腫瘤中，惡性程度較高的CMM與惡性程度相對較低的SCC及BCC中P53蛋白表達(dá)無明顯差異，與前述結(jié)果存在差異，造成這種差異的原因可能是因?yàn)楸狙芯考{入樣本相對較少，后續(xù)還需要更大樣本及更深入的研究，探討相關(guān)原因。Survivin蛋白也稱為生存蛋白，是抗凋亡蛋白家族的新成員，于二十世紀(jì)末被發(fā)現(xiàn)，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，高表達(dá)于絕大多數(shù)腫瘤組織[8]，本研究也支持上述觀點(diǎn)，該蛋白在皮膚惡性腫瘤組呈現(xiàn)出高表達(dá)，且腫瘤惡性程度越高表達(dá)越活躍。Bcl-2蛋白，也稱B細(xì)胞淋巴細(xì)胞瘤/白血病-2蛋白，可以明顯抑制細(xì)胞凋亡，在腫瘤細(xì)胞凋亡研究中備受重視，本研究發(fā)現(xiàn)該蛋白在皮膚惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)出高表達(dá)，可能與其主要功能是延長細(xì)胞壽命、抑制細(xì)胞凋亡[9]，同時(shí)其表達(dá)能促使腫瘤細(xì)胞的增殖相關(guān)[10]，同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)皮膚腫瘤惡性程度越高其表達(dá)越活躍。

Bax蛋白與Bcl-2蛋白具有高度的同源性，但發(fā)揮了截然相反的功能[11]，本研究發(fā)結(jié)果支持了上述觀點(diǎn)，作為一種促凋亡蛋白，Bax蛋白在皮膚惡性腫瘤中表達(dá)量更低。Caspase-3蛋白為Caspase家族在細(xì)胞凋亡通路中一個(gè)最主要的凋亡蛋白，是介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的重要效應(yīng)因子，當(dāng)Caspase-3蛋白激活時(shí)，其下游便呈現(xiàn)出一系列級聯(lián)反應(yīng)，使細(xì)胞凋亡不能避免，相關(guān)研究指出，Caspase-3可介導(dǎo)多數(shù)細(xì)胞凋亡因子引起的細(xì)胞凋亡[12]，本研究也得出相同結(jié)論，作為一種促凋亡蛋白，Caspase-3蛋白在皮膚惡性腫瘤中也出現(xiàn)了表達(dá)量更低的情況，細(xì)胞凋亡失衡可能是皮膚惡性腫瘤發(fā)病的重要機(jī)制，后續(xù)還需開展更深入的研究。

綜上所述，皮膚惡性腫瘤組織中抗凋亡蛋白P53、Survivin、Bcl-2表達(dá)量上調(diào)，促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表達(dá)量下調(diào)，抗凋亡蛋白Survivin、Bcl-2表達(dá)量在惡性程度更高的CMM中表達(dá)上調(diào)更明顯，這種細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)系統(tǒng)的紊亂可能使腫瘤細(xì)胞逃避正常的細(xì)胞凋亡機(jī)制，實(shí)現(xiàn)異常分化增殖從而導(dǎo)致皮膚惡性腫瘤的形成和發(fā)展，可能是皮膚惡性腫瘤重要的發(fā)病機(jī)制之一，為后續(xù)利用細(xì)胞凋亡機(jī)制對皮膚惡性腫瘤進(jìn)行診斷、治療等研究提供了新的線索和思路。但同時(shí)我們也要認(rèn)識到皮膚惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素、多步驟及多階段共同參與的復(fù)雜過程，后續(xù)還應(yīng)進(jìn)行更深入的研究，闡明相關(guān)機(jī)制。