超高效液相-串聯質譜法篩查食品中的蘇丹紅

陳英

摘 要：運用超高效液相-串聯質譜法（UPLC-MS/MS）同時測定辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血中的蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ。通過優化萃取試劑、樣品基質效應的消除、色譜及質譜條件等參數，檢測方法的靈敏度和適用性。在電噴霧離子源正離子模式下，多反應監測（MRM）方式檢測，外標法定量。蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ線性關系良好，相關系數（r2）均大于0.999，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ在3個添加水平下，回收率范圍為85.1%～104.9%，標準偏差（RSD）均小于6.2%，檢出限和定量限為1.0～6.0?g/kg。本方法處理過程簡單、分析時間短、準確度高，適用于辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋和鴨血中的蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ檢測，可用于食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的篩查。

關鍵詞：超高效液相-串聯質譜法;蘇丹紅;非法添加

蘇丹紅共有4個組分，為蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ，是一種紅色顆粒或粉末狀的紅色染料常用于工業上色如鞋、地板等的增光，因為有致癌作用危害人體健康，我國和歐盟都禁止其用于食品生產[1]。市面上有一些不法分子為了產品成色漂亮好出售，依然違法添加工業染料。

目前，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ檢測方法主要有薄層色譜法[2]、紫外可見分光光度法[3]、近紅外顯微成像光譜法[4]、液相色譜法[5-6]、液相色譜-質譜聯用法[7-8]和化學發光分析法[9]，這些方法前處理復雜、試劑用量大、檢測周期長、準確度不高，不適應實際工作中遇到的多種復雜基質中蘇丹紅的篩查測定。本試驗通過對色譜條件和質譜參數的研究、優化，建立了高效液相色譜-串聯質譜同時分析蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的方法。本方法前處理簡單，7 min即可同時測出蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速簡單，結果準確，可以用于食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的篩查。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

液相色譜-串聯質譜聯用儀：Qtrap 5500三重四極桿串聯質譜儀（美國AB SCIEX公司）;配有電噴霧離子源（ESI）;LC20A超高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）;MS1003S電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）;Milli-Q超純水儀（美國Millipore公司）;MFV-24智能氮吹儀（廣州德泰儀器科技有限公司）。

1.2 藥品及試劑

實驗用蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標準品，純度均大于95%，購自Dr.Ehrenstorfer GmbH;甲醇、乙腈（色譜純，美國Mreda公司）;甲酸（色譜純，美國Fisher Scientific公司）;水為超純水。

樣品辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血均為市售。

1.3 標準溶液的配制

分別各精密量取適量標準溶液，加乙腈制成每1 mL中各約含1.0 mg的溶液，為標準儲備液密封，于4 ℃保存。分別量取上述蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標準儲備液適量，用甲醇稀釋成約0.5 mg/mL的混合對照品儲備液。精密量取混合對照品儲備液適量，加空白樣品基質提取液配制系列混合基質標準溶液。

1.4 樣品處理方法

提取。取待測試樣適量混勻，研細，稱取粉末5.0 g（準確至0.001 g），置50 mLpvc離心管中，加15 mL乙腈超聲提取（功率300 W，頻率50 kHz）30 min，以6000 r/min離心5 min，取上清有機液，殘渣加15 mL乙腈復提一次，合并兩次有機液于雞心瓶，旋轉蒸發近干，備用。

凈化。將上述提取的樣品用1 mL的乙腈溶解，混勻，轉移到氧化鋁層析柱上，用正己烷洗脫，氮吹濃縮置近干，1 mL乙腈復溶，過0.22 μm濾膜，備用。

1.5 色譜條件和質譜條件

色譜柱：Waters UPLC BEH柱（3.0 ?m，2.1mm×100 mm）;柱溫：35 ℃;進樣量：5 μL;流動相：A相為0.1%甲酸水溶液，B相為乙腈溶液，進行梯度洗脫，流速：0.6 mL/min。

電離源模式：電噴霧離子化;電離源極性：正離子模式;霧化氣：氮氣;掃描方式：正離子掃描;檢測方式：多反應監測（MRM）;電噴霧電壓：4000 V;離子源溫度：150 ℃、碰撞電壓（CE）為20～30 V、去簇電壓（DP）30～40 V。具體待測物的準確質量數及碎片離子為：蘇丹紅Ⅰ249.1/156.1，249.1/232.2;蘇丹紅Ⅱ277.3/156.1，277.3/160.1;蘇丹紅Ⅲ253.2/156.1，253.2/197.0;蘇丹紅Ⅳ381.1/224.3，381.1/275.8。

2 結果和分析

2.1 質譜方法的建立

將蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標準品儲備液分別稀釋成濃度約為200 ?g/L，按照上述色譜和質譜條件進樣檢測，在7 min內蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ能得到很好分離，方法條件滿足辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血中的蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的測定。

2.2 標準曲線和檢出限

在上述本實驗色譜和質譜條件下，取1.3混合系列標準溶液0～500 μg/L，繪制標準曲線，以定量離子峰面積y對質量濃度x（μg/L）做線性回歸，得到蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的線性方程和相關系數。蘇丹紅Ⅰ：y=1 271.7x+3 854.8，蘇丹紅Ⅱ：y=1 540.1x+4 678.5，蘇丹紅Ⅲ：y=1 383.2x+2 432.3，蘇丹紅Ⅳ：y=1 262.1x+2 743.3，r2均大于等于0.999。將混合系列溶液的最低濃度點溶液稀釋后進樣分析，測定信噪比，取信噪比約為3的溶液濃度作為定性檢測限，信噪比約為10的溶液濃度作為定量檢測限。檢出限和定量限為1.0～6.0 ?g/kg。

2.3 精密度和重復性試驗

按本實驗條件，在5種不同基質樣品中進行3個添加水平（0.1 ?g/mL、0.2 ?g/mL、0.5 ?g/mL）的加標回收實驗，每個添加水平平行實驗6次。蘇丹紅Ⅰ的平均回收率為89.3%、93.5%、91.9%;蘇丹紅Ⅱ的平均回收率為92.2%、91.4%、104.9%;蘇丹紅Ⅲ的平均回收率為87.9%、88.0%、90.5%;蘇丹紅Ⅳ的平均回收率為85.1%、86.9%、91.5%，平均相對標準偏差分別為4.05%、3.2%、6.18%，表明該方法具有良好的精密度和準確度。可滿足食品中蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的分析要求。

2.4 樣品測定

應用建立的本方法，對市場銷售的50批次辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血樣品進行了篩查，所測樣品中均未檢出蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ。

3 結論

本研究建立的UPLC-MS/MS高分辨率質譜檢測方法，可同時測定食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ，樣品沒有復雜的處理過程，操作簡便，可在7 min內完成整個分析，提高了檢驗效率。采用液相色譜-串聯質譜的MRM模式進行定性和定量檢測，靈敏度、準確度高，適用于食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的檢測。

參考文獻

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