田間條件下啶氧菌酯在小麥中殘留及長期膳食攝入風險評估

馮義志，卞艷麗，張愛娟，潘金菊，王曉玉，梁林

（山東省農藥科學研究院／山東省化學農藥重點實驗室，山東 濟南 250033）

啶氧菌酯（picoxystrobin）是一種內吸性甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，防治對象廣譜，主要用于防治麥類葉面病害如葉枯病、葉銹病、穎枯病、褐斑病、白粉病等，與其他甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑相比，啶氧菌酯對座枝孢屬（Septoria）、絲核菌屬（Rhizoctonia）等導致的小麥病害有更強的治療效果［1，2］。在我國，啶氧菌酯還用于水稻、花生、番茄、葡萄等多種作物的病害防治［3］，其使用范圍和使用量正逐步上升。然而，作物使用農藥后產生的農藥殘留會對人體和非靶標生物產生一定影響。研究證明，啶氧菌酯原藥對斑馬魚具有很高的毒性風險［4，5］；對擬澳洲赤眼蜂成蜂危害很大，為高風險藥劑［6］；JMPR報告指出［7］，啶氧菌酯對大鼠具有高急性毒性（LC50＝0.11 mg／L），對家兔眼睛具有中度刺激性。還有研究表明，啶氧菌酯能夠抑制啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的生長［8］，對土壤微生物的呼吸作用及土壤微生物結構具有不可逆轉的影響［9］。

目前，有關啶氧菌酯在農作物中殘留消解及膳食風險評估研究已有較多的報道，主要涉及作物 有 黃 瓜［2，10］、西 瓜［11］、葡 萄［12］、香 蕉［13］、花生［14］、甜瓜［15］、辣椒［16］、草莓［17］和茶葉［18］。而有關啶氧菌酯在小麥中殘留及膳食風險評估的研究尚未見報道。本試驗采用QuEChERS進行前處理，采用液質聯用法對麥粒和秸稈中啶氧菌酯進檢測，遵照CAC通行做法開展啶氧菌酯在小麥中的殘留對中國人攝入風險的評估，為啶氧菌酯在小麥上的合理使用提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

供試農藥：19%啶氧·丙環唑微乳劑（啶氧菌酯7%、丙環唑12%）；啶氧菌酯標準品（純度為98.5%），購自沈陽化工研究院有限公司農藥檢驗實驗室；氯化鈉（分析純）、甲酸（色譜純），購自國藥集團化學試劑有限公司；乙腈（色譜純），購自Thermo Fisher Scientific（Waltham，MA，USA），C18填料（40～60μm），購自天津博納艾杰爾科技有限公司；有機濾器（0.22μm），購自美瑞泰克科技有限公司（天津）。純凈水，購自廣州屈臣氏食品飲料有限公司。

1.2 溶液配制

準確稱取啶氧菌酯標準品0.0265 g，用乙腈定容至25 mL，配制成啶氧菌酯1 044 mg／L的標準溶液母液；取適量啶氧菌酯母液用乙腈稀釋配得100 mg／L標準溶液，分別用乙腈、小麥粒和秸稈空白基質梯度稀至5、1、0.2、0.05、0.01 mg／L。所有標準溶液使用前均置－18℃冰柜冷凍保存。

1.3 檢測條件

液相色譜質譜聯用儀（LCMS－8030）配ESI源；色譜柱：Shim－pack XR－ODSⅡ（75 mm×2.0 mm，2.2μm）；進樣體積：2μL；加熱塊溫度：400℃；干燥氣溫度：250℃；干燥氣流量：15 L／min；霧化氣流量：3 L／min；反應氣：氬氣；多反應監測模式采集；啶氧菌酯母離子：368.05 m／z；子離子：205.1 m／z（定量）、碰撞能量17 eV、145.1 m／z（定性），碰撞能量5 eV。

表1 流動相梯度洗脫條件

1.4 田間試驗

試驗時間：2020年。按照農業農村部農藥檢定所發布的《農藥登記殘留試驗區域指南》［19］選擇試驗地點，分別為：內蒙古自治區呼和浩特市、山西省長治市、甘肅省天水市、河北省石家莊市、山東省濟南市、山東省青島市、河南省新鄉市、河南省商丘市、安徽省合肥市、上海市閔行區、湖南省長沙市、四川省成都市。按照《農作物中農藥殘留試驗準則》［20］要求設置處理小區和空白對照小區，小區面積不小于100 m2，小區間設保護帶。試驗劑量：73.5 g a.i.／hm2，2次施藥，施藥間隔7 d，距末次施藥28 d和35 d采集小麥籽粒和秸稈樣品。

樣本采集與制備：在小區中用隨機方式剪取土表以上的全株用于制備秸稈樣品、剪取麥穗用于制備小麥樣品，采樣點不少于12點，采樣量不少于1 kg。處理小區分別采集2個獨立樣品，對照小區采集1個樣品。地頭或邊緣0.5 m內不采樣。將秸稈樣品剪成1 cm以下的小段，混勻后，用四分法分取100 g；將麥穗脫粒后充分混勻，取麥粒100 g，均裝入可封口的樣品袋中，貼好標簽后立即放入－18℃冰柜中待測。

1.5 樣品處理

將樣品用食品調理儀粉碎，準確稱取麥粒樣品10.0 g或秸稈樣品2.0 g至50 mL具塞塑料離心管內，加入0.1%甲酸水溶液10 mL和乙腈10 mL，渦旋提取1 min，加入6 g氯化鈉，劇烈振蕩1 min；4 000 r／min離心5 min；取上清液1 mL至加有100 mg C18填料的2 mL離心管中，渦旋30 s，過0.22μm濾膜，待測。

1.6 方法有效性評價

分別用乙腈、麥粒和秸稈空白基質梯度稀釋配制5、1、0.2、0.05、0.01 mg／L啶氧菌酯標準溶液，以溶液質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制工作曲線，考察線性相關性及基質效應。通過在空白麥粒和秸稈樣品中添加啶氧菌酯標準溶液（麥粒添加水平為0.01、0.07、0.7 mg／kg，秸稈添加水平為0.05、0.5、5 mg／kg，每個水平5次重復），計算回收率及相對標準偏差，分別用于評價準確度和精密度。以最低添加濃度作為定量限。

1.7 計算公式

膳食風險評估按下列公式計算：

式中，NEDI為國家估算每日攝入量；FI為食物攝入量；STMR為試驗殘留中值；bw為中國居民的平均體重；ADI為每日允許攝入量；RQ為風險熵數，RQ＞1表示對人類健康的風險不能接受［21］。

基質效應按下面公式計算［22］：

式中，ME為基質效應；A基質為基質標樣斜率；A溶劑為溶劑標樣斜率。

2 結果與分析

2.1 方法有效性評價

2.1.1 線性相關性及定量限 結果（表2）表明，啶氧菌酯在0.01～5.00 mg／L范圍內在各基質中均呈良好的線性關系，相關系數（r）都在0.9909及以上。啶氧菌酯在麥粒和秸稈中的定量限分別為0.01 mg／kg和0.05 mg／kg。

2.1.2 基質效應 按照公式（3）計算啶氧菌酯在小麥各基質中基質效應。由表2可知，啶氧菌酯在麥粒和秸稈中基質效應有差異，其中麥粒中基質效應較弱，而秸稈中基質效應較為明顯。本研究中秸稈采用基質匹配標準溶液校正消除基質效應影響。

表2 啶氧菌酯的回歸方程、相關系數、基質效應和定量限

2.1.3 添加回收試驗 通過在麥粒和秸稈中添加已知濃度的啶氧菌酯進行回收率試驗，評價方法準確度和精密度。結果（表3）表明：啶氧菌酯在麥粒和秸稈中的平均回收率分別為96.4%～106.4%和96.2%～103.1%，相對標準偏差分別為1%～2%和2%～3%，符合《農作物中農藥殘留試驗準則》要求［20］。

表3 啶氧菌酯在小麥基質中的添加回收率及相對標準偏差

2.2 最終殘留試驗

結果（表4）表明：距末次施藥后28 d和35d采集秸稈中啶氧菌酯殘留中值分別為0.070 mg／kg和0.050 mg／kg；殘留最大值分別為1.40 mg／kg和0.61 mg／kg。末次施藥后28 d和35d麥粒中啶氧菌酯殘留量均低于方法定量限（0.01 mg／kg）。目前中國食品安全國家標準規定啶氧菌酯在小麥中的最大殘留限量為0.07 mg／kg［23］，尚未規定秸稈中啶氧菌酯的最大殘留限量。國際食品法典委員會（CAC）［24］規定啶氧菌酯在小麥秸稈中最大殘留限量為7 mg／kg。本試驗中不同采收間隔的麥粒和秸稈樣品中啶氧菌酯殘留量分別低于我國和CAC制定的限量標準。

表4 啶氧菌酯在麥粒和秸稈中最終殘留

2.3 膳食風險評估

膳食攝入風險評估是對居民因膳食攝入帶來的農藥殘留對身體健康造成的風險進行評價，包括長期和短期膳食攝入風險評估。其中長期膳食攝入風險評估是依據日膳食結構數據，結合規范殘留試驗中值或已制定的最大殘留限量，估算每日攝入量，并與毒理學評估推薦的每日允許攝入量進行比較。目前，啶氧菌酯在中國已進行了水稻、小麥、花生、番茄、辣椒、黃瓜、棗、葡萄、芒果、香蕉、西瓜、茶葉、鐵皮石斛等13種作物登記［3］。根據中國健康與營養調查總結報告數據，將所有登記作物進行膳食分類和攝入量匯總。膳食風險評估結果表明：啶氧菌酯在所有登記作物中風險商數RQ值為0.067，低于1。因此，啶氧菌酯在小麥中的殘留量對我國一般人群健康的影響是在一個可接受的風險水平。考慮到小麥秸稈可能用于動物飼料，因此應結合我國實際情況，對動物的秸稈攝入量進行安全評估，制定啶氧菌酯在小麥秸稈中的最大殘留限量。

3 討論與結論

本研究建立了采用QuEChERS進行前處理、LC－MS／MS測定麥粒和秸稈中啶氧菌酯殘留量的分析方法。該方法的線性及準確度、精密度均滿足殘留檢測要求。啶氧菌酯在麥粒和秸稈中最低檢測濃度分別為0.01 mg／kg和0.05 mg／kg。對小麥中啶氧菌酯的膳食攝入風險進行評估，結果表明：小麥中啶氧菌酯的殘留量產生風險極低，不會對我國一般人群健康產生影響。

目前，我國可供查詢的食物分類十分有限，僅為21種，相比WHO、美國、歐盟和中國香港還有較大差距［25］。因此，為了更合理地進行膳食暴露評估，迫切需要建立更加準確的膳食消費量數據庫，進一步完善我國居民的營養與健康狀況調查監測工作，以提供更加科學的膳食消費量數據。本研究僅對供試農藥19%啶氧·丙環唑微乳劑中的啶氧菌酯進行了殘留和膳食風險的研究，而丙環唑在小麥中的膳食攝入風險還需做進一步研究。