膠乳免疫比濁法C 反應蛋白測定試劑盒的準確度性能驗證

黃燕虹（第一作者，通信作者），張旭（第一作者），潘曉芳，朱秀霞

廣東省醫療器械質量監督檢驗所綜合檢驗四室 （廣東廣州 510663）

C 反應蛋白（C reactive protein，CRP）是由5個相同的亞單位組成的α 球蛋白，由肝細胞合成，在胎兒期產生。健康人體的血清中CRP 含量很低，但在細菌感染、惡性腫瘤、創傷、冠心病等發生后其含量會急劇升高，并在24～48 h 達到峰值，CRP 含量可反映炎癥反應的劇烈程度，其水平與炎癥嚴重程度成正相關，炎癥治愈后含量會顯著降低，濃度在一周內可恢復至正常水平。CRP 雖不能作為特定疾病的檢測指標，但其對于各種炎癥、組織損傷和細菌感染過程以及疾病恢復期的監測與病情評估均具有重要的價值[1-5]。

近年來，CRP 指標的檢測已成為醫學檢驗的一種常規手段，被應用于臨床各領域，而評估CRP 測定試劑盒的性能有利于保障CRP 測定試劑盒檢測結果的有效性和準確性。本研究旨在探討不同企業的CRP 測定試劑盒在符合企業自身技術要求的前提下，準確度性能是否符合YY/T 1513-2017《C 反應蛋白測定試劑盒》[6]行業標準要求，現報道如下。

1 材料和方法

1.1 儀器和試劑

儀器：全自動生化分析儀（Beckman Coulter，Inc.，AU680型）。

CRP測定試劑盒：來自14家企業，本研究中各企業名稱分別以字母A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N表示，所有試劑盒采用的檢測方法為膠乳增強免疫比濁法、膠乳免疫比濁法或免疫比濁法，試劑盒均由R1和R2組成。

1.2 檢測樣本

檢測樣本包括低、中、高3個濃度。高濃度樣本直接采用的是國際標準物質ERM?-DA474/IFCC 的原液，其靶值濃度為41.2 mg/L；低、中濃度樣本的濃度分別為10.3、20.6 mg/L，均由高濃度樣本稀釋而來。

1.3 檢測方法

根據行業標準YY/T 1513-2017中準確度的要求，采用AU680全自動生化分析儀和14家企業的試劑盒，嚴格按照儀器及試劑盒的操作要求分別對3個濃度的準確度樣本進行檢測，每個濃度分別檢測3次，并計算3次測量結果的相對偏差（relative deviation，RD），RD=（檢測值-標示值）/標示值×100%。

2 準確度性能驗證結果

14家企業試劑盒對高濃度樣本檢測結果的RD均符合行業標準YY/T 1513-2017的要求，即在-15%～15%之間；11家企業試劑盒對中濃度樣本檢測結果的RD符合行業標準要求，3家企業|RD|在15%～20%之間；只有8家企業試劑盒對低濃度樣本檢測結果的RD符合行業標準要求，而6家不符合行業標準要求，其中，3家企業|RD|在15%～20%之間，3家企業|RD|>20%，見表1～3。

表1 14家企業高濃度樣本準確度實驗結果

表2 14家企業中濃度樣本準確度實驗結果

3 原因分析

分析準確度實驗結果發現，不同企業檢測國際標準物質ERM?-DA474/IFCC 的結果存在較大差異，部分企業的準確度測試結果甚至不符合行業標準YY/T 1513-2017的要求，主要原因如下。（1）部分企業的產品技術要求達不到行業標準的要求：行業標準要求采用RD法，而部分企業采用的是比對實驗的方法；行業標準要求分別計算3次結果的RD，而部分企業則計算的是3次結果平均值的相對偏差，未嚴格按照行業標準的要求執行；行業標準要求合理設置2 ～3個濃度進行實驗，而部分企業只檢測了1個濃度。（2）不同企業自身的溯源體系不同：從結果分析，在測定濃度為10.3 mg/L 的國際標準物質時，6批結果均不符合行業標準的相應要求，其中有5批在定標時采用的是企業自身提供的校準品，表明溯源體系對實驗結果的準確度具有一定影響；國際標準物質的賦值一般選擇該試劑盒產品所對應的國際公認的金標準方法進行，但在實際注冊過程中，每個廠家都會用自己內部的溯源過程對準確度參考品進行賦值，即使最高一級的溯源是國際標準品，但最終溯源至準確度參考品時，整個溯源鏈傳遞越長，引入的不確定度便越大，導致準確度參考品的值越不準確，這也可以解釋為什么使用企業提供的準確度參考品用來做實驗時，RD符合要求，但測試國際標準物質的結果卻較差。

表3 14家企業低濃度樣本準確度實驗結果

4 小結

隨著CRP 臨床應用的日趨廣泛，十分必要提高CRP 檢測的準確度。14家企業CRP 測定試劑盒的準確度性能驗證結果表明，企業在產品注冊過程中的檢驗方法和要求與行業標準要求不一致，未嚴格按照行業標準要求進行注冊檢驗。

為了解決不同廠家試劑盒檢驗結果不統一的問題，建議企業和同行從以下4點進行改進：（1）相關標準委員會可開展國家標準及行業標準的相關培訓，深刻解讀和討論標準內容，便于企業更好地理解并執行相關標準的具體要求；（2）各地醫療器械技術審評部門應加強對相關標準的學習，統一審評尺度；（3）生產企業應高度關注相關行業標準的更新，并及時對產品技術要求做出相應的調整；（4）生產企業可通過參加原衛生部臨檢中心室間質評等方式進一步確證該試劑體系的臨床符合率[6-8]。

本研究尚存在不足之處，首先，所分析試劑盒數量較少；其次，所選用的國際標準品較為單一，未引入其他國際公認參考品和國家標準品，后續還需更加深入廣泛地研究予以進一步驗證。