禽流感免疫抗體檢測分析

陳 霞 陳銀基 黃福林

1.江蘇省南京市高淳區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局動物疫病預(yù)防控制中心，南京211313；2.南京財(cái)經(jīng)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，南京210038

禽流行性感冒（簡稱禽流感）是由禽流感病毒引起的家禽和野禽的一種從呼吸系統(tǒng)疾病到全身性敗血癥等多種癥狀的綜合病癥。在抗原特性相同的病毒中，有毒力強(qiáng)的毒株，也有毒力弱的毒株。禽流感臨床表現(xiàn)為精神沉郁，羽毛蓬亂，食欲減退或廢絕，輕重度不一的呼吸道感染，產(chǎn)蛋下降甚至嚴(yán)重致死性疾病[1]，對家禽養(yǎng)殖業(yè)危害很大。

由于本病的臨床癥狀和病理變化的差異大，所以確診需要依靠病毒的分離鑒定和血清學(xué)試驗(yàn)。該病以預(yù)防為主，是國家強(qiáng)制免疫的疾病，對活禽、觀賞鳥類、野禽應(yīng)當(dāng)進(jìn)行嚴(yán)格執(zhí)行免疫程序。2018年，南京市高淳區(qū)采用的是二價苗（H5N1Re-8 株和H7N9H7Re-1 株），從2019年開始，使用三價苗（H5N1Re-11+12 株，H7N9H7Re-2 株），以下簡稱H5+H7 三價苗，進(jìn)行家禽免疫。隨著農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的不斷調(diào)整，禽養(yǎng)殖業(yè)逐年增加，規(guī)?；u場增多，仍有部分雞場及散養(yǎng)戶采用放養(yǎng)的方式進(jìn)行養(yǎng)殖。筆者對南京市高淳區(qū)2018-2020年春秋兩季各養(yǎng)殖場進(jìn)行采樣和監(jiān)測，現(xiàn)將不同飼養(yǎng)方式下禽流感免疫監(jiān)測效果作出對比，以及時掌握流行病學(xué)動態(tài)，查漏補(bǔ)缺。

1 材料與方法

1.1 免疫疫苗

2018年采樣禽流感（H5+H7）二價滅活苗免疫（乾元浩生物股份有限公司）；2019-2020年采樣重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活苗免疫（乾元浩生物股份有限公司）。

1.2 血清來源

隨機(jī)抽取春秋兩季免疫后的8 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的家禽（雞和鴨）血樣，重點(diǎn)抽查免疫21 d 后的家禽。用采血器采集翅靜脈血，全血靜置后，檢查組帶回區(qū)動物疫控中心實(shí)驗(yàn)室集中監(jiān)測。籠養(yǎng)方式（規(guī)模場）的每戶采樣30 份以上，放養(yǎng)方式（散戶和部分規(guī)模場）的每戶采樣不少于20 份，每個樣品采血量至少2 mL。

1.3 主要試劑

1%雞紅細(xì)胞懸液（自配）、禽流感H5-Re8 抗原、禽流感H5-Re11 抗原、禽流感H7N9(Re-1)抗原、禽流感H7N9 (Re-2)抗原（均由哈爾濱國生生物科技有限公司提供，效價為1∶2 048）。

1.4 主要耗材及儀器

96 孔微量反應(yīng)板、1～100 μL 移液器、滴頭、微型振蕩器、恒溫箱、離心機(jī)。

1.5 方 法

1）檢測方法。用血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗(yàn)方法進(jìn)行，試驗(yàn)依據(jù)是《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936-2003）。

2）結(jié)果判定。以完全抑制4 個單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI 滴度。HI 效價≤3 log2 判為陰性；HI≥4 log2 判為陽性，即抗體水平合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同飼養(yǎng)方式對禽流感H5 和H7 亞型免疫抗體監(jiān)測效果的對比

由表1可知，2018-2020年對高淳區(qū)內(nèi)家禽禽流感H5 和H7 亞型抗體進(jìn)行監(jiān)測，每年的平均合格率均在80%以上，說明近3年禽流感整體免疫效果理想。H5 抗體平均合格率分別為85.64%、82.28%、86.50%，達(dá)到國家規(guī)定免疫合格率70%標(biāo)準(zhǔn)，H7 抗體水平具有相同的趨勢。

表1 2018-2020年高淳區(qū)家禽采樣情況份

由表2可知，籠養(yǎng)方式的家禽禽流感（H5+H7）抗體合格率均在90%以上?；\養(yǎng)方式的家禽H5 和H7 亞型抗體合格率在2020年達(dá)到最高，分別為99.16%、99.44%。這是因?yàn)橐?guī)模場采用籠養(yǎng)的方式，自行免疫，免疫人員經(jīng)過專門培訓(xùn)且有多年管理經(jīng)驗(yàn)、重視免疫工作，籠養(yǎng)方式便于開展免疫工作，家禽一般經(jīng)過2 次免疫以達(dá)到免疫保護(hù)力，少數(shù)免疫效價低可能是因?yàn)轶w質(zhì)差[2]或接種疫苗后未能獲得免疫的原因[3]。說明2 次免疫對家禽養(yǎng)殖的重要性，這與張啟建[4]等觀點(diǎn)一致。

由表2可知，2018-2020年，放養(yǎng)家禽禽流感抗體合格率在70%左右，處于合格的臨界值，2020年略有提高，H5 亞型抗體合格率達(dá)到73.84%，但是仍較低?？赡艿脑蛴校?）因?yàn)榉硼B(yǎng)家禽2 次免疫有一定的難度，捕抓較困難，免疫時如果不做好標(biāo)記容易混淆，不能保證每只都能免疫到；2）散養(yǎng)戶一般采用放養(yǎng)的方式，散養(yǎng)戶的家禽是由本地村防員統(tǒng)一時間集中免疫，由于村防員專業(yè)水平和責(zé)任感所限，不能嚴(yán)格按照免疫程序進(jìn)行免疫。所以禽流感抗體水平明顯低于籠養(yǎng)家禽, 最終影響了整體免疫抗體水平。

2.2 不同年份抗體合格率

由圖1和圖2可知，2018-2020年春秋防檢測的H5 和H7 亞型禽流感抗體合格率在2019年略有降低，這是因?yàn)?019年開始使用了三價苗，但2020年抗體合格率明顯上升，說明已適應(yīng)三價苗的使用。近3年來，春秋防的免疫抗體平均合格率均達(dá)到國家規(guī)定的70%以上標(biāo)準(zhǔn)，且合格率在2020年達(dá)到最高，這與疫苗的正確保存，動物防疫員的防控意識、技術(shù)水平都有所提高，與當(dāng)?shù)貏游锓酪吖芾聿块T對免疫工作的重視和嚴(yán)格監(jiān)督有關(guān)。

圖1 不同飼養(yǎng)方式H5 亞型抗體合格率

圖2 不同飼養(yǎng)方式H7 亞型抗體合格率

2.3 二價苗與三價苗免疫效果的比較

由表2可知，2018年H5 亞型平均抗體合格率為85.64%，2019年H5 亞型平均抗體合格率為82.28%，2020年H5 亞型平均抗體合格率為86.50%，2019年抗體合格率有所下降這是因?yàn)?018年采用的是二價苗，H5 亞型為H5-Re8 株，而2019年首次采用三價苗[5]，H5 亞型為H5-Re11 株和H5-Re12 株，可能與首次免疫、疫苗保存不當(dāng)?shù)仍蛴嘘P(guān)[3]。

表2 不同飼養(yǎng)方式H5 和H7 亞型抗體合格率

由表2可知，H5 和H7 亞型的合格率水平略有差異，這是因?yàn)橹亟M禽流感H5+H7 三價苗因不同廠家疫苗抗原含量、生產(chǎn)工藝以及保存運(yùn)輸?shù)确矫娴脑颍瑫?dǎo)致疫苗差異[6]。

不論禽流感二價苗還是三價苗，免疫后禽流感抗體合格率均能達(dá)到70%以上，均有較好的免疫效果，與之前研究結(jié)論一致[7]。

3 結(jié) 論

通過分析和比較，高淳區(qū)近三年禽流感抗體合格均能達(dá)到國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，這與當(dāng)?shù)胤酪卟块T的管理分不開，但是籠養(yǎng)方式家禽的禽流感抗體合格率明顯高于放養(yǎng)家禽，放養(yǎng)家禽抗體合格率不高拉低了本區(qū)的整體合格率，放養(yǎng)家禽存在較高風(fēng)險。

在下一步的工作中，一是需要進(jìn)一步加強(qiáng)防疫人員網(wǎng)格管理責(zé)任制，免疫效果與補(bǔ)貼掛鉤才能有效提高免疫質(zhì)量；二是加強(qiáng)對村防員的培訓(xùn)，放養(yǎng)家禽免疫時做好標(biāo)記以提高免疫準(zhǔn)確度，督促其嚴(yán)格按照免疫程序進(jìn)行免疫；三是區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室加強(qiáng)對放養(yǎng)家禽的飛行采樣（監(jiān)測），發(fā)現(xiàn)抗體不合格的及時補(bǔ)免，從而提高本區(qū)禽流感抗體的整體水平。