腦脊液流式細胞術檢測在急性白血病并發中樞神經系統白血病中的預測診斷價值

熊曉珊 黎承平

【摘要】目的：本文的研究成果旨在深入探討腦脊液 （cerebrospinalfluid，CSF）流式細胞術（flow cytometry，FCM）對中樞神經系統白血病（centralnervoussystem leukemia，CNSL）的預測診斷價值。方法：本課題研究工作人員采用多色流式細胞術CD45/SSC設門法，對294例急性白血病患者CSF細胞免疫表型檢測情況數據進行了統計分析，同時進行腦脊液細胞形態學（Cytomorphology of cerebrospinal fluid，CC）檢測，比較兩種檢測方法的臨床應用優勢。結果：所統計294例患者中，116例為急性淋巴細胞白血病 （acutelymphomaleukemia，ALL）患者 ，FCM 檢測有22例發現異常表型細胞，陽性率為18.97%，而CC檢測，僅1例發現異常細胞，陽性率為0.86% ，差異具有統計學意義（P<0.01）;178例為急性非淋巴細胞白血病（acute nonlymphocyticleukemia，ANLL）患者，FCM檢測有13例發現異常表型細胞，陽性率為7.30%，而CC檢測，僅1例發現異常細胞，陽性率為0.56%，差異也具有統計學意義（P<0.01）。結論：腦脊液FCM檢測的敏感性明顯優于腦脊液CC檢測，急性白血病患者行FCM分析更有助于CNSL的預測診斷。

【關鍵詞】腦脊液流式細胞術;細胞形態學;中樞神經系統白血病

【中圖分類號】R322.8 ? 【文獻標識碼】A ? 【文章編號】2026-5328（2021）06-008-03

中樞神經系統白血病（CNSL）是急性白血病的一種嚴重臨床并發癥，為更好地預防及治療CNSL，早期診斷也就顯得尤為關鍵。目前評價中樞神經系統受累的金標準是腰椎穿刺后腦脊液中白血病細胞的檢測，即腦脊液CC檢測，但是該方法敏感性有限，而FCM敏感性高，而且可以很好地達到危險分層的目的，FCM已經初步在臨床上開展應用，但尚未納入常規檢查，仍需要大數據的分析支持[1]。Maria Ilaria Del Principe等回顧性地評估了240名新診斷為急性淋巴細胞白血病的成人患者隱匿性中樞神經系統疾病的發生率及其對預后的影響，證明流式細胞術可以檢測隱匿性中樞神經系統疾病的靈敏度較高[2]。本研究對昆明醫科大學第一附屬醫院收治的294例白血病患者行腦脊液FCM檢測和腦脊液CC檢測的陽性率做了分析比較，從而對FCM在CNSL中的預測診斷價值進行評估，現報道如下。

1.資料與方法

1.1研究對象

選取昆明醫科大學第一附屬醫院血液科2019年4月至2020年6月住院的294例急性白血病患者，116例為ALL，患者資料見表1;178例為ANLL，患者資料見表2。所選患者診斷均符合標準，診斷標準參照《血液病診斷及療效標準》[3] 嚴格執行。

1.2 CNSL診斷標準

參照文獻[1-2]標準，①有中樞神經系統的癥狀和體征，CNSL患者多數可能會出現顱內壓過高的表現，比如：頭痛、嘔吐、抽搐等，部分患者可出現視網膜出血、眼瞼下垂、視物模糊、視乳頭水腫以及口角歪斜等;②實驗室檢查顯示顱內壓增高（>0.02kPa）、腦脊液白細胞計數>5×106/L、腦脊液細胞學涂片可見確切白血病細胞;蛋白質>450mg/L或潘氏試驗陽等;③排除了由于顱內大量出血或顱內占位等其他原因所造成的中樞神經系統癥狀和體征及所引起的腦脊液相似改變。

1.3方法

1.3.1 腦脊液常規及生化檢查

觀察腦脊液的顏色和形態，然后將其滴在計數池內，并進行細胞測定，分別進行腦脊液內白細胞和紅細胞計數。然后使用全自動生化分析儀對患者腦脊液中含糖、蛋白質、氯離子等指標進行分析。

1.3.2 腦脊液CC檢查

取新鮮腦脊液標本0.1ml，吹打均勻后滴入離心管內，將其與濾紙、撥片一起緊密固定在離心涂片機中制作腦脊液細胞涂片，干燥后開始行瑞-吉姆薩染色，然后使用顯微鏡仔細觀察細胞涂片中細胞的形態。若明確發現幼稚原始的白血病細胞，則為陽性結果;反之，則為陰性結果。

1.3.3 腦脊液FCM檢查

檢驗目的：通過流式細胞儀法對急性白血病/淋巴瘤患者腦脊液異常細胞群進行定性及定量分析。檢驗原理：腦脊液流式細胞學檢測是基于白血病/淋巴瘤細胞免疫表型特點區分正常細胞及異常細胞，從而判斷急性白血病/淋巴瘤是否有中樞侵犯。

檢驗方法：（1）制備樣本：①準備流式專用管，標記姓名并編號;②將2ml腦脊液標本混勻，1000rp/m離心5分鐘，棄上清;③向每個試管中分別加入提前準備的預混多色抗體約40ul;④放置于適合的室溫（18-25°C），避光，孵育15-30分鐘;⑤裂解紅細胞：加入2ml 1X Lysing Solution，室溫避光10分鐘，1000rp/m離心5分鐘，棄上清;加入3ml PBS（含0.5%BSA），混勻，1000rp/m離心5分鐘，棄上清;加入500ul PBS懸浮細胞，待測。（2）上機檢測。（3）結果分析：采用國際通用CD45/SSC設門法，分析目的細胞群的各個抗原表達情況，對白血病/淋巴瘤分型和亞型進行判定。（4）報告生成：使用CD45/SSC設門法，區分正常細胞群和異常細胞群;根據正常細胞群作為內對照，判定異常細胞表達抗原的陰陽性及強度變化;對異常細胞群進行免疫表型分析，最后得出結論。質量控制：取100ul IMMUNOTROL進行抗體標記，與常規樣品相同步驟上機檢測，參考正常值范圍，判斷質控結果[4，5，6]。FCM陽性：腰穿一次成功無明顯組織損傷，腦脊液無混血，可檢測到白血病細胞免疫表型;若腦脊液混血或是血性腦脊液，FCM白血病細胞免疫表型高于外周血幼稚細胞比例。FCM陰性：腰穿一次成功無損傷，腦脊液FCM未發現異常白血病細胞免疫表型;腦脊液混血但腦脊液FCM異常免疫表型低于外周血幼稚細胞比例。

1.4統計學分析

采用SPSS 24.0統計學軟件進行數據分析，計數資料采用百分率表示，并采用X2檢驗，以P<0.01為差異具有統計學意義。

2.結果

2.1 FCM以及CC共同檢測116例ALL患者

FCM檢測有22例發現異常表型細胞，陽性率為18.97%。經細胞形態學分析，僅1例發現異常細胞，其陽性率為0.86%，差異有統計學意義（X2=10.642，P<0.01），見表3。

2.2 FCM以及CC共同檢測178例ANLL患者

FCM檢測有13例發現異常表型細胞，陽性率為7.30%。經細胞形態學分析，僅1例發現異常細胞，其陽性率為0.56%，差異有統計學意義（X2=5.353，P<0.01），見表4。

3.討論

中樞神經系統是白血病細胞的一個避護所，白血病潛藏其中可以逃避系統化療藥物，在引入有效預防性中樞神經系統治療之前，高達60%的急性淋巴細胞白血病患者已經并發了首次中樞神經系統白血病。因此，準確檢測和鑒定腦脊液中的白血病細胞對于深入了解白血病的發病機制和開發更好、更特異的中樞神經系統導向療法至關重要[7]。而腦脊液流式細胞術的檢測對于急性白血病合并中樞神經系統白血病的預防和診斷價值也逐漸得到凸顯。

本研究結果和國內的一些進行回顧性研究和前瞻性研究都說明了FCM在CNSL中已經具有著重要的應用和臨床意義，是腦脊液細胞學檢查的一個重要補充方法[8，9，10，11]。FCM聯合腦脊液常規、生化及CC檢測可以提高CNSL診斷的陽性率[12]。腦脊液FCM檢測陽性的患者建議按CNSL處理，并提出盡早進行異基因造血干細胞移植治療[13]。

國外相關研究均顯示腦脊液流式細胞術相比細胞形態學更具優勢，可作為重要補充檢測[14]。且FCM在發現早期無明顯癥狀的中樞神經運動系統浸潤中，具有著更強的早期臨床診斷優越性。報告結果表明，在高度懷疑或是考慮診斷早期中樞神經系統出現浸潤的急性白血病患者中，與腦脊液CC檢查相比，FCM的陽性檢出率可以較其增高至少2-3倍。已有多項研究報告和臨床證明[2]，在診斷成人急性淋巴細胞白血病患者中，流式細胞術可以高靈敏度地檢測隱匿性中樞神經系統疾病（FCM陽性和CC陰性的狀態），并且隱匿性中樞神經系統疾病的陽性狀態與不良結果相關。FCM可以在診斷時更精確地識別和量化中樞神經系統受累患者的數量，這對疾病的臨床病程和預后有顯著影響，從而進一步細化當前的診斷風險分層過程。這種精細的中樞神經系統評估應該成為所有患者就診時檢查的常規工具。

綜上所述，流式細胞術是一種對惡性血液系統疾病研究高度敏感的技術，腦脊液FCM在急性白血病并發CNSL中具備重要的臨床預測診斷價值。

【參考文獻】

[1]Del Principe Maria Ilaria， Maurillo Luca， Buccisano Francesco， et al. Central nervous system involvement in adult acute lymphoblastic leukemia： diagnostic tools， prophylaxis， and therapy.2014， 6（1）：e2014075

[2]Del Principe Maria Ilaria， Buzzatti Elisa， Piciocchi Alfonso， et al. Clinical significance of occult central nervous system disease in adult acute lymphoblastic leukemia. A multicenter report from the campus all network. 2019.

[3]ZHANG ZN，SHEN D. Criteria for diagnostic and therapeutic effect of hematological diseases.[M]3re ed.Beijing：Science Press，2007：131-134.

[4]張之南等. 血液病學. 人民衛生出版社.2011， 719-748

[5]劉艷榮等. 實用流式細胞術-血液病篇. 北京大學醫學出版社.

[6]王建中等.臨床流式細胞分析. 上海：上海科學技術出版社，2005.8

[7]Alexander Popov， Guenter Henze， Tatiana Verzhbitskaya， et al. Absolute count of leukemic blasts in cerebrospinal fluid as detected by flow cytometry is a relevant prognostic factor in children with acute lymphoblastic leukemia. 2019， 145（5）：1331-1339.

[8]王永斌，張俊，蘇勇，等.腦脊液流式細胞學檢測在急性淋巴細胞白血病并發中樞神經系統白血病中的診斷價值[J].現代腫瘤醫學，2020，28（10）：1723-1725.

[9]劉占云，張赟翔，郝杰，等. 流式細胞學在成人急性髓系白血病緩解后中樞神經系統白血病檢測的臨床應用及價值[J]. 臨床血液學雜志，2020，247（02）：37-41.

[10]陳晶， 張會峰， 賀政新. 腦脊液流式細胞術診斷兒童中樞神經系統白血病的效能[J]. 醫療裝備， 2019， v.32;No.395（22）：61-62.

[11]張嵐，谷云風，鄭媛君，張淑青，張偉華.腦脊液流式細胞檢測在中樞神經系統白血病診斷中的價值[J].山西醫藥雜志，2016，45（7）：103-105.

[12]林祥偉， 張蘇偉. 流式細胞術檢測腦脊液白血病細胞在白血病診斷中的價值[J]. 中國基層醫藥， 2016， 23（014）：2138-2140.

[13]劉占云，張赟翔，郝杰，等. 流式細胞學在成人急性髓系白血病緩解后中樞神經系統白血病檢測的臨床應用及價值[J]. 臨床血液學雜志，2020，v.33;No.247（02）：37-41.

[14]J. C. Jaime Pérez et al. Comparison of conventional cytomorphology， flow cytometry immunophenotyping， and automated cell counting of CSF for detection of CNS involvement in acute lymphoblastic leukemia[J]. International Journal of Laboratory Hematology， 2018， 40（2） ： 169-174

1.昆明醫科大學 ?云南昆明 ?650500

2.昆明醫科大學第一附屬醫院 ?云南昆明 ?650032