蟬花多糖對肉雞脂質代謝和免疫功能的影響

李瑞萍，劉長國，張 碩 ，董麗艷，王秋霞，徐時湘，李國勤，田 勇，柴一秋，劉素貞*，盧立志*

(1.浙江農林大學 動物科技學院，浙江 杭州 311300；2.浙江省農業科學院 畜牧獸醫研究所，浙江 杭州 310021；3.溫州科技職業學院 動物科學學院，浙江 溫州 325000；4.浙江省亞熱帶作物研究所 溫州市蟲生真菌資源研究與開發重點實驗室，浙江 溫州 325005)

從國家實施減抗政策以來，養雞業從提高生物安全、研究新型飼料添加劑替抗等方面來改善養雞業的養殖現狀。日前，養殖場采用的替抗產品有微生態制劑、中草藥、植物提取物等。其中，中草藥中的蟬花備受專家學者關注，其粗多糖含量占比達到2.27%～3.58%[1]，含有的多糖成分在有效成分中占比達到21.73%[2]。近年來，將蟬花多糖應用于小鼠[3]、大鼠[4]、果蠅[5]的研究均有報道，研究表明，蟬花多糖具有促進機體免疫調節[6]和抗腫瘤[7]等作用。本課題組前期的研究結果表明，蟬花多糖在提高肉雞體質量、降低料重比和雞新城疫抗體水平方面有積極作用[8-9]。但蟬花多糖對肉雞脂質代謝和免疫相關生化指標的報道不盡全面。因此，本試驗以雁蕩麻雞為研究對象，探討飼糧中添加蟬花多糖對雞脂質代謝和免疫功能的影響，為提高雞健康水平和改善肉品質提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料試驗所用蟬花多糖由浙江省亞熱帶作物研究所提供，實驗室自主栽培蟬花蟲草子實體，通過實驗室工藝手段干燥即得蟬花蟲草粗多糖粉末，再經過大孔樹脂法和去蛋白法(Sevag 法)分離得到蟬花多糖[10]。桿菌肽鋅(批號：P181013)，由綠康生化有限公司提供。雞新城疫活疫苗La Sota株由博美萊生物制品有限公司提供。

1.2 試驗動物與試驗設計將購自浙江綠雁有限公司的1日齡雁蕩麻雞270隨機分為6組，公母各半，每組3個重復，每個重復15只，以每個重復為單位單籠飼養。設置空白對照組(Ⅰ組)、免疫對照組(Ⅱ組)、抗生素對照組(Ⅲ組)和3個試驗組(Ⅳ～Ⅵ組)，按照表1方案，根據每組雞的平均體質量按照灌服劑量計算添加劑劑量，每天14:00對每只試驗雞(1次/d)進行灌服，灌服試驗時間分別為11～17日齡和25～31日齡。

表1 雁蕩麻雞灌服添加劑成分及劑量

1.3 飼養管理與試驗飼糧試驗前對雞舍進行消毒，2019年5月在溫州種子種苗科技園進行試驗，采用雙層籠養。日常飼養采用常規消毒、自由飲食、自然光照和通風。雁蕩麻雞飼喂無抗飼料(不含藥物成分)，飼糧成分見表2。Ⅱ～Ⅵ組在14，28日齡進行新城疫點眼免疫(除Ⅰ組外)，空白對照組(Ⅰ組)用等量生理鹽水點眼。試驗從1日齡起至42日齡結束。

表2 無抗基礎飼糧組成及營養水平 %

1.4 測定指標及方法

1.4.1血液生化和免疫指標 試驗末期，每組隨機抽取18只試驗雞(每個重復6只)，靜脈采血，3 000 r/min 離心15 min后，分離血清并放置-20℃保存。血清脂質代謝指標，包括總蛋白(TP)、總膽固醇(TC)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、甘油三酯(TG)、肌酐(CREA)，采用北京華英生物技術研究所的比色試劑盒和邁瑞BS-420全自動生化儀檢測；血清免疫指標，包括免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、補體C3(C3)、補體C4(C4)含量，采用北京華英生物技術研究所的比色試劑盒，全自動生化儀(邁瑞BS-420)測定；干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)含量采用北京華英生物技術研究所的酶免試劑盒，酶標分析儀(華為德朗DR-200BS)測定。

1.4.2免疫器官指數 試驗雞于42日齡屠宰，無菌采取脾臟、法氏囊等免疫器官，測質量并記錄。免疫器官指數 = 器官質量/試驗雞活體空腹體質量。

2 結果

2.1 蟬花多糖對雁蕩麻雞血清脂質代謝相關指標的影響由表3可知，Ⅳ～Ⅵ組血清中TC含量低于Ⅰ～Ⅲ組，且顯著低于Ⅲ組(P<0.05)，Ⅳ組TC含量顯著低于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05)，同時，Ⅰ、Ⅱ組TC含量顯著低于Ⅲ組(P<0.05)；Ⅴ、Ⅵ組血清中TP含量高于Ⅰ～Ⅲ組，其中Ⅴ組TP含量顯著高于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05)，Ⅵ組TP含量顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P<0.05)；Ⅴ、Ⅵ組血清中GLB含量高于Ⅰ～Ⅲ組，其中Ⅴ組GLB含量顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P<0.05)，Ⅵ組GLB含量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅲ組TP、GLB含量高于Ⅰ、Ⅱ組，但差異不顯著(P>0.05)；Ⅳ～Ⅵ組血清中ALB含量高于Ⅰ～Ⅲ組，CREA含量低于Ⅰ～Ⅲ組，但差異不顯著(P>0.05)；Ⅳ～Ⅵ組血清中TG含量低于Ⅰ～Ⅲ組，其中Ⅳ組TG含量顯著低于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅲ組TG含量低于Ⅰ、Ⅱ組，但差異不顯著(P>0.05)。

2.2 蟬花多糖對雁蕩麻雞免疫器官指數的影響由表4可知，42日齡，蟬花多糖未對試驗雞的脾臟指數和法氏囊指數產生顯著性影響(P>0.05)，但從數值上發現，Ⅴ組脾臟指數高于Ⅲ組，Ⅳ～Ⅵ組法氏囊指數高于Ⅰ～Ⅲ組。

2.3 蟬花多糖對雁蕩麻雞免疫相關生化指標的影響由表5可知，Ⅳ～Ⅵ組IgA含量高于Ⅰ～Ⅲ組，Ⅴ組在各組中IgA含量最高，較Ⅰ～Ⅲ組分別高出12.0%，12.0%，7.4%，且與Ⅰ、Ⅱ組存在顯著性差異(P<0.05))；Ⅳ～Ⅵ組IgG含量高于Ⅰ～Ⅲ組(P>0.05)；Ⅳ組、Ⅵ組C3含量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅴ組C3含量顯著高于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05)，Ⅱ、Ⅲ組C3含量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；Ⅳ組C4含量顯著高于Ⅰ、Ⅲ組(P<0.05)。

表3 蟬花多糖對雁蕩麻雞血清脂質代謝相關指標的影響

表4 蟬花多糖對42日齡雁蕩麻雞免疫器官指數的影響 mg/g

Ⅳ、Ⅴ組IFN-γ含量顯著高于Ⅱ組(P<0.05)，Ⅳ～Ⅵ組IFN-γ含量顯著高于Ⅲ組(P<0.05)，同時Ⅰ組IFN-γ含量顯著高于Ⅲ組(P<0.05)；Ⅳ組TNF-α含量顯著高于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05)，Ⅴ組TNF-α含量顯著高于Ⅱ、Ⅲ組(P<0.05)，Ⅵ組TNF-α含量顯著高于Ⅲ組(P<0.05)，同時Ⅰ組TNF-α含量顯著高于Ⅱ、Ⅲ組(P<0.05)；Ⅳ～Ⅵ組IL-2含量顯著高于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05)，Ⅰ、Ⅱ組IL-2含量顯著高于Ⅲ組(P<0.05)；Ⅴ、Ⅵ組IL-4含量高于Ⅰ、Ⅱ組，且與Ⅱ組存在顯著性差異(P<0.05)，Ⅲ組IL-4含量顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P<0.05)。

表5 蟬花多糖對42日齡雁蕩麻雞免疫相關生化指標的影響

3 討論

3.1 蟬花多糖對雁蕩麻雞血清脂質代謝的影響機體血清中TC和TG的含量是反映機體內脂類合成和代謝之間平衡的重要指標[11]。TP包括ALB和GLB，ALB負責運輸代謝物、調節被運輸物質以及維持血液膠體滲透壓的作用，GLB則能增強機體抵抗疾病能力，血清中TP含量的升高對機體免疫力和代謝能力有積極影響[12]。本試驗中，灌喂蟬花多糖的試驗雞TC、TG含量低于空白對照組、免疫對照組和抗生素對照組。LIU等[13]研究表明，機體內TC[14]、TG水平越低對機體體內脂質代謝越有利。蟬花多糖作為飼料添加劑可能有利于肉雞的脂質代謝。類似于黃芪多糖能促進機體脂肪沉積，提高血清中TP的水平[15]。然而中藥多糖對機體脂質合成和代謝能力發揮作用的機制還需要進一步研究。綜合各組脂質代謝數值，蟬花多糖中劑量組(50 mg/kg)血清中TP、GLB、ALB和CREA均有所增多，其脂質代謝能力在各組中最佳。另有研究表明，山黃粉和黃芪多糖能促進動物體內蛋白質的消化吸收和代謝沉積能力[16]。這與本試驗的結果類似，說明中草藥多糖對動物的脂質代謝水平能產生積極影響，從而間接提高動物的生長性能和健康水平。

3.2 蟬花多糖對雁蕩麻雞免疫功能的影響

3.2.1蟬花多糖對雁蕩麻雞免疫器官指數的影響 禽類的免疫功能直接影響機體的生長性能，法氏囊、脾臟是禽類的主要免疫器官[17]，免疫器官指數可作為評判機體免疫功能的初步依據[18]。李思迪等[19]研究表明，蟬花復方能提高小鼠的胸腺及脾指數。羅靖璠[20]的研究表明，隨著灌喂小鼠的蟬花菌核和子實體劑量增大，脾指數也在增加。本試驗中脾臟和法氏囊指數均未有顯著性差異，但添加蟬花多糖的試驗雞脾臟指數高于抗生素對照組，法氏囊指數略高于空白對照組、免疫對照組和抗生素對照組，說明在雞的生長中添加蟬花多糖對免疫器官發育有一定的積極影響。有研究報道，多糖能正向促進禽類免疫器官發育，但對其免疫器官指數沒有顯著提高[21]，這與本試驗結果相似。

3.2.2蟬花多糖對雁蕩麻雞免疫相關生化指標的影響 免疫球蛋白和補體在機體的體液免疫中起到重要作用，禽類血清中IgG作為機體抗感染的中堅力量，在體內維持時間長；而IgA通過聚集顆粒性抗原和中和病毒的能力從而抵抗微生物入侵機體的腸道、消化道等部位；補體則在機體內活化后擴大體液免疫反應。研究表明，中草藥多糖起到增強機體體液免疫的作用[22-24]。方磊涵等[22]研究表明中草藥復方多糖能提高試驗雞新城疫抗體效價及其血清中補體C3、C4水平。孫甜甜等[24]試驗表明在肉仔雞生長中添加枸杞粗多糖能有效提高其血清中IgG含量。本試驗中，飼喂蟬花多糖(50 mg/kg)的試驗雞血清中IgA、C3水平高于空白對照組、免疫對照組、抗生素對照組。因此，在雞的生長中添加50 mg/kg 蟬花多糖能顯著提高血清中免疫球蛋白和補體含量，由此提高機體免疫力。說明真菌多糖中的活性物質作為免疫調節劑對機體免疫起到了促進作用[24]。

IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4在機體免疫應答中發揮重要功能，其含量能不同程度地反應機體當下免疫應答水平。IFN-γ可以調節T細胞和B細胞的免疫功能，促進巨噬細胞吞噬能力[25]。TNF-α具有眾多免疫活性，參與單核巨噬細胞的活化、產生其他細胞因子和自身分泌的調節[26]。IL-2、IL-4具有激活和提高免疫細胞等多種功能，發揮著各自特殊的作用[27-28]。本試驗中，飼喂蟬花多糖的試驗雞血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2含量都有不同程度的提高，而飼喂抗生素的試驗雞血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2含量顯著低于飼喂蟬花多糖的試驗雞。由此推測蟬花多糖能激活機體體內巨噬細胞、T細胞和B細胞釋放細胞因子發揮非特異性免疫作用,其中蟬花多糖中劑量組(50 mg/kg)對提高試驗雞血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4含量效果最佳，而在雞的生長中添加抗生素會抑制體內巨噬細胞釋放細胞因子間接致使機體免疫力低下。此結果與宋佳敏等[29]的研究中金蟬花多糖可以提高小鼠血清中干擾素、免疫球蛋白和白介素含量的結論相似。日本蟲草子實體同樣通過刺激小鼠體內的巨噬細胞釋放IL-2、TNF-α從而對機體發揮免疫干預[30]。張偉云等[31]報道通過腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞和小鼠碳廓清試驗，蛹蟲草對機體內巨噬細胞吞噬能力表現顯著提高。蘆薈多糖和植物乳桿菌在雞的生長中聯合使用能使雞血清中IFN-γ、IL-2、IL-4含量提高[32]。結合本試驗蟬花多糖能提高雞的免疫能力且效果顯著，說明蟬花多糖可作為新的添加劑應用在雞的養殖中來提高雞的脂質代謝水平和免疫功能，這為開發綠色養殖模式提供了新的途徑。

在雞生長中添加蟬花多糖能提高雁蕩麻雞脂質代謝水平，并提高雁蕩麻雞免疫相關生化指標從而增強機體免疫應答水平。本試驗條件下，蟬花多糖中劑量組(50 mg/kg)效果最佳。