甘加藏羊肝臟細胞組織形態結構觀察

王雪艷，漫貴貴，朱倩鋒，趙文強，柴君臣，姚鋒鋒，何玉琴，趙 禹

（甘肅農業大學 生命科學技術學院，甘肅 蘭州 730070）

藏羊，又稱藏系綿羊，屬我國三大原始綿羊品種之一[1]。主要生活在青藏高原地區，甘肅和青海是其主要棲息地[2]。藏羊種類繁多，依據生態環境、生產特性和經濟效益，可將其分為高原型、山谷型和歐拉型3大類。在甘肅，藏羊的主體為高原型，占比達90%以上，主要分布在高寒牧區[3]。甘加藏羊是藏羊的一個優良地方品種，也是中國國家地理標志產品，因其主產區位于甘肅省甘南州夏河縣甘加鎮而命名。由于甘加藏羊主要分布在高寒牧區，采樣較困難，所以目前關于甘加藏羊的研究資料非常有限，而對其各器官組織結構的研究尚未見報道。因此，本文擬通過石蠟切片技術對甘加藏羊肝臟組織的形態結構進行研究。

肝臟是動物體內新陳代謝的重要器官，它含有多種與生物轉化作用相關的酶類，有利于動物體內外的某些代謝產物、毒物和藥物等非營養性物質從腎臟和膽道排出，在體內起著去除毒素、儲存糖原、分泌膽汁、合成蛋白質等作用。了解甘加藏羊肝臟細胞組織的結構，有助于對反芻動物肝臟生理功能進行研究，對進一步提高甘加藏羊的養殖水平具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

2020年5月在甘肅省甘南州夏河縣甘加鎮屠宰場（平均海拔4 100 m）通過齒齡鑒別法隨機選擇年齡在2～3歲、營養良好的未孕雌性成年甘加藏羊4只，剖殺試驗羊，取其肝臟用于試驗材料。

1.2 主要儀器設備

光學顯微鏡、組織包埋機、電熱恒溫鼓風干燥箱（DHG-9140型）、精密輪轉半自動螺旋切片機、攤片機、烤片機、圖像分析軟件等。

1.3 主要試劑

蘇木精染液、伊紅染液（上海鼎國生物技術有限公司）；鹽酸酒精[4]（湖南艾佳生物科技股份有限公司）；酒精、二甲苯、中性樹膠（均購自北京索萊寶科技有限公司）。

1.4 肝臟形態學測量

剖殺試驗羊取出肝臟后，大體解剖觀察肝臟外部形態特點并對肝臟進行測量。

1.5 肝臟組織石蠟切片制備及觀察

將選取的甘加藏羊肝臟進行解剖，每只羊選肝實質各切取兩塊約1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm的組織塊，并編號進行標記，然后將所有組織塊迅速投入4%多聚甲醛溶液中固定。取固定好的組織數塊，使用常規梯度酒精脫水后用雙刃刀片切成厚1 cm、寬0.3～0.5 cm的薄片，8片左右，用紗布包裹薄片，并放入有紗布封口的燒杯中進行洗滌。經脫水透明、組織浸蠟、包埋等步驟制作組織蠟塊，待蠟塊凝固，修正蠟塊，切片（注意刀的傾角不宜過大，也不宜過小，一般使切片刀的刀口與石蠟的平面保持在10～15°為宜[5]），貼片以及烤片。將切片脫蠟染色，脫水透明，最后封片，在光學顯微鏡下觀察。

1.6 數據分析

用平均值±標準差來表示肝臟的形態學測量結果，用SPSS22.0軟件進行數據統計分析，P＜0.05和P＜0.01分別表示統計學差異顯著和極顯著，用one-way ANOVA或Student’s t-test比較組間均值的差異。

2 結果與分析

2.1 肝臟形態學測量結果

甘加藏羊肝臟外觀呈紅褐色，質軟而脆。肝臟形態呈不規則楔形，右側鈍厚而左側偏窄，上面突起渾圓，與膈肌接觸，下面較扁平，與胃、十二指腸、膽囊和結腸相鄰。肝臟有一定的活動度，可隨體位的改變和呼吸而上下移動。按解剖學結構主要分四葉，分別是左葉、右葉、尾葉和方葉（見圖1）。

圖1 甘加藏羊肝臟形態

肝臟四葉之間界限明顯，大小不等。右葉（長12.3 cm、寬13.6 cm）整體比左葉（長10.7 cm、寬11.3 cm）大，對每個小葉進行測量，結果見表1。

表1 甘加藏羊肝臟形態測量結果

2.2 肝臟組織形態觀察

甘加藏羊肝臟組織結構由肝小葉和門管區構成（見圖2A）。肝小葉包含肝細胞索（肝板）、中央靜脈、膽小管和肝竇，是肝臟的基本結構和功能單位（見圖2B）。肝小葉數目較多、體積偏小、呈不規則的多邊形，小葉間結締組織不發達，分界不明顯。其中肝板是由肝細胞呈行排列成的不規則的、相互連接的板狀結構。肝細胞界限清晰，呈多邊形，規則地排列成肝細胞索，細胞核較大且核仁明顯。肝血竇位于肝板之間，大小不等，細胞核扁平，凸向竇腔。此外，在肝血竇之間還散在枯否氏細胞（見圖2C），其胞體較大，形狀不規則，胞核大而圓。小葉中心為中央靜脈，其管壁不明顯，只由一層內皮細胞和少量的結締組織構成。

門管區（見圖2D）由小葉間動脈、小葉間靜脈和小葉間膽管3種伴行的管道形成的結締組織構成。小葉間動脈管腔較小，管壁較厚。小葉間靜脈管腔相對較大，管壁較薄。小葉間膽管的管腔狹小，呈圓形，由于細胞核大且著色深，故呈藍色外觀。

圖2 甘加藏羊肝臟組織形態結構

3 討論

肝臟存在于所有脊椎動物中，通常是動物體內最大的腺體，其功能很多，如參與多種營養物質的代謝和儲存、分泌膽汁、解毒、造血和調節激素等[6]，同時也是動物檢疫中常見的病變組織器官。肝臟的形式在不同物種中有較大差異，在很大程度上取決于周圍器官的形狀和排列。在大多數物種中，肝臟可分為左葉和右葉。

甘加藏羊肝臟組織比較發達，其表面覆蓋漿膜，延伸入肝實質的結締組織將肝臟分為若干個肝小葉。肝小葉結構中的肝板、肝竇和膽小管以中央靜脈為中心呈輻射分布[7]。中央靜脈位于肝小葉中央，管壁為單層扁平上皮，因與周圍的肝血竇相通而管壁不完整；肝板由肝細胞單層排列構成，肝細胞呈多邊形，核大而圓，位于細胞中央，有的可見雙核；肝血竇竇壁緊貼肝細胞索，由內皮細胞構成，細胞核扁圓形，染色深[8]。門管區的小葉間靜脈屬于門靜脈分支，管腔較大而不規則，內皮外有散在平滑肌纖維分布；小葉間動脈屬肝動脈分支，內皮外可見環形平滑肌層；小葉間膽管屬肝管分支，管壁為單層立方上皮，細胞排列整齊，細胞質染色淺，細胞核呈圓形。甘加藏羊肝小葉結締組織不發達，肝小葉區分不明顯，而門管區較明顯。不同家畜的肝小葉間結締組織發達程度因種類不同而存在差異，豬、貓和駱駝的小葉間結締組織特別發達，肝小葉輪廓清晰，而其他動物小葉間結締組織不發達，肝小葉分界不明顯[9]。

前人對動物肝臟的研究共揭示了3種肝細胞排列方式，即肝細胞呈團塊狀聚集排列、單層或兩層肝細胞呈索狀結構排列。一般來說，肝細胞索的細胞組成和排列方式的差異與動物種類有一定聯系，如哺乳動物的肝細胞索往往是由單層細胞排列構成，而鳥類的肝細胞索則由兩層細胞排列構成。本研究中的甘加藏羊肝細胞符合上述動物肝細胞的排列規律，為單排索狀結構。肝臟血竇內血液的充盈程度會使肝細胞索產生一定形變。有研究表明，哺乳動物和鳥類的肝細胞索結構差異可能和肝臟功能密切相關[10]。哺乳動物在消化期可通過神經和體液等途徑刺激膽汁的分泌，從而實現對多種營養物質的消化和吸收，該過程中大量消化液的分泌需要肝臟提供足夠的血液供給，血竇內的血液不斷充盈，擠壓肝細胞使其更加趨向于單層排列。而鳥類對食物的消化主要依賴于嗉囊中的分泌液，對肝臟中的消化液依賴程度低，因此肝臟對血液的需求相對哺乳動物較低，從而具有兩層細胞構成的肝細胞索[10]，這體現出組織器官結構與其發揮的生理功能密切相關。

本試驗以甘加藏羊為研究對象，對其肝臟細胞組織結構與特征進行了觀察和研究，揭示了甘加型藏羊在高寒牧區生長環境下肝臟的組織結構特點，為將來肝臟中環境適應性相關功能基因篩選以及優良地方品種選育提供了組織學理論依據。