半枝蓮中黃酮成分的提取工藝研究

黃美琪，張潔婷，羅錦欣，單紹軍，2

（1.廣東藥科大學醫藥化工學院，廣東中山528458；2.廣東省化妝品工程技術研究中心，廣東中山528458）

中藥材半枝蓮（Soutellaria barbate）為唇形科黃芩屬植物半枝蓮的干燥全草，其別名為狹葉韓信草、牙刷草等，多生長于池沼邊、田邊或路旁潮濕處，廣泛生長于中國中部及韓國等東南亞國家。其名最早是在《外科正宗》中記載，其味辛、苦，性寒，主要歸肺經，具有清熱解毒、化瘀、利尿的功效。半枝蓮在醫藥史上具有十分重要的作用，是傳統的中藥，常用于疔瘡腫毒、咽喉腫痛、跌撲傷痛、水腫、黃疸、蛇蟲咬傷，還具有調節免疫系統、抗菌抑瘤功效，在臨床實踐上發揮了極大的作用。半枝蓮藥性溫和，具有毒副作用小和療效顯著的優點。

半枝蓮的主要生理活性成份是二萜類和黃酮類化合物，半枝蓮中含有的黃酮類化合物具有清除自由基的作用，同時對腫瘤也具有明顯的抑制作用。目前已分離出26個黃酮類化合物，是從半枝蓮中得到最多的一類成分。抗氧劑在油脂或含油食品添加劑中的效果很明顯，由于人工合成的抗氧化劑存在安全性缺陷，因此從植物中提取安全、天然的抗氧作用的黃酮類物質是必然趨勢。

目前從半枝蓮中提取黃酮類化合物的方法有很多，主要包括溶劑酶解法、提取法和超聲波法等，這些方法雖然提取工藝比較成熟，但是也存在明顯缺陷，比如提取時間長，提取的產品品質差和提取的工藝復雜等缺點。微波輔助提取法是目前提取黃酮類化合物的一種新方法，具有提取選擇性強，提取效率高，操作簡單，提取雜質少等優點。

本文以微波輔助法對黃酮類成分提取及有效成分的含量測定進行研究，考查了微波提取功率、提取時間、溶劑濃度及用量等因素對提取率的影響，從而得到提取黃酮的最佳工藝條件。

1 實驗部分

1.1 試劑及儀器

半枝蓮，廣州大森林藥店，干燥研磨備用；蘆丁對照品，純度≥98%，上海雅吉生物科技有限公司；其他化學試劑均為化學純或分析純。

X3-233A微波爐，廣東美的電器有限公司；RE-52AA旋轉蒸發儀，上海亞榮生化儀器廠；HALO DB-10C紫外可見分光光度計，北京生物科技有限公司；分析天平，精密度0.000 1 g，美國梅特勒公司。

1.2 實驗步驟

精確稱取半枝蓮粉末，裝入單口燒瓶中，加入乙醇，然后將燒瓶放入微波爐，調整功率、提取時間，提取結束后經活性炭脫色，再以乙醇為溶劑溶解提取物，最后將溶液定容到100 mL。然后分別吸取少量黃酮提取液，放在3塊潔凈玻璃板上，和硫酸鎂粉反應顯示橙色，和10%的氫氧化鈉溶液反應后顯黃色，和三氯化鐵溶液反應后顯示綠色。如果這3個反應都能顯示出特定的顏色，可確定提取物是黃酮類化合物。

1.3 半枝蓮中黃酮提取物的鑒別與含量測定

本方法參考李省測定黃酮化合物含量的方法來繪制蘆丁標準曲線，同時以購買的蘆丁標準品為黃酮對照品進行含量測定，具體是在510 nm處測定吸光值A，以質量濃度ρ對A進行線性回歸，得到回歸方程A=10.65ρ，R=0.999 9，黃酮的質量濃度在0～0.06 mg/mL之間有很好的線性關系。

在25 mL的容量瓶中放入精確吸取的定容提取液1 mL，參考蘆丁標準曲線繪制方法，加入各種試劑，接著用去離子水定容到25 mL，在最大吸收波長510 nm處測定吸光值A，再根據回歸曲線方程計算濃度，從而得到中藥材樣品半枝蓮中黃酮的提取率P（%）。

2 結果與討論

2.1 微波提取功率對黃酮提取率的影響

用分析天平精確稱取5份半枝蓮粉末，每份重2.0 g，分別加到250 mL單口燒瓶中，加入85%乙醇60 mL，然后將單口燒瓶放入微波反應器中進行微波提取反應，分別調整功率為300 W、400 W、500 W、600 W和700 W，反應11 min，半枝蓮黃酮提取率結果如表1。

表1 微波功率對黃酮提取率的影響Tab.1 Effect of microwave power on flavonoid extraction

從表1看出，隨著提取功率的增加，半枝蓮中黃酮提取率也隨之增加，功率達到600 W以上時，提取率基本不變，故選取600 W作為最優提取功率。

2.2 微波提取時間對黃酮提取率的影響

用分析天平精確稱取5份半枝蓮粉末，每份重2.0 g，分別加到250 mL單口燒瓶中，加入60 mL 85%乙醇，微波功率600 W，時間為5 min、7 min、9 min、11 min和13 min，半枝蓮黃酮提取率結果如表2。

表2 微波時間對黃酮提取率的影響Tab.2 Effect of microwave time on flavonoid extraction

從表2看出，隨著微波提取時間逐漸延長，黃酮的提取率也相應增加。當微波提取時間為11 min以上時，提取率反而出現輕微下降，故選取11 min作為微波提取的最優時間。

2.3 微波提取溶劑濃度對黃酮提取率的影響

用分析天平精確稱取5份半枝蓮粉末，每份重2.0 g，分別加到250 mL單口燒瓶中，再分別加入60 mL的65%、75%、85%和95%乙醇進行微波提取反應，調整微波功率為600 W，反應11 min，半枝蓮黃酮提取率結果如表3所示。

表3 微波提取溶劑濃度對黃酮提取率的影響Tab.3 Effect of solvent strength on flavonoid extraction

從表3看出，隨著微波提取的乙醇溶劑濃度增加，黃酮提取率也隨之增加。當乙醇濃度為85%以上時，黃酮的提取率不再增加，反而下降。據此，乙醇溶劑在85%為最優的溶劑濃度。

2.4 微波提取溶劑用量對黃酮提取率的影響

用分析天平精確稱取5份半枝蓮粉末，每份重2.0 g，分別加到250 mL單口燒瓶中，再分別加入85%乙醇30 mL、40 mL、50 mL、60 mL和70 mL進行微波提取反應，調整微波功率為600 W，反應11 min，半枝蓮黃酮提取率結果如表4所示。

表4 微波提取溶劑用量對黃酮提取率的影響Tab.4 Effect of solvent quantity on flavonoid extraction

從表4看出，隨著濃度為85%乙醇用量增加，黃酮提取率也隨之增加。當乙醇用量為60 mL以上時，提取率不再增加。故85%乙醇選用量為60 mL作為黃酮提取的最優溶劑用量。

3 結論

通過以上試驗發現，用微波輔助法提取半枝蓮中黃酮成份時最優工藝條件：半枝蓮粉末2.0 g，乙醇濃度85%，乙醇用量60 mL，微波功率600 W，提取時間11 min，此條件下黃酮提取率為3.0%。