Hns對紫貽貝和牡蠣機體酶活性的影響研究

邵躍

（錦州市科學技術研究院，遼寧 錦州121000）

自從人類從事海洋活動以來，海水腐蝕和海洋生物的污損就成為限制人們開發與利用海洋資源的兩個主要問題。近年來，隨著航運、海防、水產養殖以及海濱電廠等發展，海洋生物污損所帶來的危害越發嚴重，也越來越受到人們的重視[1]。防止海洋生物污損的研究有著廣闊的發展前景，開發環保、廣譜高效和長壽命的防污技術是未來的主要研究方向。

Hns是大連大學從植物中提取到的一種毒性物質，但其毒性作用及作用機理尚不清楚，現以紫貽貝（Mytilus edulis）和牡蠣（Ostreagigas）為研究對象，研究Hns對海洋污損生物酶活性的影響，進而確定Hns是否可作為新型低毒高效的防污試劑。

1 研究方法

1.1 慢性毒性試驗

將紫貽貝洗凈，選擇殼長為（6.0±0.5）cm，殼寬為（3.0±0.5）cm和殼高為（2.0±0.5）cm的紫貽貝，放于6個養殖箱，每個養殖箱放入30只，加入20 L海水，并分別加入Hns母液，使每個養殖箱中Hns的質量濃度分別為0，10，18，32，56和100 mg/L。曝氣，在暴露2，4，6和8 d時，于Hns質量濃度為0和10 mg/L的養殖箱中取樣，每次取3只，第10 d時，于6個養殖箱中分別取3只，并測定紫貽貝組織內氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和膽堿酯酶（CHE）的活性和丙二醛（MDA）的含量。試驗期不投喂。

1.2 組織勻漿

將經藥物脅迫后的紫貽貝或牡蠣組織塊在0.86%預冷生理鹽水中漂洗，再在濾紙上吸干水分，取0.2～1.0 g組織塊剪碎并加入其9倍質量的預冷生理鹽水，使用玻璃勻漿管充分研磨10次（6～8 min），制得10%組織勻漿，后將組織勻漿3 000 r/min離心10～15 min，取上清液進行酶活性測定[2]。

1.3 酶活性測定

測定按購自南京建成生物工程研究所的酶試劑盒的說明進行，用721分光光度計在相應的波長下測定其吸光值。

2 結果與分析

2.1 暴露時間對紫貽貝SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

不同暴露時間對紫貽貝SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響見圖1（a）（b）（c）（d）。

（1）對SOD活性的影響。當紫貽貝在Hns質量濃度為1 mg/L的藥物脅迫下，其組織SOD活性測定結果顯示，隨著藥物脅迫時間的延長，SOD活性表現出先升高后下降再上升的變化規律，第6 d時到達最大值；空白對照組中，紫貽貝組織內的SOD活性則成相反趨勢。總體上，受藥物脅迫的紫貽貝試驗組SOD活性均高于無藥物脅迫組[3]。

（2）對CAT活性的影響。紫貽貝在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內CAT活性隨著藥物脅迫時間的延長，表現出波浪起伏的變化規律，且與空白對照組相比，紫貽貝組織內的CAT活性成相反趨勢。總體上，藥物脅迫組的CAT活性最終隨時間的延長而升高[3]。

（3）對CHE活性的影響。紫貽貝在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內CHE活性隨著藥物脅迫時間的延長，表現出先上升后下降的變化規律；空白對照組中，紫貽貝組織內的CHE活性則成相反趨勢。

（4）對MDA含量的影響。紫貽貝在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內MDA含量隨著藥物脅迫時間的延長，表現出先上升后下降的變化規律，且與空白對照組相比，紫貽貝組織內的MDA含量對Hns藥物反應敏感。整體上，受藥物脅迫的紫貽貝MDA含量最終隨時間的延長而下降。

圖1不同暴露時間下Hns對紫貽貝組織內SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

2.2 暴露時間對牡蠣SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

（1）對SOD活性的影響。牡蠣在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內SOD活性隨著藥物脅迫時間的延長，表現出先下降后上升再下降的變化規律，與空白對照組相比，牡蠣組織內的SOD活性趨勢相同，且受藥物脅迫組SOD活性均比無藥物脅迫組高，見圖2（a）。

（2）對CAT活性的影響。牡蠣在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內CAT活性隨著藥物脅迫時間的延長，表現出緩慢下降的變化規律，與空白對照組相比，牡蠣組織內的CAT活性成相反趨勢，且受藥物脅迫組CAT活性均比無藥物脅迫組高，見圖2（b）。

（3）對CHE活性的影響。牡蠣在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內CHE活性隨著藥物脅迫時間的延長，表現出先上升后下降的變化規律，與空白對照組相比，牡蠣組織內的CHE活性在試驗第6 d時與空白組CHE活性變化有明顯的差異，且受藥物脅迫組的CHE活性隨受藥物脅迫時間的延長，最終呈現下降趨勢，見圖2（c）。

（4）對MDA含量的影響。牡蠣在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內MDA含量隨著藥物脅迫時間的延長，表現出波浪狀的變化規律，與空白對照組相比，牡蠣組織內的MDA含量在試驗第4 d和第6 d時與空白組MDA含量成相反趨勢，且受藥物脅迫的生物MDA含量隨受藥物脅迫時間的延長，最終呈現下降趨勢，見圖2（d）。

2.3 Hns濃度對紫貽貝SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

試驗結果顯示，Hns濃度對紫貽貝SOD、CAT、CHE活性和MDA含量有一定的影響。其中SOD活性隨著Hns質量濃度的升高，表現出波浪狀變化規律，在Hns質量濃度為5～20 mg/L和50～80 mg/L兩個范圍內變化劇烈，當Hns質量濃度高于56 mg/L，SOD活性隨濃度的升高呈下降趨勢。CAT活性隨著Hns濃度的升高，表現出先升高后下降再升高的變化規律，在Hns質量濃度為5～30 mg/L范圍內變化劇烈，最終隨著Hns質量濃度的升高，CAT活性呈升高的趨勢。CHE活性隨著Hns質量濃度的升高，表現出先升高后下降的變化規律，在Hns質量濃度為10～30 mg/L范圍內反應敏感，最終隨著Hns質量濃度的升高呈下降趨勢；MDA含量隨著Hns質量濃度的升高呈現出波浪狀的變化規律，在Hns質量濃度為10～50 mg/L范圍內變化劇烈，最終隨著Hns質量濃度的升高呈升高趨勢，見圖3（a）（b）（c）（d）。

圖2不同暴露時間下Hns對牡蠣組織內SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

2.4 Hns濃度對牡蠣SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

試驗結果顯示，Hns濃度對牡蠣SOD、CAT、CHE活性和MDA含量有一定的影響。其中SOD活性隨著Hns質量濃度的升高呈上升趨勢，整體上SOD活性對Hns反應敏感。CAT活性隨著Hns濃度的升高而呈現波浪狀變化規律，在Hns質量濃度分別為3～8 mg/L和15～25 mg/L的范圍內反應敏感。CHE活性隨著Hns質量濃度的升高，整體表現出先上升后下降的變化規律，在Hns質量濃度為3～8 mg/L范圍內出現起伏，最終CHE活性隨著Hns質量濃度的升高呈現出下降的趨勢。MDA含量隨著Hns濃度的升高呈現出波浪起伏的變化規律，在Hns質量濃度為3～20 mg/L范圍內變化劇烈，最終MDA含量隨著Hns濃度的升高呈升高趨勢，見圖4（a）（b）（c）（d）。

圖3ρ（Hns）對紫貽貝SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

圖4ρ（Hns）對牡蠣SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

3 討論

在一定濃度的Hns脅迫下，紫貽貝組織中SOD、MDA和CHE活性趨勢相似，CAT反應敏感，變化劇烈；而牡蠣組織中的各種酶反應趨勢不相似，均對Hns反應敏感。可知Hns濃度相同時，在相同時間下，牡蠣機體內酶系統受Hns的影響較大，牡蠣更易被Hns毒殺。

低濃度的Hns對兩種生物組織內的酶均有誘導作用，而兩種生物受中濃度Hns脅迫時，機體內的酶均反應劇烈，波動變化大。當受到高濃度的Hns脅迫時，紫貽貝組織中SOD和CHE活性受到抑制，MDA含量和CAT活性受到誘導；牡蠣組織中SOD活性和MDA含量受到誘導，CHE和CAT活性受到抑制。

綜上，可知Hns雖然對污損生物具有一定的抑制作用，但達不到環保防污涂料的低毒高效的要求。因此，對于Hns的研究還需要持續深入，對其優化、提效并降毒性，進而使之符合環保防污涂料的要求。