食品中霉菌和酵母計數(shù)能力驗證的結(jié)果與分析

◎ 辛雙陽，何天文

（西藏自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，西藏 拉薩 850000）

霉菌和酵母菌廣泛分布于自然環(huán)境中，它們在食品上可以作為正常菌相的一部分，或者作為空氣傳播性污染物，在不規(guī)范的消毒設(shè)備上也可被發(fā)現(xiàn)。各類食物遭受霉菌和酵母菌的侵襲，常常發(fā)生霉壞變質(zhì)，有些霉菌的有毒代謝產(chǎn)物可能引起各種急性和慢性中毒，特別是有些霉菌毒素具有強烈的致癌性。目前，已知的產(chǎn)毒霉菌有青霉、曲霉和鐮刀霉等，它們在自然界分別較廣，對食品侵襲的機會也較多。因此，對食品加強霉菌的檢驗，在食品衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義[1]。

筆者所在實驗室參加了中國檢驗檢疫科學(xué)研究院測試評價中心組織的食品中霉菌和酵母計數(shù)能力驗證，通過實驗室間比對，來評價參加者的能力，旨在提高微生物實驗室檢驗人員的檢測能力和水平，增強微生物實驗室的競爭力[2-3]。

1 材料與方法

1.1 測試樣品

食品中霉菌和酵母計數(shù)能力驗證樣品數(shù)為2個，樣品編號為20-V001和20-W761，由中國檢驗檢疫科學(xué)研究院測試評價中心提供。

1.2 試劑與儀器

9 mL 0.85%生理鹽水（批號200408），孟加拉紅瓊脂（批號080708）、高壓蒸汽滅菌鍋，生化培養(yǎng)箱，90 mm培養(yǎng)皿，電子天平。

1.3 實驗方法

按照《ACAS-PT900（2020）食品中霉菌和酵母計數(shù)能力驗證》參試指導(dǎo)書和《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 霉菌和酵母計數(shù)》（GB 4789.15—2016）[4]的要求進行操作、培養(yǎng)和計數(shù)。

1.3.1 樣品前處理

樣品需要用60 mL稀釋液再水化：樣品開啟后，立即加入5 mL稀釋液進行再水化，待充分溶解后，吸出放入無菌瓶中，再反復(fù)用余下的稀釋液清洗西林瓶內(nèi)壁，回收清洗液放入上述無菌瓶中，此溶液即是待測樣品原液（100）。為保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性，本次實驗共設(shè)計了6個稀釋梯度。

1.3.2 樣品稀釋

待到樣品原液經(jīng)過一系列處理之后，取出1 mL倒入9 mL生理鹽水試管中，充分混勻，制成10-1的樣品勻液，同法操作制備10倍稀釋樣品勻液，使其達到10-5。

1.3.3 平板計數(shù)法

在無菌條件下，將上述每個稀釋度的樣品勻液分別吸取1 mL于2個無菌平皿內(nèi)，標號為a和b。同時分別取1 mL無菌稀釋液加入2個無菌平皿作空白對照。及時將20～25 mL冷卻至46 ℃的孟加拉紅瓊脂傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。待培養(yǎng)基完全凝固后，置于（28±1）℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察并記錄培養(yǎng)至第5 d的結(jié)果。

1.3.4 計數(shù)與報告

培養(yǎng)結(jié)束后，按照GB 4789.15—2016標準和能力驗證所附的結(jié)果報告單的要求嚴格進行計數(shù)和報告。填好記錄報告單后，校核人員還要仔細查看，防止出現(xiàn)錯誤[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品檢測結(jié)果

中國檢驗檢疫科學(xué)研究院測試評價中心的2份測試樣品測試的具體結(jié)果如表1和表2。

表1 樣品Z-V001測試結(jié)果表

表2 樣品Z-W761測試結(jié)果表

2.2 能力驗證結(jié)果

此次檢測結(jié)果樣品20-V001和20-W761霉菌和酵母計數(shù)分別為250 CFU·mL-1和660 CFU·mL-1，評價值Z值分別為0.1和-0.1。通過權(quán)威的驗證組織來評價上述檢測出的相關(guān)結(jié)果，|Z|＜2為滿意結(jié)果，可見，此次評價結(jié)果是滿意的。由此可知，該實驗室具備良好的霉菌和酵母計數(shù)檢驗水平和能力。

2.3 結(jié)果分析

實驗室要做好能力驗證，檢測過程中必須控制好每一個步驟，才能保證檢驗結(jié)果的準確有效。在能力驗證實驗前需要做好前期的準備工作，包括人員安排、培養(yǎng)基和試劑、相關(guān)實驗儀器、試驗方法等。試驗用培養(yǎng)基和試劑要進行監(jiān)控，確保其在有限期內(nèi)。實驗用器材要經(jīng)過嚴格的滅菌，防止這些檢驗器材被污染，影響檢驗結(jié)果。樣品液在制備和稀釋的過程中，要確保試液混合均勻，否則影響計數(shù)結(jié)果。在實驗過程中，為避免環(huán)境因素的影響，實驗要設(shè)置空白對照組，保證實驗結(jié)果的準確性[6]。

3 結(jié)論

本次實驗室能力驗證結(jié)果為滿意，說明筆者所在實驗室測定霉菌和酵母計數(shù)時可以取得準確的結(jié)果，符合相關(guān)的質(zhì)量標準和要求，也能更好地為地方食品安全事業(yè)的健康發(fā)展貢獻應(yīng)有的力量。實驗室能力驗證是評價實驗室技術(shù)能力的一種手段，可以相對真實可靠地反映出實驗室所具備的檢測能力，同時也有助于提升實驗室的市場競爭力[7]。