口腔鱗狀細胞癌中RECK蛋白檢測及意義

高穎 楊濤 劉樂 姜日文 (第964醫(yī)院，吉林 長春 300；解放軍9333部隊)

侵襲和轉移是惡性腫瘤非常重要的指標，找到控制惡性腫瘤侵襲和轉移的方法是治愈腫瘤患者的方向。RECK基因在生物學認為可降低癌細胞活性，為一種抑癌基因〔1〕，當腫瘤細胞發(fā)生改變，開始浸潤轉移都可能使其激活，沉默表達。口腔鱗狀細胞癌(OSCC)是老年患者頭頸部常見的惡性腫瘤，前期臨床表現不明顯，惡性程度高，遠期治療效果差，發(fā)病機制仍不十分清楚。RECK在許多腫瘤中均異常表達。但在老年患者中OSCC的研究較少。本文擬分析RECK在老年OSCC患者中的表達情況及其在浸潤、轉移過程中的作用。

1 材料與方法

1.1臨床材料 56例OSCC患者選自第964醫(yī)院2005～2020年手術切除病理標本，年齡60～95歲；男30，女26例；病理學類型：高分化12例，中度分化18例，低分化26例；病理分期：Ⅰ～Ⅱ期31例， Ⅲ～Ⅳ期25例；淋巴結轉移27例，術前均未進行抗腫瘤治療。正常口腔黏膜組織41例，年齡60～84歲，其中男24例，女17例。

1.2RECK蛋白檢測方法 所有標本經10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，每塊共切3張RECK染色，1張?zhí)K木素-伊紅(HE)染色，1張磷酸鹽緩沖液(PBS)為陰性對照；在一抗鼠抗人RECK單克隆抗體(購自北京中杉金橋生物技術有限公司)工作濃度(1∶100)基礎上滴加試劑二抗 PV-6000：37℃烤箱中育 60 min，室溫下濕盒中育15 min，PBS緩沖液清洗3次；多聚賴氨酸(Pol-L-lysine)防脫片劑(購自北京中山生物技術有限公司)二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒。SP免疫組化試劑盒購自博士德生物、博奧森生物技術有限公司。結果判定：以van Heerden等〔2〕標準細胞核或細胞質內出現棕黃色顆粒者為陽性。

1.3統(tǒng)計學分析 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗及Fisher精確概率法。

2 結 果

2.1RECK蛋白陽性表達比較 OSCC組陽性高表達率〔42.86%(24/56)〕顯著低于正常口腔黏膜OSCC組〔78.05%(32/41)，P<0.05〕。

RECK蛋白在胞質與胞核內呈彌漫性淡黃色、棕黃色特異性表達，陽性細胞以上皮基底層較為密集，細胞核和細胞質均有著色，且多為強陽性表達主要表現在基底細胞層和棘層，粒層中也有部分出現陽性表達，在細胞質和細胞核均有著色呈淡黃色、棕黃色顆粒染色，在上皮基底層細胞表達較為密集。RECK蛋白在OSCC呈點片狀或區(qū)域性分布，且多為弱陽性或陰性表達。

2.2RECK蛋白表達與臨床病理關系 RECK蛋白表達與患者性別、腫瘤分化程度無明顯相關(P>0.05)，與病理分級、有無淋巴結轉移有關(P<0.05)，見表1。

表1 OSCC中RECK蛋白表達與臨床病理特征關系〔n(%)〕

3 討 論

RECK基因在人體正常組織中呈陽性表達，在一些惡性腫瘤中表達缺失。近年研究發(fā)現一種轉錄抑制基因即RECK基因可通過抑制多種基質金屬蛋白酶(MMPs)〔3〕而抑制腫瘤的侵襲與轉移。研究表明RECK基因參與了許多老年患者惡性腫瘤的浸潤和轉移，如在乳腺腫瘤、口腔腫瘤、腎腫瘤、肺腫瘤及子宮腫瘤等〔4，5〕中均發(fā)現有RECK基因的改變。且該基因與許多惡性腫瘤的浸潤、轉移和預后差有密切聯(lián)系。研究發(fā)現，RECK基因的表達受多種因素調控，已知RECK可調節(jié)MMP-2、 MMP-9 及MMP-14 3種MMPs轉錄〔6，7〕。細胞外基質(ECM)的降解與基膜重構是腫瘤侵襲和轉移中最重要的過程。有證據表明，MMPs屬于水解酶的一類，能水解所有ECM成分，對腫瘤細胞的黏附能力產生重要影響，其中MMP-2 的表達與腫瘤的侵襲能力及惡性程度密切相關，為腫瘤生物學中一個重要因素〔8～10〕。近年來，對 MMPs 抑制劑的研究已越來越引起人們的重視，目前發(fā)現MMPs有超過20種〔11〕，屬于蛋白水解酶中一個分支，依據其降解底物的產物和排列序列的不同，可將 MMPs 分為間質降解素、膠原酶等五大類。而目前對MMPs及RECK的作用機制尚不清楚。Namwat等〔12〕發(fā)現RECK在膽管正常上皮組織表達過高，鄧燕飛等〔13〕檢測了60例原發(fā)性鼻咽癌患者，伴頸淋巴結轉移組鼻咽癌的陽性表達率明顯低于慢性鼻咽癌無頸淋巴結轉移組。從而進一步提示了在鼻咽癌患者中，RECK基因的表達異常可能與鼻咽癌疾病的進展有關，參與鼻咽癌的侵襲轉移過程。RECK 可作為評估鼻咽癌頸淋巴轉移及再次復發(fā)的生物學參考指標。

RECK在一些老年人臨床腫瘤中例如顱底脊索瘤、乳腺癌及成釉細胞瘤都能發(fā)現。有研究表明RECK基因在乳腺癌中表達明顯下降，但MMP-9表達相對升高，考慮與腫瘤分期及無明顯關系。RECK基因作為一種新發(fā)現的抑制腫瘤轉移基因，在老年患者腫瘤的發(fā)展、轉移過程中起重要作用。Noda等〔14〕將通過轉染RECK基因的HTI080細胞株接種裸鼠，發(fā)現轉染RECK組的腫瘤細胞出現死亡。

綜上，RECK蛋白在老年OSCC患者中表達明顯下降，RECK蛋白表達與老年患者性別、腫瘤分化程度無明顯相關，與病理分級、有無淋巴結轉移有關。RECK基因在腫瘤侵襲轉移過程中起到重要作用。