APAP 急性肝損傷小鼠肝臟組織轉(zhuǎn)錄組RNA-seq 及相關(guān)信號通路分析

馬春麗，王 利，王羚鴻，董 超，潘海婷，包玉龍

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110）

對乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）是廣泛使用的非處方鎮(zhèn)痛藥和退熱藥的常見成分［1］。 盡管APAP 給藥劑量（4 g/d）對健康成人是安全的，但當(dāng)劑量超過10～12 g/d 時，APAP 可能導(dǎo)致急性肝衰竭（acute liver failure，ALF）［2］。APAP 過量是導(dǎo)致ALF 的主要原因， 在美國占所有ALF 的46%，在歐洲占40%～70%［3］。此外，慢性肝病患者或兒童對APAP 治療劑量的反應(yīng)可發(fā)展為一系列臨床相關(guān)肝病， 使得有意或無意的APAP 過量成為西方國家藥物誘導(dǎo)肝損傷（DILI）最常見的原因［4］。近年來，對乙酰氨基酚肝毒性的分子機(jī)制得到了廣泛研究，但對APAP 誘導(dǎo)的ALF 的具體分子機(jī)制尚不清楚［5-6］。 該研究建立了APAP 誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠模型， 并對損傷后第2 天的損傷肝臟組織轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行RNA-seq， 試圖探究在急性肝損傷發(fā)生發(fā)展過程中相關(guān)基因和信號通路。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

雄性C57BL/6J 小鼠6 只， 隨機(jī)分為2 組，每組3 只，分別為正常小鼠組（對照）、APAP 急性肝損傷小鼠損傷后第2 天模型組。 實(shí)驗(yàn)用小鼠購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司。

1.2 試驗(yàn)材料

APAP（Sigma，美國），Trizol RNA 提取試劑盒（Invitrogen，美國），NEBNextUltraTMRNA 文庫制備試劑盒（BioLabs，英國），UltraPure 瓊脂糖（Invitrogen，美國）等。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 動物模型建立 選擇6 周齡雄性C57BL/6J野生型小鼠經(jīng)過1 周適應(yīng)環(huán)境的飼養(yǎng)， 模型組腹膜內(nèi)注射200 mg/kg APAP 溶液，建立急性肝損傷模型。 建模后第2 天，對小鼠進(jìn)行異氟烷麻醉，解剖肝臟。 解剖前，小鼠停止進(jìn)食12 h，自由飲水。

1.3.2 組織RNA 提取 小鼠肝臟組織在液氮中研碎。 按照TRIzol RNA 提取試劑盒說明書，提取RNA，-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩楸O(jiān)測RNA 降解和污染，進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳。……